甲基苯丙胺免疫层析测试条的研制

采用枸橼酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒，标记甲基苯丙胺单克隆抗体，制成免疫层析测试条，建立了一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法，并用于尿液中甲基苯丙胺的检测。尿液中的甲基苯丙胺与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相二抗或抗原结合，根据是否出现肉眼可见的红色线条判断人体尿液中是否含有甲基苯丙胺。结果显示，甲基苯丙胺免疫层析测试条只与甲基苯丙胺发生特异性反应，符合中国药品生物制品检定所制定的检测甲基苯丙胺标准品的标准，灵敏度为1000μg／L，与典型的麻醉药物和镇静药物无交叉反应。甲基苯丙胺免疫层析测试条检测尿液中的甲基苯丙胺具有特异性强、灵敏度高、结果显示清楚、快速、简便、省时、实用等特点。     

pH值对胶体金制备的影响

研究了不同的溶液pH值对胶体金颜色、粒径的影响。在不同pH值下通过柠檬酸三钠法制备胶体金溶液,利用紫外/可见光吸收分光光度计对胶体金进行扫描,得到最大吸收峰波长及峰宽;通过透射电镜观察其颗粒直径及分布,再将二者结果进行比较分析。结果显示:随着溶液pH值变小,胶体金颜色由红→蓝→黑,粒径变大。     

用胶体金显示PbGv在脂肪体中的免疫化学定位

胶体金作为标记物最早由 Faulk和 Toylor( 1 971 ) Romano等 ( 1 974)用于电镜免疫细胞化学研究。近年来胶体金探针已成为定位和分析多种蛋白质、多肽、多糖的有力工具。特别是在抗原酶及激素等物质的细胞免疫化学定位中更加显示了其独特的威力。利用 Ig G的双价性 ,它的一臂可结合到事先包被有抗原的胶体金上 ,也可以把抗体分子包被在胶体金上 ,对细胞内的抗原进行定位。昆虫病毒在感染细胞中有很强的能力。其中杆状病毒包含体蛋白的复制量可达到死虫的2 0 %是当前所了解的真核细胞中表达量最大的病毒蛋白质。为了了解这蛋白合成和代谢的…     

AFP免疫层析测试条的研制

以复合型层析材料为固相,用胶体金标记ＡＦＰ ＭｃＡｂ Ａ１４Ｃ１１,ＡＦＰ ＭｃＡｂ Ａ４Ａ１４包被于固相,采用双抗体夹心免疫层析技术,研制出ＡＦＰ免疫层析测试条。该方法敏感度为１０μｇ／Ｌ,结果显示清楚,具有简易、快速、灵敏、实用、省时等特点。     

人血清淀粉样蛋白A1原核表达及胶体金检测方法的建立

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的SAA1定量检测新方法.利用大肠杆菌BL21(DE3)原核表达人血清淀粉样蛋白A1(SAA1),根据BL21(DE3)表达偏好性设计并合成SAA1蛋白基因片段,构建表达载体pET-28a-SAA1,采用CaCl2法制备BL21(DE3)感受态,热激转化法将pET-28a-SAA1转入到BL21(DE3).经表达条件优化,获得重组蛋白最佳诱导表达条件:温度30℃,时间6h,转速180rpm/min,培养基pH 7.0,IPTG浓度0.4mM,诱导表达后目的蛋白经SDS-PAGE电泳鉴定,Ni柱纯化、透析、浓缩从而获得浓度为8.09mg/ml,纯度为85%的SAA1.同时,结合胶体金标记技术,建立了SAA1胶体金免疫层析试纸检测方法,线性范围0.16~500μg/ml,最低检测限0.16μg/ml,该研究为临床体外诊断SAA1快速检测提供技术基础.     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中环丙沙星残留

针对牛奶中恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留的问题,该研究开发一种胶体金试纸条快速检测牛奶中的环丙沙星残留。研究制备环丙沙星包被抗原,对环丙沙星抗体进行表征,优化胶体金标记条件,选用最佳标记pH和最佳蛋白添加量,以硝酸纤维素膜为固相载体,环丙沙星包被抗原为检测带(T带),羊抗兔二抗为质控带(T带)。依据免疫竞争法原理,建立胶体金免疫层析试纸条快速检测牛奶中环丙沙星的方法,方法检出限为6.25 ng/mL,对牛奶样品的检出限为12.50 ng/mL。样品前处理方法简单,在10 min内即可目测判断结果。     

玉米赤霉烯酮胶体金试纸条质量验证试验

目的验证玉米赤霉烯酮胶体金试纸条对玉米基质、小麦基质样品中玉米赤霉烯酮检测的准确性。方法根据试纸条说明书方法,将不同浓度系列的玉米基体和小麦基体质控样品进行前处理后,用试纸条测定其浓度。结果检测样品为玉米基体时试纸条间无显著性差异,相对准确率为99.5%,检测结果准确;小麦基体时,试纸条显著性差异为39.03(自由度df=1),相对准确率为80.5%,检测结果差异较大。结论该方法基本可行,适合对玉米中玉米赤霉烯酮的含量进行定性检测,不适合对小麦中玉米赤霉烯酮含量进行定性检测。     

3种快速检测沙门氏菌方法的比较分析

目的 比较PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法检测沙门氏菌的检测效果。方法 使用PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法和国标法分别对待测样品进行检测, 并将3种快速检测方法的检测结果与国标法检测结果进行对比分析。结果 3种快速检测法的检测结果和国标法检测结果符合率分别为100%、92.9%和100%, PCR法和VITEK-2 Compact法符合率略高于胶体金法, 但3种快速检测方法总检出率与国标法比较差异均无统计学意义(P>0.05), PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法对35个沙门氏菌阳性样本的检出率分别为100%、85.7%和100%。针对阳性样品, PCR法和VITEK-2 Compact法高于胶体金法, 且差异有统计学意义(P<0.05)。PCR法和VITEK-2 Compact法对沙门氏菌的最低检出限为1×101 CFU/mL, 而胶体金法为1×102 CFU/mL。结论 3种快速检测方法均可作为沙门氏菌国标检测方法的有效补充。     

盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的研制

本文研究建立了一种检测盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的方法。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记盐酸克伦特罗与莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,盐酸克伦特罗与莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡。试验结果表明,该联检速测卡的灵敏度分别为CLEN 3 ng/mL、RAC 5 ng/mL,检测时间为3 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。     

用于水产品中硝基呋喃类代谢物检测的胶体金快速检测试剂板的研制

目的 本文采用胶体金免疫层析技术,研制了一种水产品中硝基呋喃代谢物四合一免疫胶体金快速检测试剂板.方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和微孔中.包被后的NC膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条.结果 经试验,该四合一试剂板对水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)和呋喃妥因代谢物(AHD)的检出限分别为1.0、1.0、1.0、2.0μg/kg.结论 试剂板具有快速、准确、灵敏度高的特点,适用于大批量水产样品中硝基呋喃代谢物的检测.