抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发醇条件的研究

重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(seFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究.结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培养菌体生长至A60onm为0.8时,42℃诱导表达6h,scFv表达量可达33.7%.工程菌在无选择压力条件下连续传代120代,保持稳定,100%的菌株携带重组质粒且经诱导后均有重组抗体的表达.     

两种抗菌剂对不同温度下形成的单增李斯特菌生物膜的清除作用

该研究考察单增李斯特菌在32℃和10℃下生物膜的形成,并以1/2、1、2、4 MIC(minimum inbibitory concentration,最低抑菌浓度)的薰衣草精油和84消毒液处理单增李斯特菌的生物膜,以结晶紫染色法、二甲氧唑黄法(XTT法)及叠氮溴化丙锭-荧光定量PCR(PMA-qPCR)等方法评估其清除效果。研究结果表明,单增李斯特菌在两种温度下均能形成稳定的生物膜,32℃下形成的生物膜量显著高于10℃; 4种浓度薰衣草精油处理3 h对32℃下形成的生物膜的清除率为62%～82%,对10℃的生物膜的清除率为25%～56%; 4种浓度84消毒液处理3 h对32℃和10℃下形成的生物膜的清除率分别为47%～78%和36%～56%; 4 MIC(6. 4%体积分数)的薰衣草精油处理3 h后10℃生物膜的残余活菌数为32℃生物膜的2倍以上。该研究阐明了单增李斯特菌的低温生物膜抗性更强,薰衣草精油对生物膜的清除效果优于84消毒液,对植物精油的应用以及控制单增李斯特菌残留具有积极的意义。     

卵黄抗体体内代谢及中和毒素研究进展

食品和饲料若加工、贮藏不当易产生大分子蛋白毒素和小分子毒素。许多研究者在食品和饲料中开始采用添加营养成分的方式来降低毒素毒性和预防其诱发疾病。卵黄抗体具有与抗原特异性结合的生物学特性,作为营养添加剂在中和毒素、治疗病毒和细菌性疾病等方面已得到广泛的应用。本文主要对卵黄抗体活性影响因素、体内代谢和中和蛋白大分子毒素等方面的研究进展以及发挥保护作用机制方面进行综述,最后分析讨论了卵黄抗体对小分子毒素的降毒效应研究现状和应用前景。抗毒素卵黄抗体有望被开发成口服解毒制剂,为降低食品和饲料中毒素毒性增添新的途径。     

化学作用力对皮蛋蛋黄凝胶形成的影响

采用清料法腌制皮蛋,利用荧光光度计、傅里叶红外光谱(FTIR)等技术监测腌制和后熟过程中化学作用力对蛋黄凝胶形成的影响。结果表明:在强碱作用下,外层蛋黄蛋白质二级结构α-螺旋与β-折叠之和下降了54.17%,表面疏水性显著降低(P0.05),离子键和二硫键含量的显著增加(P0.05)促使蛋白质发生交联聚集生成外层蛋黄凝胶;溏心蛋白质二级结构α-螺旋与β-折叠之和上升了54.05%,表面疏水性下降不明显(P0.05),疏水相互作用及二硫键含量的显著增加(P0.05)促使溏心逐渐转化为外层蛋黄,增强了蛋黄凝胶强度;凝胶电泳结果显示,外层蛋黄蛋白质较溏心蛋白质先发生碱变性,其中较稳定存在的蛋白质为高密度脂蛋白。     

单枞茶酒发酵工艺研究

以单枞茶为原料,通过茶酒酵母发酵茶汁制备出一种茶酒,并对发酵工艺进行了优化。首先通过单因素试验分别对三个重要因素(酵母接种量、发酵温度及发酵液初始p H)对发酵液中糖度变化的影响进行考察,优选出各因素适宜的数值范围。然后通过混合因素水平均匀试验考察了这三个因素对茶酒感官评价指标的影响,用SAS软件对试验数据进行拟合模型并作回归分析,得到显著预测模型,并确定酵母接种量对茶酒感官评分有显著影响。接着,通过典型相关分析并结合验证试验,最终确定当酵母接种量为3.1%,发酵温度为21℃,发酵液初始p H为3.3时,茶酒感官评分值最高,均值为96.67。最后,对最优发酵工艺获得的茶酒进行了质量检测。     

脱乙酰魔芋葡甘聚糖性质及其脂类结合能力研究

采用红外及X-衍射等分析手段表征魔芋葡甘聚糖(KGM)与脱乙酰魔芋葡甘聚糖(Da-KGM)结构并比较其持水性和粘度,以纤维素为对照,采用体外模拟人体胃及肠道的pH环境,对比分析KGM及Da-KGM对脂肪及胆固醇的吸附能力。结果显示KGM脱乙酰基后1733 cm~(-1)处的乙酰基的特征吸收峰消失,结晶度增加,持水性下降83.7%,高粘度特性丧失;相比纤维素,KGM具有良好的脂肪及胆固醇吸附能力,其吸附总量随样品质量、吸附时间和胆固醇浓度的增加而增大,与天然KGM相比,Da-KGM的脂肪及胆固醇吸附能力降低,可能是因为KGM脱除乙酰基后KGM分子链间氢键作用加强致使与脂类结合位点减少,以及高粘度特性消失致使对脂类的直接包裹能力下降,提示KGM经脱乙酰加工成魔芋食品后在肠道与脂类的结合能力下降,其减肥降脂的生理功效可能受到影响。     

响应面试验优化动物源性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测的衍生条件

利用响应面法优化酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测呋喃西林代谢物前处理的衍生条件。根据Box-Behnken试验设计原理,在单因素试验基础上,以呋喃西林代谢物回收率为响应值,应用响应面分析法研究衍生剂体积、衍生剂浓度、衍生温度和衍生时间各因素间的交互作用及对呋喃西林代谢物回收率的影响。最终确定ELISA方法线性检测范围为0.13~10.51 ng/m L,IC50为1.17 ng/m L;在选取样品质量为2 g时,最佳衍生条件为衍生剂体积415μL、衍生剂浓度15 mmol/L、衍生温度57℃、衍生时间50 min,实际回收率为98.57%~103.76%;衍生产物与呋喃西林原药交叉反应率为7.63%,与其他结构类似物、功能类似物及衍生剂交叉反应率均小于0.17%;加标回收率为93.45%~103.21%,批内变异系数为1.86%~6.15%,批间变异系数为3.88%~8.84%。该衍生条件高效,检测方法准确可靠,适用于动物源性食品中呋喃西林代谢物的快速筛查。     

抗克伦特罗核糖体展示单链抗体库的构建及鉴定

构建大容量核糖体展示抗克伦特罗单链抗体(single-chain fragment variant,scFv)文库,为进一步筛选抗体奠定基础。用克伦特罗人工抗原免疫小鼠,分离其脾细胞;Trizol法抽提总RNA,反转录成cDNA,PCR及重叠延伸PCR法构建核糖体展示scFv 文库。再通过PCR和重叠延伸PCR在scFv文库序列5＇端添加T7启动子、茎环结构、核糖体结合位点,3＇端添加间隔区序列(T20-V109)、茎环结构构建核糖体展示抗克伦特罗scFv文库。核糖体展示scFv文库与Easy T3载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选,挑取5个阳性克隆双酶切和测序鉴定。结果表明：用于建库材料的免疫小鼠效价为1:128000;成功扩增重链可变区基因大约为360bp和轻链可变区基因大约为330pb;核糖体展示scFv文库基因大约1200bp;库容量达1.75×1013;阳性重组质粒均含有1200bp插入片段;利用IMGT/V-QUEST数据库对单链抗体可变区进行序列分析结果表明,重链可变区和轻链可变区基因均由胚系基因重排得到,且与鼠源胚系基因同源率都达84%以上;氨基酸序列比对结果表明,重链可变区氨基酸序列同源率为37.82%,轻链可变区氨基酸序列同源率为39.09%。其中多样性主要发生在VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。成功构建了大容量抗克伦特罗单链抗体核糖体展示文库。     

雪梨瓜籽油营养品质及抗氧化活性分析

以乐平雪梨瓜籽为原料,采用溶剂法从烘干的雪梨瓜籽中提取油脂并进行基本理化指标测定,通过气相和液相色谱方法对雪梨瓜籽油的脂肪酸组成、甘油三酯、生育酚、甾醇组成等营养成分进行分析,评价其抗氧化活性。结果表明:雪梨瓜籽油的基本理化指标均符合国家食用油标准;其不饱和脂肪酸含量为83.16%,其中油酸和亚油酸含量分别为12.8%,69.9%,且多不饱和脂肪酸含量达70.277%;共检出16种甘油三酯,其中不饱和脂肪酸甘三酯约占甘油三酯总量的85%;甾醇含量达4 154.49mg/kg,其中谷甾醇含量最高;生育酚含量为951mg/kg,主要为α-和γ-生育酚,并含有丰富的矿质元素;且雪梨瓜籽油清除DPPH自由基的能力达92.31%,具有良好的抗氧化能力。     

壳寡糖通便功能的研究

研究壳寡糖对小鼠通便功能。将昆明雄性小鼠按体重随机分成空白对照组、模型对照组和3个剂量组。剂量组分别经口给予低、中、高剂量(99.2、198.4、396.8 mg/(kg·d))壳寡糖溶液;空白对照组和模型对照组给予蒸馏水,干预时间为7 d。用盐酸洛哌丁胺造小鼠便秘模型。观察各组小鼠的小肠墨汁推进率、首粒排黑便时间、6 h黑便粒数和6 h黑便重量以及粪便含水量。结果表明:与模型对照组比,壳寡糖中剂量组小肠墨汁推进率和6 h黑便重量显著增加(p0.05);壳寡糖高剂量组小肠墨汁推进率极显著增加(p0.01)、首粒排黑便时间极显著缩短(p0.01)、6 h黑便重量与6 h黑便粒数显著增加(p0.05);在粪便含水量上,各剂量组同空白对照组、模型对照组比无显著性差异。壳寡糖能有效增强小鼠肠道蠕动并促进排便,具有通便功能。