苯丙氨酸生物合成关键酶基因pheA与aroF协同表达

目的:优化L-苯丙氨酸生物合成通路上的关键酶基因pheA、aroF的蛋白表达,构建高产L-苯丙氨酸的工程菌株。方法:通过设计酶基因的间隔调控序列,分别构建重组质粒pZE12-RBS-AF和pZE12-AF,SDS-PAGE观察蛋白表达量,转入营养缺陷菌MGΔ中构建工程菌,并发酵培养。结果:工程菌MGΔpZE12-AF苯丙氨酸的产量比工程菌MGΔpZE12-RBS-AF高1倍,实现了L-苯丙氨酸生物合成关键酶基因pheA和aroF协同,匹配表达。结论:调整串联酶基因之间的间隔调控序列可实现苯丙氨酸合成酶基因的协同表达,提供了一种新的提高苯丙氨酸工程菌产量的方法。     

佐米曲普坦合成工艺的研究

在合成工艺上以L-苯丙胺酸为起始原料,经7步反应,合成偏头痛治疗新药佐米曲普坦。本实验主要研究由中间体(S)-4-(4-肼基苯甲基)-1,3-口恙唑啶-2-酮和二甲胺基丁缩醛合成佐米曲普坦。此实验路线简单,收率高。操作简便,是目前较佳的制备佐米曲普坦的合成工艺方法。     

HP20大孔吸附树脂对L-苯丙氨酸吸附条件的研究

文章研究了HP20大孔吸附树脂对L-苯丙氨酸的吸附性能.通过实验,确定了HP20大孔吸附树脂对L-苯丙氨酸吸附的最佳工艺条件.在事温下,采用2 g/L L-Phe和0.5～0.75 mol/L NH<,4><'+>、pH为6.0的溶液作为上柱液,在2.0BV/h吸附流速下经过HP20大孔吸附树脂柱,99%L-Phe被吸...     

功能化β-环糊精包合L-苯丙氨酸印迹聚合物的制备及性能分析

文中建立了-种新型的L-苯丙氨酸（L—Phe）印迹聚合物的制备方法,采用饱和水溶液重结晶法制备功能化β-环糊精-L-苯丙氨酸包合物,通过紫外分光光度法、傅里叶红外光谱、热重．差示扫描量热分析法等检测手段对包合物进行表征．首次在包合物研究基础上加入辅助功能单体、交联剂、复合光引发剂在混合有机相中制备了L-苯丙氨酸分子印迹聚合物并且能够成功洗脱进行再吸附．结果表明,常温下每20mg包合印迹聚合物、未包合印迹聚合物以及非印迹聚合物的饱和吸附量分别为179．3μmol／g、146．36μmol／g和64．65μmol／g．     

组成型天冬氨酸转氨酶基因工程菌的构建与高效表达

天冬氨酸转氨酶AspAT是苯丙酮酸转氨制备L-苯丙氨酸的关键酶. 本研究将大肠杆菌中天冬氨酸转氨酶基因aspC克隆到3种不同质粒中，构建组成型表达质粒pUC/P-aspC, pSE/P-aspC, pET/P-aspC，并分别转化至6种常用的大肠杆菌宿主中. 通过对18种重组子的生长及产酶情况的分析，比较了各种重组子生长压力、质粒稳定性与表达酶活的关系，并经SDS-PAGE电泳分析AspAT的表达量，筛选出高产AspAT的重组子BL21(pET/P-aspC)，以该工程菌发酵液直接作为酶液，以天冬氨酸和苯丙酮酸(20 g/L)为底物，发酵液与底物以1:3的体积比转化生成L-苯丙氨酸16.2 g/L，转化率高达80.1%. 该体系表达无需诱导，转化无需添加辅酶PLP，展现了良好的产业化前景.     

微波促L-苯丙氨酸消旋反应研究

介绍了微波促L-苯丙氨酸消旋反应是一种新的可适合于工业化的生产方法，具有对环境友好的优点。使用微波作为热源不仅可加速反应和节约能源，也可提高反应的收率和产品的纯度。本方法确定了在微波辐射下，以1．0mol／L氢氧化钠水溶液替代低级脂肪酸作为反应溶剂，用物质的量比为0．10的水杨醛为催化剂，L-苯丙氨酸可以快速消旋；在此务件下，消旋反应随微波辐射功率的提高而加快，在66％输出功率下反应已接近最大反应速率。从实验中得出微波促L-苯丙氨酸消旋的反应是一级不可逆反应。考察了此消旋反应的影响因素，同时讨论了微波作用下L-苯丙氨酸的消旋反应机理。     

甲醇-水溶剂中L-苯丙氨酸结晶热力学

在293.15~322.15 K温度范围内，研究L-苯丙氨酸无水物在甲醇-水混合溶剂中溶解度和超溶解度特性，得到L-苯丙氨酸无水物结晶介稳区，计算了成核级数及成核速率，考察了不同初始温度和降温速率对介稳区宽度的影响，并通过研究L-苯丙氨酸297.15 K和302.15 K的转晶水活度，依据溶解度特性绘制L-苯丙氨酸-甲醇-水在该温度下的三元相图。溶解度数据用Apelblat方程、λh方程关联、van t Hoff方程拟合。结果表明，L-苯丙氨酸无水物溶解度随温度的升高而增大，随甲醇体积分数的增加而减小；L-苯丙氨酸无水物结晶介稳区宽度在相同条件下，随初始温度的升高，降温速率的降低变窄；L-苯丙氨酸转晶水活度随温度的升高而增大。     

L-苯丙氨酸酶法制备中的动力学研究

为研究酶法生产L-苯丙氨酸工艺中影响收率的主要因素,提高L-苯丙氨酸的收率,对该反应过程的动力学进行了研究。研究中采用实验检测和动力学模拟的方法获取了转化反应中的主要动力学参数。研究这些参数和L-苯丙氨酸收率间的关系发现,达到L-苯丙氨酸最大收率的前提条件是草酰乙酸的浓度趋近于0。在此前提条件下,将苯丙酮酸的浓度选在0.10~0.15 mol/L,提高体系中酶活性,降低苯丙酮酸的降解常数,可以提高体系中L-苯丙氨酸的收率。以此规律为指导,构建了合适的基因工程菌,其转氨酶活性提高4.6倍,苯丙酮酸的降解常数降低到0.0158 h-1,选择c(苯丙酮酸)=0.137 mol/L充N2的条件下进行反应,其L-苯丙氨酸收率提高到90.2%。     

L-苯丙氨酸为模板碳酸钙纳米晶体的生长

用L-苯丙氨酸为模板,氯化钙和碳酸钠反应而制备碳酸钙纳米晶体,采用红外光谱和粉末X-射线衍射方法对其进行表征,通过扫描电镜观察纳米晶体的形貌,研究反应温度和L-苯丙氨酸浓度对碳酸钙纳米晶体的晶型和形貌的影响。研究表明:随着温度和L-苯丙氨酸浓度的升高,高能量晶型的含量增加,说明升温和增加L-苯丙氨酸浓度能够促进稳定碳酸钙晶型的生长。