壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌外膜蛋白K微球疫苗的制备及其口服免疫效果

目的制备壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,omp)K微球疫苗,并检测其对大黄鱼的口服免疫效果。方法采用乳化-离子交联法制备副溶血弧菌ompK微球疫苗,筛选表面活性剂司盘-80添加量及壳聚糖包被浓度,经正交试验优化微球疫苗的制备工艺,筛选微球疫苗的冻干保护剂。检测采用优化条件制备的微球疫苗的理化特性及其在不同条件下的释放特性,并将微球添加到饵料中,连续5 d投喂大黄鱼,第28天以副溶血弧菌zj2003攻击,检测口服微球疫苗的免疫保护率。结果最适司盘-80添加量为2%~4%,壳聚糖包被浓度为0.6%~0.7%;优化的微球疫苗制备条件为:抗原蛋白浓度10 mg/ml,海藻酸钠浓度1.0%,水油比1∶2,搅拌速度2 000 r/min;微球疫苗的最佳冻干保护剂为2%甘露醇;以优化的条件制备的微球圆整性、分散性好,平均直径为(1.91±1.02)μm,表现出酸性条件稳定、中性和弱碱性条件溶胀的特性;微球疫苗口服免疫的大黄鱼对副溶血弧菌zj2003攻击表现出中等程度的保护力。结论制备了壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌ompK微球疫苗,并验证了其口服免疫的有效性,为鱼类口服弧菌疫苗的研制及应用奠定了基础。     

3种磷含量测定方法的比较

目的比较3种A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中磷含量测定方法的差异,为今后方法的选择及进一步优化提供参考。方法对《中国药典》三部(2010版)附录中的磷测定法(方法1)、高分子结合物含量测定法(方法 2)、文献中的磷测定法(方法 3)这3种方法的标准曲线、测定磷酸二氢钾对照品中磷含量、测定A群多糖、A群衍生物、A群结合物中磷含量以及标准曲线增加两个低浓度点的差异进行比较。结果不同人员采用同一方法绘制的标准曲线的斜率(b)的变异系数(CV)均小于10%,相关系数(r2)均在0.995以上,CV值在0~0.23%之间,其中方法 2标准曲线b值的CV值小于1%,且r2值与其他两种方法相比更稳定;3种方法测定同一份磷酸二氢钾对照品的结果与理论值相比,相对误差均在10%以下,其中方法 2的相对误差最小,为5.73%;3种方法测定A群多糖、A群衍生物、A群结合物中磷含量的CV值均小于10%;3种方法的标准曲线增加两个低浓度点后,b值及r2值的CV值均小于10%,与原标准曲线近似。结论 3种方法测定磷含量的标准曲线均具有良好的线性,不同操作人员的测定结果无明显差异,其中方法2测定A群脑膜炎球菌多糖、A群脑膜炎球菌多糖衍生物及A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中的磷含量时,稳定性较好,操作简便易行。     

酶标板法检测甘油三酯净含量方法的优化、验证及其在人血白蛋白层析纯化工艺中的应用

目的优化酶标板法检测甘油三酯(triglyceride,TG)净含量的方法,进行验证,并将其应用于监测人血白蛋白层析纯化工艺中样品的脂类含量,对工艺优化提供指导。方法建立酶标板上快速检测TG含量方法,通过两步酶反应的吸光度值的差值计算TG净含量。确立该方法的标准曲线范围,并进行准确度和精密度进行验证。采用该方法监测层析工艺中样品的TG净含量,优化人血白蛋白层析纯化工艺。结果该方法检测TG的线性范围在78~2 500μg/ml之间,游离甘油(free glycerin,FG)的线性范围在8.13~260μg/ml之间,R2均为0.997。各样品检测结果 CV均4%,回收率在102%~107%之间,准确度较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次和由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的结果,CV均3%,精密度较好。在人血白蛋白层析纯化工艺中采用去脂剂可将白蛋白样品中的残余脂类去除。结论优化后的甘油三酯净含量检测方法为人血白蛋白层析纯化工艺的优化提供了指导,在血液制品工艺研发过程中具有重要的应用价值。     

人葡萄糖调节蛋白78基因磷酸化位点的真核突变载体的构建及表达

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换,466位酪氨酸(Y)用苯丙氨酸(F)替换,以质粒pEGFP-N1-GRP78为模板,进行PCR扩增后,构建突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F),并进行DNA测序分析。将测序正确的突变质粒转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法检测融合蛋白在细胞中的表达。结果突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F)经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;突变质粒组荧光蛋白表达分布于细胞质内,细胞核内无表达产物分布;3个突变质粒转染组在相对分子质量约105 000处均可见目的蛋白条带,大小与预期相符。结论成功构建了人GRP78单突变T203A、Y466F和双突变T203A/Y466F真核表达载体,并可在肝癌SMMC-7721细胞中表达,为进一步研究GRP78基因磷酸化位点T203、Y466在肝肿瘤侵袭和转移中的作用奠定了基础。     

生物医药产业概述

全球医药产业增速变缓促使国际医药巨头加大对生物医药产业的投资。生物医药在全球范围内掀起研发热潮,中国作为新兴市场的主力,表现尤为抢眼。抗体、疫苗、重组蛋白三大主力生物医药产品在销售额和上榜数量上不断刷新全球畅销药品榜单。我国生物医药产业起步虽晚,但已获长足进展。该文从生物医药研发、市场、企业层面报告了国内外生物医药产业现状。     

灰树花多糖Sevage法除蛋白工艺的研究

研究了灰树花多糖Sevage法除蛋白的工艺,采用单因素实验确定Sevage试剂添加量、氯仿与正丁醇体积比、脱蛋白次数以及振摇时间对灰树花多糖除蛋白效果的影响,并在单因素实验基础上采用响应面法确定了灰树花多糖Sevage法除蛋白的工艺条件:多糖溶液与Sevag试剂体积比3.073∶1,氯仿正丁醇体积比4.016∶1,振摇时间25.59min,脱蛋白率为37.95%,多糖含量为78.32%。     

椰心叶甲的危害及其生物防治研究

综述了椰心叶甲(Brontispa longissima)的危害状况及其生物防治研究进展,总结了天敌昆虫、昆虫病原微生物、生物源杀虫剂及转基因毒蛋白在防治椰心叶甲中的作用,探讨了目前椰心叶甲(B.longissima)生物防治中存在的问题及今后的生物防治策略。     

具有灭鼠活性的蓖麻毒蛋白提取工艺的优化

以脱壳蓖麻籽为原料,在单因素实验的基础上,采用响应面法优化蓖麻粗毒蛋白的提取工艺。选取液料比、pH、浸提时间和硫酸铵饱和度4因素3水平进行中心组合实验。结果表明,蓖麻粗毒蛋白的最佳提取工艺条件为:液料比4.5 mL/g,pH 6.9,浸提时间38 h,硫酸铵饱和度65%。优化后蛋白提取率从2.82%提高到3.69%,SDS-PAGE凝胶电泳显示32 kD和34 kD两条蛋白带。     

短链脂肪酸作为信号分子在肠道炎症中的研究进展

肠道菌群代谢物短链脂肪酸在机体内可作为信号分子,在细胞外激活G蛋白偶联受体,在细胞内抑制组蛋白脱乙酰酶,起抗炎作用。本文就短链脂肪酸的来源、组成、合成、分布,短链脂肪酸作为信号分子在肠道炎症发生发展中的作用及其潜在分子机制进行综述。     

靶向抑制CDK4/6的肿瘤治疗基础研究与临床应用进展

周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6) 是一类丝氨酸/苏氨酸激酶,通过与细胞周期蛋白D（cyclin D）结合,调节视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)的磷酸化状态,Rb磷酸化后与E2F转录因子分离,释放的E2F可以自由激活一系列基因表达,参与DNA复制和细胞分裂,从而介导细胞G1/S期转换,影响细胞周期的进程。近年研究发现CDK4/6在多种肿瘤发生和发展过程中起着核心作用,已成为临床多种肿瘤治疗的重要分子靶点。本文将对CDK4/6与肿瘤的关系以及CDK4/6抑制剂临床应用的最新研究进展做一综述。