烟台地区食源性疾病中副溶血性弧菌的病原特征及溯源分析

目的了解烟台地区引发食物中毒的副溶血性弧菌分离菌株的主要血清型、抗生素耐药情况、致病力的强弱以及传播流行趋势。方法对2017～2019年11起食物中毒爆发事件中分离的14株副溶血性弧菌进行血清分型;采用微量肉汤稀释法进行药敏试验;采用PCR技术检测毒力基因不耐热溶血素(tld)、耐药直接溶血素(tdh)和溶血相关溶血素(trh);采用脉冲场电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型的溯源分析。结果引发烟台地区食物中毒爆发的副溶血性弧菌血清型多样,但以O3:K6型为主(28.6%),分离菌株中11株(78.6%)表现为tdh阳性和trh阴性,3株(21.4%)未携带tdh和trh基因,对头孢唑啉(71.4%)、多粘菌素E(57.1%)、美罗培南和阿莫西林/克拉维酸(7.1%)均出现耐药情况,对氨苄西林(21.4%)、多粘菌素B(14.3%)为中度敏感,耐药谱显示没有出现对3种以上同时耐药的情况,但是42.9%的分离菌株对2种同时耐药情况。结论烟台地区引发食物中毒爆发的副溶血性弧菌以O3:K6型为主,主要携带tdh,对头孢唑啉耐药和多粘菌素耐药普遍存在,具有聚集性爆发的风险,因此加强腹泻病的监测,充分利用国家致病菌识别网集中进行本地区分离菌株的病原特征研究是防控食物中毒爆发的有效手段。     

海产品中副溶血性弧菌检测能力验证分析报告

目的通过参加英国FAPAS分析实验室组织的海产品中副溶血性弧菌检测能力验证,对其实验结果出现的异常现象进行分析,找出导致本次能力验证组织失效的原因。方法按照GB 4789.7-2013、SN/T1870-2016及相关作业指导书等进行实验,通过采用本实验室经常采用的检测方法进行检验,对实验出现的异常结果进行分析。结果发现M224d21A和M224d21B这2个冷藏运输箱包装的冻干样品由于储藏和运输等问题,导致未检出副溶血性弧菌。结论此次能力验证分析对于我院在海产品中副溶血性弧菌检测方面技术水平的提高和品牌形象的确立起到了积极作用,同时也为检验工作者对于能力验证出现异常现象提供一种解决问题的新思路、新方法。     

副溶血性弧菌多克隆抗体制备及应用

以热灭活副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP ATCC17802)免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,用间接酶联免疫吸附法测定抗血清效价,纯化后的多克隆抗体效价为512000。该抗体与5株副溶血性弧菌均能特异性结合,但与其他12株非副溶血性弧菌无交叉反应。在此基础之上建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA),并优化了抗原抗体浓度、二抗浓度、封闭液等条件。结果表明,该法的线性范围为5×10^4~107CFU/m L,线性回归方程为y=0.21x-0.74(R2=0.99),IC50为106CFU/m L,最低检出限为1.7×10^4CFU/m L,板内变异系数为2.61%~4.15%,板间变异系数为4.71%~8.74%。用建立的ic-ELISA检测市场中鱼、贝类养殖水和实验室用水中的VP,实验结果与国标检测方法的结果一致。该方法快速便捷,灵敏度高,准确性好,为进一步研究VP的快速检测奠定了基础。     

致病性弧菌及其噬菌体防治研究进展

弧菌广泛分布于海洋、咸水和淡水生态系统中，因其高丰度和高生物量使其在水生环境中发挥着关键作用，并成为人类和海洋动物的重要病原体。在过去的几十年间，随着海洋水产养殖业的快速增长，全球范围内弧菌相关疾病的报道越来越多。抗生素的使用是目前控制弧菌病爆发最常用的方法，但细菌耐药和超级细菌的问题又引起了人们的广泛关注。因此，噬菌体疗法在近年来得到了复兴。噬菌体不仅可以治疗细菌病也可以预防细菌病。然而，在为水产养殖业提供具有商业潜力的可靠、可重复的处理方法之前，仍有若干科学和技术挑战需要进一步研究。本文综述了致病性弧菌及其噬菌体防治的潜力和挑战。     

北部湾茅尾海副溶血性弧菌的分离鉴定与致病性分析

为解析北部湾海域及水产品中副溶血性弧菌的多样性特征与安全风险,本研究采集了北部湾茅尾海养殖区域海水和水产经济动物样品,利用硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS)对所采样品进行海洋弧菌的分离和纯化,共分离获得109株疑似弧菌菌株。通过16S rDNA和特异功能基因toxR的PCR扩增并测序鉴定,共检出副溶血性弧菌20株,检出率为18.3%。此外,通过系统发育分析还发现副溶血性弧菌的toxR和tdh基因序列都存在水平基因转移现象,呈现出较大的多样性。对20个副溶血性弧菌菌株的毒力基因tdh进行分析,结果表明有4株携带了tdh毒力基因,检出率为20%,易引起食物中毒,对公共卫生造成的威胁较大。因此,本研究建议采用PCR技术开展副溶血性弧菌特异种属基因和毒力基因检测,准确评估北部湾区域海水及其水产品的卫生安全性,降低爆发水产养殖业病害和食源性疾病的风险。     

霍乱弧菌基质辅助激光解吸飞行时间质谱数据库的建立与应用

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)快速检测霍乱弧菌,并建立数据库。方法考察培养基、培养时间、培养温度以及样品前处理方法对图谱质量和鉴定结果的影响,对方法的稳定性、重复性进行研究;采集101株霍乱弧菌食品分离株MALDI-TOF-MS指纹图谱,并对图谱进行分析。其中标准菌株CICC23794及40株分离株作为建库菌株,其余60株用于建库后的测试。结果采用2%NaCl-TSA培养基,在37℃、24h条件下培养,可达到强峰值信号,谱图重现性良好,甲酸-乙腈提取法获得的质谱图特征峰多,信噪比高;建库后, 60株霍乱弧菌均可达到高于2.0的水平,其中约有20株霍乱弧菌鉴定分值可达到2.4以上。结论本研究建立的霍乱弧菌MALDI-TOF-MS鉴定方法结果准确,可用于实际检测。     

广州市市售动物性淡水产品副溶血性弧菌污染状况分析

目的了解广州市市售动物性淡水产品副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)污染状况。方法2006～2019年,根据国家、省、市食品安全风险监测工作方案,共采集966份动物性淡水产品,开展VP检测。结果VP总体检出率为21.84%(211/966)。不同季节、不同采样地点、不同种类、不同加工售卖方式淡水产品VP检出率差异均有统计学意义。其中,第3季度VP检出率最高,为27.40%;超市VP检出率最高,为32.73%;甲壳类中淡水蟹VP检出率最高,为53.33%;生鲜类VP检出率最高,为27.23%。结论广州市市售动物性淡水产品不同程度受到VP污染,应加强整个产业链综合监管,积极开展健康宣教及食品安全风险预警。     

Vaccination of Silver Sea Bream (Sparus sarba) against Vibrio alginolyticus: Protective Evaluation of Different Vaccinating Modalities

In order to develop more effective immunological strategies to prevent vibriosis of farmed marine fish in Hong Kong and southern China, various vaccine preparations including formalin-, phenol-, chloroform- and heat-killed whole cell bacterins and subcellular lipopolysaccharides (LPS), as well as different administration routes, were investigated. Fish immunized with the subcellular LPS exhibited the best protection [Relative Percent of Survival (RPS) = 100], while fish immunized with whole cell bacterins displayed varying degrees of protection (RPS ranged from 28 to 80), in descending order: formalin-killed > phenol-killed > heat-killed > chloroform-killed bacterins. Regarding various administration routes, fish immunized with two intraperitoneal (i.p.) injections exhibited the best protection, and the RPS values were 100 or 85 upon higher or lower doses of pathogenic V. alginolyticus challenges. Both oral vaccination and a combination of injection/immersion trial were also effective, which achieved relatively high protection (the RPS values ranged from 45 to 64.3). However, two hyperosmotic immersions could not confer satisfactory protection, especially when fish were exposed to the severe pathogenic bacteria challenge. Marked elevations of serum agglutinating antibody titer were detected in all immunized fish. Macrophage phagocytosis was enhanced significantly, especially in the fish immunized by formalin- and phenol-killed bacterins through various administration routes. Both adaptive (specific antibody) and innate (phagocytic activity) immunity elicited by different immunization strategies were in parallel with the degree of protection offered by each of them. Although all vaccination trials had no significant effect on the serum hematocrit and hemoglobin levels, the circulating lymphocyte counts were significantly elevated in the fish immunized with LPS, formalin- and phenol-killed bacterins. Serum cortisol levels appeared to be reduced in all immunized fish except the trial of hyperosmotic immersion, which indicated the stressful impact on vaccinated fish.