测试片法在食品菌落总数检测中的应用研究

目的探究菌落总数测试片法检测食品中菌落总数的可行性。方法用菌落总数测试片法和国家标准方法同时对制备的菌悬液、自然污染食品样品和人工污染食品样品的菌落总数进行检测,采用t-检验分析2种方法检测结果的差异,采用Pearson相关分析确定2种检测方法之间的相关性。结果菌悬液和自然污染食品样品菌落总数测试片法的变异系数为0.16%~3.76%,人工污染食品样品的变异系数为0.78%~8.61%;菌落总数测试片与国家标准方法在不同类型食品样品检测结果之间没有显著性差异(P<0.05),2种方法的检测结果呈正相关(r2>0.976,P<0.001)。结论菌落总数测试片法的检测效果与国家标准方法相当,可作为替代方法,用于检测食品中的菌落总数。     

食品中人星状病毒的定量检测方法

目的:应用一步法微滴数字PCR方法(RT-ddPCR),建立一种食品中人星状病毒(HAstV)定量检测方法。方法:筛选引物探针,建立HAstV RT-ddPCR方法;利用其它常见食源性病毒RNA,确定特异性;梯度稀释HAV RNA标准样品确定检测限、准确度和重复性。用已知效价的MS2噬菌体制备人工污染样品,研究RT-ddPCR方法在不同种类食品基质中的检测限和回收率,比较2种RNA提取方法的病毒检出量。结果:HAstV RT-ddPCR方法准确度、灵敏度和重复性良好,检测限105~100拷贝/μL,最低定量限5拷贝/μL;不同种类食品基质的检测限分别为7.2×106~3600拷贝(贝类消化腺),7.2×106~3600拷贝(硬表面食品),7.2×106~7200拷贝(生食蔬菜)、7.2×107~7200拷贝(软质水果);高浓度污染剂量时,Trizol裂解结合磁珠纯化方法病毒检出量显著低于Trizol裂解提取方法(P<0.05);不同种类食品基质中模拟病毒回收率存在显著差异(P<0.05)。结论:本研究建立的食品中HAstV定量检测方法可有效定量检测HAstV,可通过病毒回收率计算样品中HAstV的实际载量。     

蔬菜及水果中NLVs和HAV检测的研究

目的建立蔬菜水果中诺沃克样病毒(NLVs)和甲肝病毒(HAV)的RT-PCR检测方法。方法使用具有较强缓冲力的甘氨酸缓冲液将病毒从试样表面洗脱下来,用PEG6000将病毒沉降后进行RNA提取和RT-PCR检测。结果蔬菜中NLVs和HAV检测的灵敏度可达1.0×103RT-PCRU50/30 g试样和30 TCID50/30 g试样。而草莓样品的NLVs和HAV最低检出限为1.7×103RT-PCRU50/100 g试样和48 TCID50/100 g试样。结论该方法灵敏、可靠。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与VITEK和rpoB基因测序三种方法对食品中葡萄球菌鉴定效果的比较

目的 比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)、rpoB基因测序和VITEK 2 Compact三种方法对葡萄球菌的鉴定效果。方法 同时采用三种方法对实验室保存的从食品中分离的59株葡萄球菌进行鉴定。结果 MALDI-TOF MS法和rpoB基因测序法一致性达100.00%,与VITEK 2 Compact法的一致性为83.05%(49/59)。7株菌因超出VITEK 2 Compact鉴定范围而鉴定错误。MALDI-TOF MS法可快速将59株菌准确鉴定为17种葡萄球菌,鉴定分值与细菌种类相关。金黄色葡萄球菌的鉴定分值最高(>2.300),松鼠葡萄球菌、鱼发酵葡萄球菌和琥珀葡萄球菌的鉴定分值相对较低(1.700～2.000)。结论 相比rpoB基因测序法和VITEK 2 Compact法,MALDI-TOF MS法更加快速准确。为达到更好的鉴定效果,现有数据库仍需进一步优化。     

微滴式数字聚合酶链式反应定量检测水产品中溶藻弧菌

目的建立水产品中溶藻弧菌微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法。方法采用SN/T 1870—2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中溶藻弧菌的引物探针,建立优化ddPCR反应体系,梯度稀释溶藻弧菌纯培养液,确定ddPCR方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ);通过人工添加试验,比较ddPCR与实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法定量的准确性,以验证ddPCR方法用于检测水产品中溶藻弧菌的可行性。结果所建立的水产品中溶藻弧菌ddPCR检测方法经过溶藻弧菌标准菌株、分离菌株以及其他近源菌株验证,具有良好的特异性;纯培养的LOD和LOQ一致,均为2.2拷贝/反应,相当于110 CFU/ml纯菌液,定值结果与传统平板计数方法相差0.04个对数值。在人工污染模拟试验中ddPCR的定量结果较qPCR更接近理论添加值,检测重复性以及对低浓度样品的检出情况也均优于qPCR。ddPCR对人工污染样品的LOQ可达120拷贝/g。结论溶藻弧菌ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可为快速定量检测溶藻弧菌提供参考。     

2008~2017年间北京进出口水产品中副溶血性弧菌耐药性分析

目的 了解北京进出口水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VP)的耐药情况。方法 对2008~2017年间北京进出口水产品中分离出的320株副溶血性弧菌应用药敏纸片扩散法(K-B法)进行21种常用抗生素药敏测试。结果 89.1%的实验菌株同时对氨苄西林耐药, 而对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素、多粘菌素B、亚胺培南全部敏感; 分别有高达94.7%和82.1%的菌株对红霉素和链霉素表现为中介。结论 实验菌株存在大量中介耐药和异质性耐药的情况, 应进一步加强水产品中副溶血性弧菌耐药性的监测工作, 以期指导临床和水产养殖中抗生素的使用。     

北京进出口水产品中259株霍乱弧菌分离株的耐药性研究

目的对北京进出口水产品中259株霍乱弧菌分离株的耐药性进行研究。方法采用纸片扩散法对259株霍乱弧菌分离株进行药敏性试验,共选择10大类21种抗生素。结果所测试的259株菌株对庆大霉素、阿米卡星、诺氟沙星、妥布霉素、强力霉素及亚胺培南的敏感率高,均在95%以上;对除亚胺培南外20种抗生素都具有不同程度的耐药性,其中对链霉素和多粘菌素B耐药率较高,分别为36.3%和54.1%。所有菌株对21种抗生素均有不同程度的中介反应,其中链霉素、卡那霉素、多粘菌素B及红霉素中介率较高,分别为50.2%、44.0%、43.2%和83.4%;其中93株表现为多重耐药性。结论北京地区水产品中霍乱弧菌分离株对所测试的抗生素存在大量的中介和耐药情况,应加强对霍乱弧菌耐药性的监测力度。     

3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片的评价

目的评价3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片在食品检测中的准确性和适用性。方法以SN/T 2775—2011的要求为基础,采用3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片法和参考方法GB 4789.41—2016进行实验评价,包括线性和准确度、包容性和排他性、耐变性、批间变异及协同实验。结果测试片方法检测结果与国家标准方法检测结果比较无显著差异,耐变性和批间结果亦无显著差异。结论3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片能满足食品样品的检测要求,可以作为检测肠杆菌科细菌的一种有效检测方法。