大鳞副泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的酶解方式研究

为开发大鳞副泥鳅蛋白血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,使用高效液相色谱法测定大鳞副泥鳅蛋白的氨基酸组成,考察泥鳅蛋白的单一酶解方式和复合酶解方式对产生ACE抑制肽的影响,并使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步证实不同酶解方式对泥鳅蛋白的水解效果。结果表明,大鳞副泥鳅蛋白富含疏水性氨基酸(39.823%)、支链氨基酸(18.102%)以及芳香族氨基酸(8.216%),是制备ACE抑制肽的良好来源。脯氨酸蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶单一酶解泥鳅蛋白,酶解产物的最高ACE抑制率分别是81.01%、64.91%和87.84%,最高水解度分别为1.48%、9.04%和28.29%。使用碱性蛋白酶与脯氨酸蛋白酶对大鳞副泥鳅蛋白进行分步酶解与同步酶解,同步酶解方式可以产生更高活性的ACE抑制肽,最高的ACE抑制率为90.14%,IC50为0.491 mg/mL。     

大鳞副泥鳅蛋白ACE抑制肽的分离纯化与鉴定

目的:开发大鳞副泥鳅的ACE抑制肽。方法:采用超滤、葡聚糖凝胶(Sephadex G-15)和半制备型高效液相色谱等多种技术,从大鳞副泥鳅蛋白酶解产物中分离纯化制备了高活性的ACE抑制肽,并利用高效液相色谱质谱—串联质谱对其结构进行解析;利用抑制动力学分析纯化后ACE抑制肽的抑制模式。结果:高活性ACE抑制肽的氨基酸序列为Glu-Gly-His,相对分子质量345.2 Da,IC₅₀值为(17.89±3.28)μg/mL,纯化倍数为27.47。结论:大鳞副泥鳅抑制肽是一种竞争性的ACE抑制肽。     

黄芪多糖对免疫抑制大鳞副泥鳅非特异免疫功能的调节作用

研究黄芪多糖(APS)对免疫抑制大鳞副泥鳅免疫功能的调节作用,在其基础饲料中分别添加0、100、200和400mg/kg的黄芪多糖粉剂,并连续投喂至试验结束,在第15d给阴性对照组注射质量分数0.85%生理盐水,其他各组腹腔注射环磷酰胺,于注射后的第8d测定泥鳅的血液红细胞数、白细胞数活性,血清溶菌酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶,肝胰脏谷草转氨酶活性及谷丙转氨酶抗氧化能力。结果显示:在大鳞副泥鳅基础饲料中添加200mg/kg的黄芪多糖粉剂较其他添加量,拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用较好,显著提高了免疫抑制大鳞副泥鳅血液红细胞(41.35%)、白细胞(4.00%)数量,血清溶菌酶(33.53%)、酸性磷酸酶(42.88%)和碱性磷酸酶(155.10%)活性,肝胰脏谷草转氨酶(58.33%)、谷丙转氨酶(221.43%)活性,过氧化氢酶提高71.06%、总抗氧化能力提高48.39%,丙二醛含量降低51.75%。200mg/kg的黄芪多糖粉剂添加量对免疫抑制大鳞副泥鳅免疫功能调节作用较佳。     

泥鳅蛋白多肽的抗氧化活性

为进一步促进泥鳅蛋白及其加工食品的开发,通过体内以及体外抗氧化实验,对泥鳅蛋白多肽抗氧化能力进行了研究.实验表明,泥鳅蛋白多肽在体外具有一定的抗氧化能力.体内抗氧化实验中,多肽高剂量组中血清、肝脏、心脏的SOD活性与模型对照组相比分别提升36.6％、28.1％、22.3％,GSH-Px活性分别提升43.2％、132.2...     

红烧泥鳅罐头的研制

泥鳅,分布于我国各地的河湖池塘、沼泽田沟,近年也有人工养殖。其形态近似圆筒形,黄褐色或灰黑色,身上斑驳地散布着小黑点,尾鳍圆形,口小鳞细。泥鳅属鱼纲,可是离水后却安然无恙,其因是它能进行肠呼吸。在鱼类中,泥鳅离水后的存活率和存活的时间均是数一数二的。这就给泥鳅的工业化加工带来了极大的便利。泥鳅是一种营养丰富的鱼类,所含的蛋白质比鲤、青、草等鱼类都高,每100g泥鳅肉中含水分73.5g,蛋白质22.6g,脂肪2.9g,热量489.9kJ,钙51mg,磷154mg,铁3mg,     

大豆分离蛋白及卡拉胶对泥鳅肌原纤维蛋白凝胶特性的影响

目的:开发品质优良的淡水鱼鱼糜制品。方法:将不同含量的大豆分离蛋白和卡拉胶添加到泥鳅肌原纤维蛋白中,采用质构仪、色差仪、扫描电镜和红外光谱等探究其对泥鳅肌原纤维蛋白凝胶特性的影响。结果:随着大豆分离蛋白含量的增加,泥鳅肌原纤维蛋白凝胶硬度先降低后升高,弹性先升高后降低,保水性增加,蒸煮损失降低,凝胶网络孔洞越来越大,各二级结构相对含量发生变化;而卡拉胶对凝胶硬度和弹性有减弱作用,对白度及蒸煮损失有较好的改善作用,凝胶网络结构规则有序且无规则卷曲结构消失。结论:大豆分离蛋白对泥鳅肌原纤维蛋白凝胶的作用效果较卡拉胶更明显,形成的复合凝胶性能更好。     

泥鳅抗菌肽制备及其抑制致鳗弧菌作用

为提升泥鳅开发利用价值,开发新的抗菌活性成分,利用胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对泥鳅肉糜进行酶解,通过分离和超滤提取泥鳅酶解产物。结果表明,木瓜蛋白酶的酶解产物M1(<5 kDa组分)对常见致病菌嗜水气单胞菌、副溶血性弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌、温和水气单胞菌等具有抗菌作用。抗菌物质的分子量小于5 kDa,其抑制鳗弧菌的IC50值为15.76 mg/mL,可抑制鳗弧菌生物膜的形成。推测其通过破坏鳗弧菌的细胞膜发挥其抗菌作用。     

酶解泥鳅蛋白制备小分子肽的工艺研究

以泥鳅为原料,酶解泥鳅蛋白制备小分子肽。运用响应面分析法优化泥鳅蛋白酶解的工艺条件,探讨了泥鳅蛋白酶解过程中液料比、酶解温度、酶解时间对多肽得率的影响。结果表明,泥鳅蛋白酶解的工艺条件为:液料比1.3、酶解温度57℃、时间9.42h,肽的得率为36.3%(模型预测值为36.37%)。通过OriginPro7.0软件计算,在显著性水平P>0.05下,预测值与实际值无显著不同,表明运用响应面分析法优化泥鳅蛋白酶解工艺条件是可行的。     

泥鳅黏液多糖的化学组成、理化性质及体外降糖活性

为对泥鳅的加工与流通副产物黏液进行开发利用，采用超声辅助的水提醇沉法，从大鳞副泥鳅黏液中提取一种泥鳅黏液多糖(PDMP)。采用紫外光谱、凝胶过滤色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱、1H NMR和13 C NMR分析PDMP化学组成，采用X射线衍射、热重分析和扫描电镜研究PDMP的理化性质。结果表明，PDMP的总糖含量为(95.51±2.27)%，硫酸基含量为(23.41±0.87)%，不含糖醛酸，含有乙酰基。PDMP的分子质量为362 928 u，由岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖和木糖组成，物质的量比为13.27 ∶ 5.68 ∶ 2.31 ∶ 2.23 ∶ 0.45。PDMP中含有(1→)-和(1→6)-的α-糖基和β-糖基的吡喃糖。PDMP热稳定较强，有一定的结晶性，表面具有均一密集的蜂窝状孔洞，内部具有大小不一的孔洞结构。体外降糖研究表明，PDMP对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50值分别为152 μg/mL和550 μg/mL。9 mg/mL的PDMP对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的抑制率分别达到65.02%和86.40%。本研究结果为PDMP在现代食品工业和医药领域的应用提供参考。     

超声波辅助酶解制备泥鳅蛋白源ACE抑制肽

以泥鳅为原料,采用超声波辅助菠萝蛋白酶水解泥鳅蛋白制备降血压肽。在单因素试验的基础上,通过正交试验优化超声及酶解处理工艺,得到最佳的试验条件:超声功率300 W,超声波酶解处理时间2 h,处理温度50℃,p H=6.5、底物质量分数30%,此时泥鳅蛋白酶解液的ACE抑制率为90.8%。同未经超声波处理的泥鳅蛋白酶解液相比,酶解时间降低了2 h,处理温度降低5℃,加酶量降低18%,而且酶解液的ACE抑制活性得到提高。试验结果表明,超声波辅助酶解泥鳅蛋白可显著提高酶解效率,增强活性肽的ACE抑制活性。     

基于荧光及紫外光谱法对红松种鳞多酚与乳清蛋白相互作用的研究

利用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法,研究了红松种鳞多酚与乳清蛋白之间的相互作用及其作用方式。紫外-可见吸收光谱表明:红松种鳞多酚与乳清蛋白发生了相互作用并生成新的复合物,改变了蛋白质芳香族残基在空间结构中所处的微环境,诱导乳清蛋白的构象发生改变。荧光光谱表明:红松种鳞多酚对乳清蛋白有较强的荧光猝灭作用且猝灭类型为生成复合物的静态猝灭作用。通过计算得出在不同温度下其二者相互作用的表观结合常数(KA)分别为:1.111×104 L/mol(25℃),2.201×104 L/mol(30℃),6.206×104L/mol(35℃),对应的结合位点数(n)分别为:0.885、0.937、1.043。由热力学参数分析确定红松种鳞多酚与乳清蛋白间的相互作用反应是吸热过程,反应的主要作用力是疏水作用力。     

泥鳅多糖的研究进展

近年来随着泥鳅养殖及产业化的快速发展, 泥鳅资源的开发和高值化利用已成为研究热点。泥鳅是一种含有丰富优质蛋白、脂肪酸以及微量元素的营养健康食品, 具备多种保健功能和药用价值, 其中泥鳅多糖是从泥鳅中提取得到的一种游离中性多糖, 具有耐缺氧、抗肿瘤、抗氧化、调节免疫、降血糖、抗炎等功能。本文主要综述了泥鳅多糖的制备方法、分离提纯方法、结构表征、生物活性、精深加工等方面的研究进展,旨在为泥鳅多糖的高值化利用提供一些理论基础, 为泥鳅产业链的快速发展提供新的发展方向。     

泥鳅蛋白源ACE抑制肽的理化特性及营养评价

以泥鳅蛋白酶解物中提取的ACE抑制肽为原料,研究其物理、化学特性,并评估其营养价值。试验结果表明:泥鳅ACE抑制肽在较宽的p H值(3~9)范围内具有优良的溶解性能,氮溶解指数均在70%以上。泥鳅ACE抑制肽具有较好的乳化能力(60.8%)和乳化稳定性(68.6%)。泥鳅蛋白水解后,ACE抑制肽的起泡性及起泡稳定性分别降低15.8%和15.5%。通过氨基酸组成分析,泥鳅ACE抑制肽的氨基酸组成平衡性好,必需氨基酸总含量达到42.52%,功效比值PERⅠ为2.9,PERⅡ为2.9,PERⅢ为2.3。高含量的疏水性氨基酸(47.9%)、芳香族氨基酸(13.3%)以及支链氨基酸(17.7%),是泥鳅ACE抑制肽具有降压特性的重要物质来源。     

鳞杯伞可溶性蛋白提取工艺的优化及其营养评价

以五台山鳞杯伞子实体为原料,采用响应面分析法对鳞杯伞蛋白提取工艺进行优化,并对其蛋白氨基酸组成与营养价值进行分析。鳞杯伞可溶性蛋白的提取在单因素的基础上,选取料液比、提取液pH值、提取温度3个关键的因素进行响应面试验,最佳提取条件为:液料比31 mL/g、提取液pH 11、提取温度51℃、提取时间60 min,蛋白提取率达(33.65±0.17)%。在此提取条件下,样品蛋白的氨基酸分析表明:鳞杯伞蛋白氨基酸种类齐全,必需氨基酸(essential amino acid,EAA)占氨基酸总量(total amino acid,TAA)的39.35%,必需氨基酸与非必需氨基酸(nonessential amino acid,NEAA)的比值为64.89%,该样品蛋白接近联合国粮农组织(Food and Agriculture Organization,FAO)/世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提出的推荐值;因此,可以作为一种优质的蛋白质。     

基于iTRAQ方法分析副溶血弧菌活的非可培养状态的差异表达上调蛋白

采用低温、寡营养和食品防腐剂处理诱导副溶血弧菌进入活的非可培养状态(viable but nonculturable state,VBNC),并利用同位素标记相对与绝对定量(isobaric rags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)蛋白组学技术分析处于VBNC状态和对数生长期的副溶血弧菌的差异表达蛋白,结合液质联用技术对蛋白进行鉴定,对差异蛋白进行GO富集分析和Pathway通路分析。结果表明,副溶血弧菌于山梨酸钾浓度为10 mmol/L的3%Na Cl寡营养培养基中,4℃条件下40~45 d即可进入到VBNC状态。通过i TRAQ蛋白组学技术共鉴定到135880个蛋白,其中定量的蛋白有1088个;在VBNC状态显著下调蛋白36个,上调蛋白15个。差异表达的上调蛋白主要是外膜蛋白、转运蛋白、铁蛋白和其他参与代谢的关键蛋白,表明VBNC状态的副溶血弧菌根据环境应激提高这些蛋白的表达以保持活性。该研究结果为更深入探讨VBNC的分子形成机制提供了理论基础。     

壳聚糖对泥鳅毒性及其引发急性死亡分析

壳聚糖对动物的安全性是公认的,但壳聚糖能造成泥鳅急性死亡,其死亡原因值得探索,因此本实验研究了不同种类、不同质量浓度的壳聚糖对泥鳅死亡的影响,并观察泥鳅死亡症状,测定半致死剂量（half lethal concentration,LC50）、呼吸强度、细胞膜透性、红细胞核异常情况等。结果发现不同壳聚糖均能引起泥鳅快速死亡,且质量浓度和温度越高,泥鳅死亡速度越快,壳聚糖对泥鳅的LC50为16 mg/L。壳聚糖可引起泥鳅体表黏液大量脱落,导致液体浑浊;破坏泥鳅皮肤结构,影响鱼鳃呼吸;刺激泥鳅早期快速游动;显著增加泥鳅呼吸强度,导致水中溶解氧质量浓度低于极限值;使泥鳅耗尽自身糖原,导致后期无力浮出水面进行肠呼吸;促进泥鳅体内的氯、钠、钾离子和氨大量渗出,破坏细胞正常功能。壳聚糖引发泥鳅急性死亡主要与壳聚糖损害泥鳅呼吸系统有关,但壳聚糖一般不会进入人类呼吸系统,因此壳聚糖按照食品添加剂标准使用还是安全的。     

白鳞马勃发酵工艺优化及其菌丝对小鼠酒精性胃溃疡的保护作用

摘要：目的 优化白鳞马勃发酵条件并探讨白鳞马勃菌丝对乙醇诱导小鼠胃溃疡的保护作用。方法 以菌丝干重为评价指标,考察碳源、氮源、KH2PO4及MgSO4对白鳞马勃发酵的影响,通过正交试验优化最佳发酵工艺。小鼠随机分为空白对照组、乙醇模型组、奥美拉唑药物阳性对照组（0.5g·kg-1）、白鳞马勃菌丝高、中、低剂量组（1.0g·kg-1、0.75g·kg-1、0.5g·kg-1）灌胃给药15d,无水乙醇（0.2mL/只）建立乙醇型胃溃疡的小鼠模型。Elisa检测血清和胃组织中Superoxide dismutase（SOD）、Malondialdehyde（MDA）、Interleukin- 6（IL-6）、Tumor necrosis factor-α（TNF-α）及血清中Nitric oxide（NO）含量; HE染色观察小鼠胃组织病理学改变;Western Blotting检测胃组织NF-κBP65、P-NF-κBP65、IκBα、P-IκBα蛋白表达。结果 优选白鳞马勃最佳发酵工艺为：3%蔗糖、2%酵母粉、0.15%MgSO4+0.15%KH2PO4,菌丝干重可达0.7411g。白鳞马勃菌丝能显著降低胃溃疡小鼠血清及胃组织中MDA、IL-6、TNF-α含量,显著增加SOD及NO含量;菌丝高剂量组显著减轻胃组织损伤;白鳞马勃各剂量组均能显著增加NF-κBP65、IκBα蛋白含量,显著降低P-NF-κBP65、P-IκBα蛋白含量。结论 白鳞马勃发酵工艺稳定可靠,培养基成本较低。白鳞马勃菌丝能较好的保护小鼠胃组织免受损伤,其机制推测是通过下调P-IκBα蛋白表达,上调IκBα蛋白表达,减少P-NF-κBP65表达,上调NF-κBP65表达增加,从而抑制炎症蛋白表达,达到对乙醇性胃溃疡的保护作用。     

泥鳅肽制备及其脱色工艺优化

以泥鳅为原料，探究碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶对泥鳅蛋白水解度和肽得率的影响。通过单因素试验结合响应面试验优化泥鳅肽制备工艺。同时探究活性炭及硅藻土对泥鳅肽脱色率及保留率的影响，进而利用单因素试验结合响应面试验优化脱色工艺。结果表明：碱性蛋白酶为最适酶，在碱性蛋白酶作用下，泥鳅肽制备最优工艺为酶解温度45 ℃、pH10.0、酶解时间90 min、酶活248 U/mL、料液比1∶10（g/mL），在该条件下，泥鳅肽得率为（37.27±0.81）%；活性炭脱色效果较硅藻土好，脱色条件为活性炭添加量2.5%、脱色时间30 min、脱色温度54 ℃、pH3.0，该条件下泥鳅肽脱色率为（57.91±0.19）%，肽保留率为（94.90±0.02）%。     

蛋白酶及其作用方式对制取青鳞鱼肉水解蛋白的影响

研究了胰蛋白酶、风味酶单酶水解及与木瓜蛋白酶双酶水解对青鳞鱼鱼肉水解蛋白α 氨态氮含量和可溶性蛋白得率的影响 ,确定了最佳水解条件 ,分析了可溶性蛋白的氨基酸组成并对其进行了营养评价     

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明：制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。