重组Thermus thermophilus DNA聚合酶表达纯化及其在RT-PCR中的应用

目的研究重组ThermusthermophilusDNA聚合酶的表达、纯化和应用。方法提取Thermusthermophilushb8基因组DNA作为模板,PCR扩增TthDNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-BindQuickCartridge300纯化重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白。提取Thermomonosporafusca总RNA,用一管法RT-PCR扩增E2cd基因,检测重组TthDNA聚合酶RT-PCR活性。结果大肠杆菌表达TthDNA聚合酶,分离出的电泳纯重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白相对分子质量为94000,表达产量为200000U/L。一管法RT-PCR可扩增出850bp长度的E2cd基因。结论重组TthDNA聚合酶已成功地表达和纯化,并用于RT-PCR。     

4,4’-双-[-4-氯苯基磺酰基-]-联苯的研制(Ⅰ)

采用L_4(2~3)多因素正交试验方法,考查4,4＇-双-[-4-氯苯基磺酰基-]-联苯合成方法,(一)、二)的可行性。     

信号发生系统的自动控制

介绍了如何利用ＭＣＳ－５１系列８０３１单片机、８０３８多功能信号发生器等构成一个输出频率、方波占空比和幅度均可预置和步进调整的信号发生器，同时将输出的频率占空比和幅度用数码管显示出来，并给出了其程序的框图。     

响应面法优化光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1培养条件

文章首先用单因素法分别对光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1的培养条件——温度、光照强度、接种量进行了考察,确定了最佳培养条件:温度30℃,光照强度3000 lx,接种量15％.在此基础上,采用中心组合试验设计结合响应面分析法(Response Surface Methodology,RSM)对影响光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1的发酵条件进行进一步优化.结果表明,主要影响因素的最佳条件:培养温度32.54℃,光照强度2995.85 lx,接种量15.80％,光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1的类胡萝卜素产量为16.72mg/L,与理论值16.86 mg/L相差0.83％.因此,利用响应面分析法对光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1的培养条件进行优化合理可行.     

利用响应面方法优化光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1培养基

试验采用响应面方法优化光合细菌Rhodospirillum Rubrum S1培养基.结果表明:培养基成分中柠檬酸、牛肉膏、MgSO4和FeSO4对于光合细菌的生长影响最为显著.最优培养基配方:柠檬酸为3.5291 g/L、牛肉膏为3.3190 g/L、MgSO4为0.5083 g/L、FeSO4为0.0194 g/L.此时最大响应值为13.77 mg/L.验证实验结果表明,采用优化后的培养基,光合细菌的类胡萝卜素产量达到13.69 mg/L,与理论值相差0.58％.因此,利用响应面法对光合细菌的培养基进行优化合理可行.     

重组Thermomonospora fusca纤维素酶Ce16A在毕赤酵母中的表达及纯化

目的 在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Ce16A。方法 提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板，PCR扩增纤维素酶Ce16A基因，克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZaA上，用电击法将线性Ce16A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株，克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株，培养传代。选择稳定株，培养3d后取培养液上清，用His-Bind Quick Cartridge 300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Ce16A。结果 一步His-Bind Quick Cartridge 300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Ce16A，SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60000，收率为200mg／L，用羧甲基纤维素法测活性为500U／mg，用滤纸法测活性为1U／mg。结论 已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Ce16A。     

重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A在毕赤酵母中的表达及纯化

目的在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A。方法提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板,PCR扩增纤维素酶Cel6A基因,克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,用电击法将线性Cel6A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株,克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株,培养传代。选择稳定株,培养3d后取培养液上清,用His-BindQuick Cartridge300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A。结果一步His-Bind Quick Cartridge300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A,SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60000,收率为200mg/L,用羧甲基纤维素法测活性为500U/mg,用滤纸法测活性为1U/mg。结论已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A。     

4,4′-双[4-氯苯磺酰基联苯的研制(Ⅱ)

本文通过4,4′-联苯双磺酰氯为中间体的合成路线,叙述4,4′-双[4-氯苯磺酰基]联苯的制备方法。