长鳍金枪鱼多肽制备及其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用

目的:以长鳍金枪鱼废弃物为原料提取多肽,探究其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用。方法:以H2O2诱导张氏肝细胞损伤建立细胞模型组,以相对增殖率为指标筛选长鳍金枪鱼废弃物最适酶种,通过正交试验确定最佳酶解条件。酶解产物经超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱方法纯化分离得到多肽,用噻唑蓝(MTT)比色法对其每步分离效果进行评价。多肽活性的评价是利用试剂盒方法测定张氏肝细胞上清液中AST、ALT、MDA、ADH和SOD的含量,倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测多肽对H2O2诱导后的张氏肝细胞凋亡的影响。结果:最适酶种为胰蛋白酶,最佳酶解条件为料液比1∶3(g/mL),pH 9,加酶量900 U/g,温度45℃,时间5 h。经一系列纯化后制成多肽,命名为长鳍金枪鱼多肽。其氨基酸序列为Gly-Ala-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Lys-Cys-Phe-Lys。经长鳍金枪鱼多肽作用于H2O2诱导的张氏肝细胞后,ALT、AST、ADH和MDA含量下降,SOD含量上升。通过流式细胞仪检测发现晚期凋亡细胞相比于模型组减少明显。结论:利用酶解方法提取的长鳍金枪鱼多肽对H2O2损伤的张氏肝细胞具有一定的保护作用。     

外来人口参加村委会选举的法律分析

2010年新修订的《村民委员会组织法》首次赋予了符合条件的外来人口在流入地参加村委会选举的权利,保障了外来人口参与公共管理的权利。但外来人口的选举权利并不会止于选举本身,而是会以"村委会"为支点,进一步触及本地各个领域的事务甚至利益,加之在农村村委会与村集体经济组织之间关系模糊、职权不清,必然会引发外来人口与村民的权利冲突。对外来人口各项权利的明确界定,要先建立规范的村集体经济组织,并明确村委会与村集体经济组织各自的职权职责范围。     

双齿围沙蚕多肽的制备及其抗肺癌A549细胞活性

探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1~3 ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化。采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化。实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶,其最佳酶解条件为:酶解温度50℃、pH 11、料液比1∶1(g/mL)、酶解时间6 h、加酶量300 U/g。经纯化获得的多肽命名为PAP,其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe,且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此,PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

双齿围沙蚕抗凝血肽的制备及其抗血栓作用

目的:探讨双齿围沙蚕抗凝血肽(anticoagulant peptides from Perinereis aibuhitensis,PAAP)的制备及其抗血栓作用。方法:以抗凝活力为检测指标,筛选最佳酶对沙蚕进行酶解。酶解产物经超滤、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱法分离纯化,得到具有最强抗凝活力的沙蚕寡肽,将此肽命名为PAAP并测定其急性毒性作用。采用角叉菜胶所致的小鼠尾部血栓形成实验、三氯化铁所致的大鼠动脉血栓形成实验及二磷酸腺苷(adenonisine disphosphate,ADP)诱导的血小板聚集实验,研究PAAP的抗血栓作用。结果:选取碱性蛋白酶作为最佳酶对沙蚕进行酶解,经过分离纯化后得到一条氨基酸序列:脯氨酸-缬氨酸-谷氨酸-精氨酸-赖氨酸(Pro-Val-Glu-Arg-Lys)。经测定,该寡肽的体外抗凝活力可达(1 320.0±20.3)U/g。PAAP的最大耐受量为11.0 g/(kg·d)且未出现小鼠异常及死亡现象,体内实验表明PAAP对小鼠尾部血栓的形成、大鼠动脉血栓的形成及ADP诱导的血小板聚集均有明显抑制作用。结论:从双齿围沙蚕中提取出的抗凝肽PAAP具有抗血栓作用。     

文蛤寡肽对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作用

目的：研究文蛤寡肽（Meretrix meretrix oligopeptides,MMO）对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作 用。方法：建立高脂饲料致小鼠慢性肾损伤模型,通过MMO灌胃30 d后,测定小鼠肾脏指数,检测小鼠血清甘 油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）浓度,以及小鼠肾组织 匀浆中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px） 活力和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,计算小鼠动脉粥样硬化指数（atherosclerosis index,AI）,苏木 素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察小鼠肾脏病理学改变,免疫组化法测定肾组织α-平滑肌肌动蛋白 （α-smooth muscle actin,α-SMA）、转录生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）蛋白表达量。 结果：MMO组与模型组比较,小鼠肾脏指数,血清中TG、TC、LDL-C浓度及AI显著下降,HDL-C浓度显著升 高,肾组织匀浆中SOD、GSH-Px活力显著升高,MDA含量显著降低,HE染色观察肾组织结构明显好转,免疫 组化结果显示MMO可降低肾损伤小鼠α-SMA、TGF-β1蛋白表达水平。结论：MMO对高脂饮食诱导的小鼠肾损 伤有较为明显的修护作用。     

硅橡胶海绵材料孔隙结构对力学性能的影响

采用不同方法制备了两种密度且孔隙率相近、孔隙结构不同的硅橡胶海绵材料,表征了其孔隙结构的差异,研究了两种孔隙结构明显不同的硅橡胶海绵材料力学性能的差异。结果表明。硅橡胶海绵材料的孔隙结构对拉伸强度、拉断伸长率、压缩应力应变及压缩应力松驰等力学性能有较大的影响。     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

具有自由基清除活性的鱿鱼皮胶原蛋白肽酶解工艺研究

以蛋白水解度和羟自由基清除率为指标,采用胰蛋白酶法提取秘鲁鱿鱼皮中的胶原蛋白肽,并通过单因素试验和正交试验优化了鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺条件,同时测定了鱼皮的基本组成成分.结果表明,加酶量5％,酶解时间7h,酶解温度50℃,pH值8.0,酶解效果最好.此条件下,鱿鱼皮胶原蛋白肽的水解度为26.1％,羟自由基清除率为83.3％,在医用保健食品和抗衰老美容护肤产品上具有很好的实用价值.     

氧化锌晶须在纯化学发泡制备硅橡胶泡沫中的应用研究

采用氧化锌晶须增强改善硅橡胶,运用纯化学发泡技术制备硅橡胶泡沫材料.研究了氧化锌晶须对硅橡胶混炼胶塑性值、硅橡胶泡沫泡孔结构及分布和泡沫压缩应力松弛性能的影响.结果表明:氧化锌晶须用量对硅橡胶混炼胶塑性值影响不大,氧化锌晶须可以改善泡沫泡孔结构和分布,明显降低了硅橡胶泡沫材料的压缩应力松弛性能.     

用EP可膨胀微球制备硅橡胶海绵

介绍一种有别于用传统热硫化和室温硫化制备硅橡胶海绵的新方法。该方法使用EP可膨胀微球作发泡剂，既可室温硫化也可高温硫化制备硅橡胶海绵，而且可以将发泡剂膨胀后再加入胶料。与传统方法相比，该方法更容易控制材料密度，并可较容易地制备复杂形状的硅橡胶海绵制品。