罗非鱼头长链碱的分离纯化及抗肿瘤活性

目的：探讨罗非鱼头长链碱（tilapia head long chain bases,TH-LCB）的提取纯化方法及其体外抗肿瘤 活性。方法：以罗非鱼头为原料,采用有机溶剂提取法,提取纯化得到TH-LCB;采用四甲基偶氮唑盐法、细胞 凋亡率和细胞周期的测定和蛋白免疫印迹等方法,探讨了TH-LCB对人白血病K562细胞的增殖抑制作用和凋亡诱 导作用。结果：TH-LCB可显著抑制人K562细胞的增殖,TH-LCB作用24、48 h后的半数抑制浓度分别为42.207、 39.494 μg/mL;随着TH-LCB质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,sub-G0/G1峰（凋亡峰）也随之升高,表明 TH-LCB通过诱导细胞凋亡来抑制K562细胞增殖;Western blot结果表明,TH-LCB可提高细胞内Caspase-3的蛋白 表达量,呈剂量依赖效应。结论：TH-LCB可通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,这一过程可能与Caspase-3的 激活有关。     

培养液匀浆人参发根抗氧化、抗黑色素瘤作用

以培养液匀浆人参发根为实验材料,选用Cu2＋螯合能力、多酚氧化酶活力、总抗氧化能力3 种方法对其 抗氧化能力进行测定;采用流式细胞术对黑色素瘤细胞A375凋亡、细胞周期进行测定。结果表明：随着质量浓 度的增大,培养液匀浆人参发根的Cu2＋螯合率逐渐提高,在100 mg/mL时与VC差异不显著（P＞0.05）;40、 60、80、100 mg/mL时培养液匀浆人参发根与VC的多酚氧化酶活力差异不显著（P＞0.05）;培养液匀浆人参 发根的总抗氧化能力具有质量浓度依赖性,在100 mg/mL时达到0.877 4 mmol FeSO4/g。与对照组相比培养液匀 浆人参发根组细胞凋亡显著（P＜0.05）;S、G2/M期比例升高,G0/G1期比例下降。结论：人参发根具有抗氧 化、抗黑色素瘤作用。     

Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Moh-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BILB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Westernblotting检测BIIB02l对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示：BIIB021以时间和刺量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384．6nmol／L和301．8nmol／L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol／LBILB021可诱导细胞凋亡率达34．4％;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于GO／G1期;Westernblotting显示BILB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4／6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4／6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于GO／G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Mott-4的Akt和NF-kB也有抑制作用。     

电离辐射诱导BALB/c小鼠骨髓细胞基因表达谱的研究

利用基因芯片技术研究了辐射后小鼠骨髓细胞基因表达谱的变化。结果发现在芯片上8079个基因中，有660个基因的表达有明显差异，其中354个基因的表达量增高，306个基因的表达量下降。在差异基因中功能或部分功能已知基因有222个，对其中差异2．5倍以上基因进行分析，发现表达差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、信号转导、免疫与应激、核酸合成、转运蛋白与通道蛋白等多个方面，其中以信号转导和免疫应激相关基因所占比例较多，反映出辐射对细胞损伤的多靶点、多层次及多通路的特点，深入研究这些辐射相关基因在造血辐射损伤中的作用，可为放射病治疗、肿瘤放疗提供新的靶点和方法。     

黄芪甲苷对肝细胞放射损伤预防作用的机制研究

本文研究了黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对肝细胞放射损伤防护的机制。以γ射线照射L-02细胞建立辐射损伤模型,分为对照组、黄芪甲苷组(80μg/mL)、照射组(4 Gy)、黄芪甲苷+照射组(80μg/mL+4Gy),于照射前12 h更换含有黄芪甲苷浓度为80μg/mL的培养基。采用流式细胞术检测黄芪甲苷对照后L-02细胞早期凋亡率及细胞周期的影响;以罗丹明123荧光探针检测黄芪甲苷对照后L-02细胞线粒体膜电位改变的影响;免疫荧光法观察γH2AX焦点数;通过Western Blot检测细胞中Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达变化。结果显示:照后细胞凋亡率随着药物浓度的增加而降低,黄芪甲苷能有效的缓解电离辐射引起的细胞G2期阻滞;黄芪甲苷+照射组细胞线粒体膜电位均高于照射组;黄芪甲苷+照射组γH2AX焦点数明显少于照射组;照射组细胞内Nrf2、HO-1及NQO1表达升高,黄芪甲苷+照射组Nrf2、HO-1及NQO1表达则是随着药物浓度增加而降低。综上可知,黄芪甲苷对L-02细胞具有辐射损伤预防作用,其机制可能是通过Nrf2途径来减轻电离辐射所致的损伤。     

HASM对W-256细胞系DNA含量及细胞周期的影响

采用流式细胞技术测定HASM（羟基磷灰石超细粉）对W－256癌肉瘤细胞DNA含量及细胞周期的影响。结果发现,羟基磷灰石超细粉可抑制W－256癌肉瘤细胞DNA合成,使癌细胞分化受阻于G2期。     

紫薯花色苷对小鼠淋巴细胞免疫功能的调节作用

为探讨紫薯花色苷(PSPA)免疫调节作用,制备小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测不同浓度PSPA对淋巴细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测不同浓度PSPA对淋巴细胞膜表面标志和细胞周期的影响。结果:PSPA各浓度组淋巴细胞刺激指数均极显著(p<0.01)高于空白对照组;PSPA 20 mg/mL浓度组淋巴细胞刺激指数极显著(p<0.01)高于阳性对照组。PSPA 2.5 mg/mL浓度组淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值显著(p<0.05)高于空白对照组,PSPA 5、10和20 mg/mL浓度组淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值均极显著(p<0.01)高于空白对照组;PSPA 2.0浓度组淋巴细胞亚群CD4⁺CD8⁺百分率均极显著(p<0.01)高于阳性对照组。PSPA各浓度组处于S期的淋巴细胞的百分率均极显著(p<0.01)高于空白对照组。PSPA 20 mg/mL浓度组处于S期的淋巴细胞的百分率均极显著(p<0.01)高于阳性对照组。表明PSPA通过促进淋巴细胞增殖、提高CD4⁺/CD8⁺亚群比值、增加进入S期细胞的百分率,从而调节淋巴细胞的免疫功能。结论:PSPA具有明显的免疫调节活性。     

吴茱萸碱对人结肠癌lovo细胞生长的抑制作用

目的探讨吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)在体内外对人结肠癌lovo细胞生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测Evo对人结肠癌lovo细胞、人乳腺癌MDA-MB-231细胞以及人肺癌A549细胞生长的影响;流式细胞术分析Evo对lovo细胞细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Evo治疗lovo细胞荷瘤裸鼠,并绘制肿瘤生长曲线;Westernblot法检测Evo对lovo细胞和肿瘤组织中Bcl-2及procaspase-3表达的影响。结果 Evo能抑制lovo细胞生长(P<0.01),促进MDA-MB-231细胞增殖(P<0.01),对A549细胞无明显作用(P>0.05);可将lovo细胞阻滞于S期(P<0.01),并呈时间依赖性诱导其凋亡(P<0.01);能抑制lovo细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长(P<0.05);Westernblot检测结果显示,Evo在体内外均可降低lovo细胞Bcl-2及procas-pase-3的表达。结论 Evo可通过抑制Bcl-2表达,激活caspase-3,诱导凋亡,从而抑制lovo细胞的生长。     

不同证型代谢综合征与CDKAL1、PPARG基因的关系分析

目的:探讨代谢综合征(MS)中痰湿壅盛、气阴两虚证型与CDKAL1、PPARG基因的关系。方法:选取60例MS患者,按照证型将其分为痰湿壅盛组、气阴两虚组,各30例,同时选取健康人群30例为对照组;采用实时荧光定量PCR(Q PCR)技术检测CDKAL1、PPARG基因,分析CDKAL1、PPARG基因与两种证型的相关关系。结果:痰湿壅盛、气阴两虚组CDKAL1、PPARG基因表达均高于对照组(P<0.000 1),且气阴两虚组CDKAL1基因表达高于痰湿壅盛组(P<0.05);气阴两虚组PPARG基因表达高于痰湿瘀滞组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MS患者CDKAL1、PPARG基因表达均上调,与不同证型-痰湿壅盛与气阴两虚表达均呈一定的相关关系。     

茶麸黄酮促进毛乳头细胞增殖和VEGF分泌的研究

以脱脂茶麸为原料,通过乙醇水溶液超声波辅助提取脱脂茶麸中的黄酮,探究其生物活性。用不同质量浓度含茶麸黄酮溶液作用于体外培养的人毛乳头细胞(HDPCs),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活性,并通过流式细胞术检测茶麸黄酮对细胞凋亡、周期的影响以及ELISA法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的变化。结果表明,茶麸黄酮富集产物对HDPCs具有增殖作用,质量浓度20μg/mL时增殖效果最佳,比10μg/mL米诺地尔阳性对照效果显著(**P<0.01)。茶麸中黄酮可能是通过减少HDPCs的早凋,促进HDPCs的有丝分裂从而对细胞的增殖发生作用。茶麸黄酮富集产物对HDPCs的VEGF分泌呈现浓度依赖性。