化脓隐秘杆菌对奶牛脾脏组织细胞凋亡的影响

目的观察化脓隐秘杆菌自然感染奶牛脾脏组织的病理学变化,并检测组织细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达,以确定化脓隐秘杆菌感染对奶牛脾脏组织细胞凋亡的影响。方法筛检2头化脓隐秘杆菌阴性健康奶牛(对照)和5头自然感染化脓隐秘杆菌的奶牛,收集脾脏组织样本,采用本课题组国家发明专利方法,进行石蜡制片和HE染色,观察脾脏组织病理学变化;采用免疫组织化学方法与本课题组国家发明专利方法相结合,检测奶牛脾脏组织中与细胞正负凋亡相关的调节基因Bax和Bcl-2及凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达情况。结果肉眼观察可见化脓隐秘杆菌自然感染奶牛脾脏肿大、柔软,有出血;病理组织学观察可见脾脏组织出血,水肿,淋巴细胞数量减少,有坏死;脾脏淋巴细胞Caspase-3、Caspase-9和Bax表达阳性,与对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05),少量淋巴细胞Caspase-8和Bcl-2表达阳性,与对照组相比,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论化脓隐秘杆菌能够引起奶牛脾脏淋巴细胞发生坏死和凋亡;可通过调节脾脏中淋巴细胞Bcl-2家族的活性,引起其Bax和Bcl-2比率改变,增加淋巴细胞线粒体内外膜通透性,导致与凋亡相关因子的释放,激活Caspase-9,进一步激活Caspase-3,从而引起脾脏中淋巴细胞发生凋亡。     

基于主成分-逐步回归分析法的瓦斯涌出量预测研究

矿井进行瓦斯涌出量预测是煤矿安全生产十分重要的工作，鉴于主成分分析和逐步回归分析方法的优点，将两种方法相结合共同建立瓦斯涌出量回归预测模型。以峻德煤矿30号煤层为例，通过主成分分析得到了影响回采工作面瓦斯涌出量的四个主成分因素，再采用逐步线性回归分析法预测回采工作面瓦斯涌出量。结果表明：采用主成分-逐步回归分析法减少了回归分析所需要考虑的变量个数，预测结果具有较好的准确性，预测精度明显优于一元回归预测和多元回归预测，具有较好应用前景。     

胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选及鉴定

目的筛选胎衣不下奶牛胎盘组织中的差异表达蛋白,并对其鉴定,为研究奶牛胎衣不下的发生机理和治疗提供依据。方法收集胎衣不下奶牛及胎衣正常排出奶牛胎盘组织各5份,应用双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamidegel electrophoresis,2D-PAGE)技术对胎盘组织中蛋白进行分离,银染显色后获得差异表达蛋白点,并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术对其进行鉴定。结果与胎衣正常排出组相比,胎衣不下组奶牛胎牛胎盘中差异表达蛋白点共240个,其中表达上调蛋白点212个,表达下调蛋白点28个;母体胎盘中差异表达蛋白点共214个,其中表达上调蛋白点134个,表达下调蛋白点80个,共鉴定出5种差异表达蛋白。与胎衣正常排出组相比,胎衣不下组奶牛胎牛胎盘中牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、α-烯醇化酶(Alpha enolase)表达下调,谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GST)表达上调;母体胎盘中膜联蛋白V(Annexin V)、Alpha enolase和膜联蛋白A2(Annexin A2)表达均上调。结论发现的5种差异表达蛋白可能与奶牛胎衣不下的发生发展相关。     

深基坑开挖对临近建筑物浅基础影响分析

为研究深基坑开挖对临近建筑浅基础的影响,采用有限元软件ABAQUS模拟基坑开挖过程,对临近建筑物条形基础的位移与应力变化进行研究。研究表明,基坑开挖会导致建筑物有整体向基坑所在方向倾覆的趋势,基坑开挖深度越大,基础远近两侧的沉降差值越大,倾覆趋势越明显。随着基坑开挖深度的增加,基础的沉降量增大,基底应力增大。随着地连墙刚度的增大,基础的沉降及远近两侧沉降差减小,地连墙刚度较大时,增加刚度的作用就不再明显。地连墙刚度降低,易引起基础底部与基础顶部的不均匀水平位移。     

急性期蛋白作为动物应激诊断标志物的研究进展

机体受到外界各种应激原刺激时,会诱发机体非特异性防御反应,并引发急性期反应。急性期蛋白(acute phase protine,APP)是主要由肝细胞合成的蛋白,可以改变对组织损伤、感染、应激引起的炎症反应的表达。急性期蛋白在动物体发生应激反应时内环境稳态变化与抗应激能力息息相关,因此研究急性期蛋白在畜禽应激相关疾病中变化成为必要。本文针对几种主要急性期蛋白的分类及其在动物体应激状态下表达量的变化与检测作一综述。     

miRNA在几种动物应激中的研究进展

miRNA是一类内源性18～22个核苷酸的非编码小RNA分子,通过与靶mRNA的3′非翻译区(3′untran-slated region,UTR)结合来调节基因的表达。在动物的多种生理进程和疾病的发生发展中,miRNA均发挥着重要作用。应激是机体对外界环境变化而产生的一系列非特异性的应答反应,不同应激源的刺激会导致miRNA的表达发生改变。因此,探究miRNA在动物应激中的研究进展对畜牧业的发展具有重要意义。本文综述了应激相关miRNA的研究进展,以期从分子水平寻找预防和诊断动物应激的方案。     

胎衣不下奶牛母体胎盘中有丝分裂原活化蛋白激酶及细胞外信号调节蛋白激酶基因异常表达的分析

目的分析胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)奶牛母体胎盘组织中有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK,MEK)及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK,p42/44 MAPK)的异常表达。方法选取年龄、胎次、体况相近的产后胎衣正常排出和RFM奶牛各3头,分别为N和R组。产后用子宫内膜采样器采集两组奶牛胎盘样本,Western blot法检测样本中MEK、p42/44 MAPK、P-p42/44MAPK蛋白表达水平,RT-qPCR法检测样本中MEK、p42/44 MAPK基因mRNA转录水平。结果与N组比较,R组奶牛胎盘组织中MEK蛋白表达水平显著下调(P 0. 01),p42/44 MAPK蛋白表达水平下调,但差异无统计学意义(P 0. 05),P-p42/44 MAPK蛋白表达水平显著上调(P 0. 001);R组奶牛胎盘组织中MEK及p42/44 MAPK基因mRNA转录水平均显著下调(P 0. 01)。结论 RFM奶牛母体胎盘组织中MEK与p42/44 MAPK蛋白及m RNA转录水平均明显下调,可能是奶牛RFM发生机制中的关键。     

金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性

目的在大肠埃希菌中融合表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白,并检测其甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)活性。方法采用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白flic基因和S.Aureus GapC基因,通过overlap PCR将这两段基因拼接并克隆至载体pQE30a,构建重组表达质粒pQE30-flic-GapC,将重组表达质粒转化E.coli XL-blue,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析试剂盒纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,并检测其GAPDH活性。结果重组表达质粒pQE30-flic-GapC经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约95 000,最佳诱导表达时间为5 h,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的31.4%;纯化产物可与小鼠抗S.aureus全菌体多抗血清和抗鼠伤寒沙门菌全菌体多抗血清发生特异性反应,GAPDH活性为(0.337±0.019)。结论成功表达并纯化了具有较高生物学活性的flic-GapC融合蛋白,为S.aureus亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

工字形悬臂梁非线性扭转微分方程的微分变换法

采用微分变换法求解工字形悬臂梁非线性扭转微分方程。通过引入坐标无量纲将非线性扭转微分方程进行无量纲化。依据微分变换原理对微分方程和边界条件作微分变换。由微分变换后的微分方程可获得对应的递归方程,并根据微分逆变换可得到微分方程的解析解。通过具体实例讨论非线性扭转角解析解的收敛性,并与已有工字形悬臂梁非线性扭转解析解进行对比。两种解析解之间的误差在3%以内,表明微分变换法可适用于求解非线性扭转微分方程。     

斜拉索的养护与维修研究

针对斜拉索的损坏问题，从电化学腐蚀、振动影响等方面，分析了斜拉索损坏的原因，论述了斜拉索养护与维修的措施，从而延长其使用寿命，发挥最大的经济效益。