应用荧光微球技术进行免疫检测研究

以聚苯乙烯羧基荧光微球为固相载体,将人免疫球蛋白G(IgG)和猪血红蛋白(Hb)分别与微球偶联,应用Luminex-100TM荧光微球检测系统检测抗体IgG和抗原Hb与荧光微球的偶联效率.结果表明,采用100μg·mL-1抗体或抗原浓度可以获得较高的偶联效率,且检测快速灵敏.应用荧光微球进行抗原抗体免疫检测可行.     

糖基化大豆抗原蛋白的结构与功能特性研究进展

大豆球蛋白与大豆β-伴球蛋白是大豆蛋白的主要组成成分,也是主要的过敏原,二者通过影响大豆蛋白的性质改变其营养和功能特性。糖基化会使大豆抗原蛋白发生不同程度的改性,从而影响大豆蛋白产品的品质与特性。因此,研究大豆抗原蛋白在糖基化过程中的结构和功能特性的变化,对促进大豆蛋白深加工具有重要意义。本文分析了大豆主要抗原蛋白组成与结构特点,综述了大豆抗原蛋白在糖基化过程中的结构变化对其功能特性的影响,具体表现在溶解性、乳化性、乳化稳定性提高,凝胶性改善、致敏性降低。这些功能特性的改变为大豆蛋白开发和应用创造了条件。其目的是为大豆蛋白糖基化机理及工业化生产提供理论。     

幽门螺杆菌单克隆抗体的制备及其检测应用

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种定居于人胃部及十二指肠的微需氧革兰氏阴性菌,其长期感染导致胃炎、胃及十二指肠溃疡与胃癌。幽门螺杆菌感染主要始于儿童期,其自发性清除非常少见,及早通过检测发现并加以抗生素治疗可有效降低成人感染率。本文通过体外培养Hp标准菌株ATCC43504,将其裂解液作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过常规技术路线制备杂交瘤细胞。经间接ELISA法筛选和多次有限稀释法亚克隆得到21株稳定分泌抗Hp抗原的杂交瘤细胞株,制备腹水并用辛酸硫酸铵联合沉淀法纯化单克隆抗体。将得到的单克隆抗体在胶体金免疫层析平台上进行配对和样品检测,获得多组灵敏度和特异性相对较高的单克隆抗体组合,其中以2-18E1作为包被抗体,2-9H5或2-17E9作为标记抗体检测细菌培养裂解物的最低限为25 ng/m L,为Hp抗原检测试剂的研发提供了基础。     

莱克多巴胺的抗原合成鉴定及其抗体的制备纯化

莱克多巴胺属于β-兴奋剂类药物中的苯乙醇类衍生物，具有显著改善动物饲料利用效率，显著提高胴体瘦肉率的生产性能，因为其具有严重的副作用所以H前该类药物在我国和其他国家是被禁用的。本试验通过连接剂butane-1，4-diol diglyciydylether把莱克多巴胺和载体蛋白BSA和OVA偶联成免疫抗原和包被抗原，并采用紫外全波长扫描和SDS-聚丙烯酰胺凝胶的方法对合成的抗原进行了鉴定。通过免疫兔子获得了RCT的多克隆抗体，然后又通过饱和硫铵沉淀和proteinA-Sepharose4B的方法对抗体进行了纯化。纯化的抗体表现出对RCT较高的特异性和灵敏性。     

以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究

本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原，免疫小鼠制备单克隆抗体，在此基础上建立了竞争ELISA检测方法，线性范围为200-6000pg／ml，检测下限为150pg／ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35％，与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0．01％。在小麦样品中的加标回收率为83％～116％，变异系数为9.4％-19．8％。测试23份样品，赭曲霉毒素A的含量在0．6～2．56μg／kg之间。     

同时检测伏马菌素B1和呕吐毒素的通用探针免疫层析卡研究

摘要 ：目的：研发同时检测伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)和呕吐毒素(deoxynivalenol, DON)的通用探针免疫层析卡。方法：通过标记物修饰在融合真菌毒素模拟表位的甘露糖结合蛋白(mannose binding protein, MBP)制备双功能抗原,引导针对标记物抗体的量子点微球通用探针,与检测线上的毒素抗体形成“夹心免疫复合物”,从而产生检测信号。 结果 标记物对MBP的反应摩尔比3.0/1.0,所制备的2种双功能抗原具有最优的双抗体结合活性。“毒素抗体/双功能抗原/通用探针”免疫复合物在2条检测线（T线）都形成荧光信号;只需调整2种毒素抗体的点阵浓度,FB1和DON的T线完全抑制的阈值统一优化为 预定的5.0 ng/mL。结论：基于双功能抗原引导的通用探针的免疫层析卡, 避免了分别制备单一特异性探针的繁琐,各T线检测阈值优化过程简便, 适合真菌毒素多残留检测免疫层析试剂的标准化制备。     

玉米赤霉烯酮全抗原的合成及鉴定

目的合成玉米赤霉烯酮(ZEN)的全抗原。方法将烯醇化的ZEN与阳离子化的载体蛋白(BSA)偶联,制备高特异性的全抗原,用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪MALDI-TOF检测偶联物及载体蛋白的分子量,用商品化的ZEN免疫试剂盒对偶联物进行棋盘滴定验证。结果全抗原及载体蛋白BSA的分子量分别为69693.5 Da、66297.7 Da,平均每个BSA连上的ZEN分子个数为10.68个;平均每个OVA上连上的ZEN分子个数为5.32个;偶联物与免疫试剂盒中ZEN的抗体呈阳性反应。结论合成的ZEN全抗原为ZEN抗体的制备及免疫学方法的建立奠定了基础。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫分析核心试剂特异性单克隆抗体的研制与特性研究

采用1,1’-羰基二咪唑(CDI)活化法成功将脱氧雪腐镰刀菌烯醇分子上C-3和C-15位羟基与载体蛋白赖氨酸的氨基共价偶联得到免疫原DON-BSA和包被原DON-OVA,并用三硝基苯磺酸法对合成结果进行鉴定。以人工抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和多次亚克隆,得到了1株能稳定分泌脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体的单克隆细胞株1D5,并制备单克隆抗体腹水。经检测该抗体亚型为IgG1,亲和力常数Ka为8.33×107L/mol,交叉反应的试验结果显示该抗体与其他真菌毒素无交叉反应率,稳定性良好,为粮油食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫快速检测技术建立及产品研发提供了关键试剂材料。     

复合疫苗佐剂促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8~+CTL反应的研究

目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotides,CpG-ODN)与A(lOH)3或Montanide ISA720等组成的复合佐剂在小鼠体内促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8+CTL反应的能力。方法以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)为抗原,分别以CpG X1、A(l OH)(3即Alum)、Montanide ISA720、CpG X1+Alum和CpG X1+Montanide ISA720为疫苗佐剂,分别于0和4周经肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,体积均为100μl,分别含20μg OVA、20μg CpG X1、74μl Montanide ISA720和/或100μg Alum。通过胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤试验评价不同佐剂对细胞免疫应答的影响,通过表达OVA的黑色素瘤和李斯特菌攻击模型评价不同佐剂在免疫预防和免疫治疗中的作用。结果与OVA组相比,A(lOH)3本身不能有效诱生小鼠的细胞免疫应答;CpG X1或Montanide ISA720单独使用能够在一定程度上增强抗原特异性CD8+T细胞的IFNγ分泌和CTL活性,但不增强抗原特异性CD4+T细胞反应。两种复合佐剂具有比单佐剂更强的细胞免疫佐剂效应,其中CpG X1+MontanideISA720只能增强抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的IFNγ分泌,而CpG X1+Alum不仅能够增强抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的IFNγ分泌,还能够增强CD8+CTL的杀伤活性。在黑色素瘤和李斯特菌攻击模型中,CpG X1+Alum佐剂显示出良好的预防和治疗效果。结论 CpG X1与A(lOH)3组成的复合佐剂能够有效促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生功能性CD8+CTL反应。     

构建IgG介导的河虾过敏模型的研究

选取7周龄大的BALB／c和昆明鼠。以腹腔注射河虾粗体液及Al（OH）佐剂的方式进行免疫,每周一次,共四次,第五周进行免疫激发。对照组则以相同方式注射生理盐水及Al（OH）3佐剂。免疫激发后,组胺和IgG1的含最显著提高,小鼠的主要过敏原被测定被证明与人类主要过敏原相似。所以本实验建立了一个新的IgG介导的河虾过敏反应的动物模型。该模型可以为研究IgG介导的系统性过敏的机制,治疗手段,以及检测转基因食品的安全性提供有力的工具。