甲基苯丙胺与蛋白偶联物的合成

研究合成甲基苯丙胺抗原.在甲基苯丙胺分子上引入偶联官能团,以牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,用戊二醛法偶联合成了甲基苯丙胺抗原,并用红外光谱、紫外扫描、蛋白电泳以及胶体金免疫层析等方法进行检测.结果表明,每分子BSA连接甲基苯丙胺分子数为25;胶体金免疫层析检测结果显示合成抗原与抗体有特异性反应,具有活性.可在免疫检测中用作抗原的甲基苯丙胺与蛋白偶联物.     

酶标抗原直接竞争ELISA检测食品中氟喹诺酮类药物多残留

固相包被恩诺沙星抗体,辣根过氧化物酶标记的抗原与标准品（或样品）中氟喹诺酮药物竞争结合抗体,建立了高效、高灵敏的氟喹诺酮药物直接竞争酶联免疫吸附分析检测方法。优化反应条件后,得到方法的IC50为2.04 μg/L,灵敏度为0.15 μg/L,线性范围0.3～15 μg/L;方法可以检测12 种氟喹诺酮药物,在生乳、鸡肉、鱼肉和虾肉4 种样品中12 种药物的回收率为70%～121.5%。     

芴完全抗原和多克隆抗体制备与鉴定

以9-芴乙酸（fluorene-9-aceticacid,FLU）为原料,经活性酯法合成完全抗原FLU-牛血清白蛋白（bovineserum albumin,BSA）和FLU-卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）,偶联产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外扫描法鉴定。使用FLU-BSA足垫免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接酶联免疫吸附实验（enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA）测得多克隆抗体效价为51 200,间接竞争ELISA方法测得芴多克隆抗体的特异性,与荧蒽的交叉反应率为12%,与其他14 种多环芳烃交叉反应不明显。     

杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定

以咪唑乙醇为原料,与6- 溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4- 二氯苯基)-2-(1- 咪唑基)乙氧基]己酸)。产物经薄层层析和1H-NMR 鉴定后,采用活化酯法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫原(HIA-BSA)和包被原(HIA-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为13:1 和7:1,初步说明人工抗原合成成功。通过免疫动物获得效价为1:64000 的抗体,采用间接竞争ELISA 法测定抗体的IC50 值为1.76μg/mL,从而进一步证明人工抗原合成成功,所得的抗体可用于ELISA 检测试剂盒的研制。     

出血性大肠杆菌H7鞭毛抗原的诱导恢复及鉴定

从进口冻鸡翅中分离获得一株发酵山梨醇、缺失H7鞭毛抗原的出血性大肠杆菌O157:H7变异株,采用0.4%强营养软琼脂对该菌进行连续5代诱导培养,使其H7鞭毛抗原成功恢复。综合该菌的生物学特性、血清学及毒理实验结果确证为大肠杆菌O157:H7。该菌的检出为大肠杆菌O157:H7变异株的鉴定提供了有益参考。     

氨苄青霉素人工抗原的制备及鉴定

本研究采用戊二醛法和物理法制备氨苄青霉素(AMP)人工抗原,以紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定偶联成功,采用改良的BCA法测定偶联率分别为8～10和17～21。通过单因素和L9(34)正交试验研究了反应物起始摩尔比、偶联剂的添加量和偶联时间等因素对偶联率的影响,选择最佳的偶联条件。最终确定戊二醛法的最佳反应条件为:反应物起始摩尔比40:1;戊二醛10μl;反应时间4h。物理法的最佳反应物起始摩尔比为20:1,反应时间3h。本研究表明物理法优于戊二醛法,是一种更好的制备氨苄青霉素人工抗原的方法。     

氯唑西林人工抗原的合成及其抗体的制备

为建立氯唑西林(cloxacillin,CLOX)残留的酶联免疫(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法,试验采用碳化二亚胺法,将氯唑西林偶联于载体蛋白牛清蛋白(Bovine albumin,BSA)和卵清蛋白(ovalbumin,OVA),制得免疫抗原(CLOX-BSA)和包被抗原(CLOX-OVA),并通过红外光谱扫描(infrared spectroscopy,IR)鉴定表明CLOX人工抗原合成成功。用免疫抗原免疫5只小鼠,制备CLOX多克隆抗体,通过间接ELISA法测定其对CLOX的效价及特异性。结果表明:用CLOX-BSA免疫制备的抗体效价达1∶64000以上,特异性较强,对CLOX的半抑制质量浓度IC50值为(5.64±0.03)ng/mL,IC15值为(22.43±0.02)ng/mL。说明试验得到了灵敏度高、特异性强及具有开发性的抗体,可为食品安全检验试剂盒的开发提供基础。     

抗原抗体之间的相互反应及其研究方法

抗原抗体的反应在生物学研究、临床诊断等方面具有重要应用,本文论述了抗原抗体之间的相互反应及其研究方法,并重点阐述了当今抗原抗体反应研究方法的新领域。     

重金属镉特异性抗体的制备及icELISA检测方法的建立

为检测食品中的重金属镉残留问题,本研究建立了基于重金属镉抗体的酶联免疫分析方法。利用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(Isothiocyanobenzyl-EDTA,ITCBE)螯合Cd~(2+)并偶联牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA),合成了针对Cd~(2+)的免疫原Cd-ITCBE-BSA和包被原Cd-ITCBE-OVA,通过紫外扫描鉴定说明偶联成功;以Cd-ITCBE-BSA免疫Balb/c小鼠,制备出Cd~(2+)抗血清并对其免疫学特性进行鉴定,进一步说明了抗原合成成功,在此基础上进行了条件优化并建立了针对镉的icELISA检测方法。方法的检测限(IC10)为0.18 ng/mL,IC50为1.15 ng/mL,线性检测范围(IC20～IC80)为0.24～5.54 ng/mL。除了与Hg~(2+)有2.16%的交叉反应率,该方法对Pb~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)和Cr3+交叉反应率均小于0.3%,板内变异系数和板间变异系数都低于10%。此抗体特异性强灵敏度高,建立的icELISA方法可应用于食品中重金属镉的快速检测。