耐高温β-半乳糖苷酶产生菌诱变和突变菌株产酶特性

以产β-半乳糖苷酶嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus XG24为原始菌株,先后经微波辐照、亚硝基胍(NTG)诱变,选育获得1株高产突变菌株XGN52。产酶量比原始菌株提高了115.92%,其最大产酶量为31.59U/mL。经过10次传代实验,稳定性良好。突变菌株XGN52最适发酵时间36h,初始pH7.0,温度42℃。与原始菌株相比,突变株XGN52的产酶特性发生了改变。研究结果显示采用微波和NTG复合诱变对提高β-半乳糖苷酶产量具有显著的效果。     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱（Sephadex G-10）和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对抗菌物质鉴定。本研究从土壤中分离出67 株芽孢杆菌。其中8 株表现出较强的抗菌作用,菌株XF32表现出显著广谱抑制活性,并鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株XF32对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌7 种病原菌具有抗菌活性,对酿酒酵母、黑曲霉、深绿木霉和尖孢镰刀菌有抗真菌活性。经诱变筛选得到突变菌株XF32-22,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比原始菌株显著提高,分离纯化抗菌物质,得到单一的抗菌成分。MALDI-TOF-MS分析表明抗菌物质为Fengycin系脂肽化合物。采用复合诱变技术,可以有效地提高地衣芽孢杆菌脂肽的产量。成功分离得到对多种病原细菌具有较强抑制作用的Fengycin类脂肽,同时该菌株在拮抗植物病原真菌方面也有明显效果。XF32-22菌株在食品保鲜和农业生物防治方面具有很好的应用前景。     

山药分子分类研究

提取山药基因组和叶绿体DNA作为模板,分别扩增山药核糖体18S rDNA和叶绿体核糖体16S rDNA片段.测序获得1646bp的山药核糖体18S rDNA和1351bp的山药叶绿体核糖体16S rDNA,GenBank登录号分别是JF703101和JF703100.将以上两个基因片段分别与GenBank中的一些物种的相关序列进行序列对比,结果表明,18S rDNA序列相似度较大,物种间差异较小.而叶绿体16S rDNA序列在分析不同科的物种演化关系上有较高的分辨率,为分子水平上山药资源的研究提供了资料.     

用于高果糖浆制备的宛氏拟青霉嗜热嗜酸菊粉酶酶学特性分析

为实现酶法水解菊糖制备高果糖浆,从宛氏拟青霉（Paecilomyces variotii）XS27发酵液中分离纯化菊粉酶,并对其酶学特性进行研究。发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow层析、Sephacry S-100分子筛过滤层析,得到电泳纯的菊粉酶,比活力327.4 U/mg,纯化倍数37.85。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳测得菊粉酶为单一亚基的酶蛋白,分子质量62.0 kDa。菊粉酶能在较宽的pH值范围（3.5～6.5）内保持高活性,最适作用pH 4.0。在温度40～65 ℃之间,酶活力较高,最适作用温度为60 ℃。薄层色谱分析显示菊粉酶水解菊糖最终产物为果糖。以菊糖为底物,酶的Km和Vmax分别为5.93 μmol/L和75.18 μmol/（L·min）。Mg2＋、Mn2＋、Ca2＋对酶有显著激活作用,Ba2＋、Ni2＋和Hg2＋对酶有一定抑制作用。β-巯基乙醇、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸对酶有抑制作用,表面活性剂（十二烷基硫酸钠、Tween 80和Trition X100）以及乙醇对酶活力没有影响。从宛氏拟青霉XS27发酵液中分离纯化的菊粉酶在强酸高热的环境下具有强活性和稳定性,对表面活性剂乙醇有高耐受性,适合于果葡糖浆的工业化生产。     

鲫鱼肠道细菌菌群初步分析

从健康鲫鱼肠道分离出62 株细菌菌株,革兰氏染色分析结果表明,其中18 株为革兰氏阳性菌株,44 株为革兰氏阴性菌株。实验分析各菌株产纤维素酶和产淀粉酶的情况。筛选到26 株产淀粉酶菌株,占筛选菌株的41.94%,没有从鲫鱼肠道内筛选到产纤维素酶菌株。使用16S rDNA 基因序列检测,确定相关菌株分别属于Aeromonas、Shewanella、Pseudomonas 等。分析产酶活性较高的菌株F2 的致病性和产酶活力,确定其不是鲫鱼致病菌,其分泌性淀粉酶在pH7、温度32℃时表现出最大酶活力。     

一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定

采用异步培养法,从土壤样品中筛选到一株产抗菌物质活性较强的菌株F69．结合菌落形态、生理生化指标和16SrDNA序列分析对菌株F69进行菌种鉴定．菌株F69在系统发育上属于芽孢杆菌属,它和地衣芽胞杆菌菌株的16SrDNA序列相似性最高为99％,该菌株被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）．菌株F69可作为抗菌物质产生菌进行进一步深入研究．     

黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

生物表面活性剂产生菌发酵液中糖含量的测定

采用苯酚-硫酸法测定鼠李糖脂生物表面活性剂产生菌发酵液中的总糖含量，研究了显色温度、显色时间、苯酚及硫酸用量对测定的影响。通过试验确定了较佳测定条件：100℃显色15min，苯酚用量1．0mL，硫酸用量5．0mL，于482肿处测定。结果表明，用此方法测定鼠李糖脂生物表面活性剂产生菌发酵液中的总糖含量时，其吸收值与鼠李糖质量浓度（在0～0．04g／L）呈良好的线性关系，相关系数为0．9969，加样回收率为100．5％（n=5）。     

胞外弹性蛋白酶的理化特性及其影响因素

分离得到的假单胞菌(Pseudomonas sp) 菌株具有较强的分泌胞外弹性蛋白酶的能力。经微生物发酵方法生产的弹性蛋白酶,经过盐析、透析、DEAE SephadexA2 5离子交换层析、SephadexG75凝胶过滤层析等纯化步骤,从其发酵液中得到了均一的酶制品。研究结果表明,酶的最适作用温度为5 0℃;在硼砂-硼酸缓冲液中最适作用pH为8 0左右;酶在碱性环境下( pH7 0～12 0 )稳定性较好;在37℃以下,酶的稳定性较高。超过6 0℃,酶在短时间内即失活     

不同产地余甘子多酚类成分HPLC指纹图谱分析研究

为探索不同产地余甘子质量的有效鉴别方法,以贵州、陕西、四川、云南、江西和广东6个不同产地的余甘子为原料,采用高效液相色谱分析建立HPLC指纹图谱,提取33个指纹图谱共有峰,通过保留时间确定了没食子酸色谱峰,运用相似度评价软件对6个不同产地余甘子进行相似度比较与归类,结果显示各产地余甘子的指纹图谱比较相似,广东、江西、贵州、陕西、四川、云南等产地余甘子的相似度分别为0.890、0.897、0.993、0.995、0.995、0.997,聚类分析表明江西和广东产地的余甘子与另外4个产地的余甘子有较明显的差别。通过主成分分析对余甘子的HPLC信号进行特征提取,建立特征信号峰与余甘子质量间的对应关系,为余甘子的科学评价和质量控制提供新的方法。