地西泮单克隆抗体的制备及其酶联免疫吸附检测方法的建立

目的制备地西泮(diazepam,DZP)单克隆抗体,并且对制备的抗体进行一系列性质鉴定。方法利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl)carbodi imide hydrochloride,EDC·HCl]法合成免疫原和包被原,用免疫原免疫Balb/C小鼠,当效价到1:16000以后取小鼠脾脏与SP2/0进行细胞融合。然后采用竞争结合双阳性两步筛选法,筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,并且利用有限稀释亚克隆方法得到单株细胞,采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。利用辛酸-饱和硫酸铵法对腹水型抗体进行纯化,利用酶联免疫吸附法、表面等离子共振仪(surface plasmon resonance,SPR)等方法对纯化后的抗体进行性质鉴定。结果成功合成了地西泮免疫原和包被原,免疫Balb/C小鼠7次后效价达到1:16000,最终制备出单克隆抗体,抗体解离常数(dissociation constants,KDs)为4.0985×10-7 mol/L,且与大部分结构类似物没有明显的交叉反应。应用此抗体建立间接竞争ELISA法,抗体的IC50=10.8 ng/mL,检测范围为0.45~862.00 ng/mL。结论本研究制备出了地西泮单克隆抗体,为地西泮的免疫学检测提供了有力的支持。     

纳米金-壳聚糖/多壁碳纳米管修饰的玻碳电极检测水中微量的孔雀石绿

目的制备基于纳米金-壳聚糖/多壁碳纳米管修饰的玻碳电极,用于检测水样中微量的孔雀石绿。方法实验利用电沉积法首先在玻碳电极表面沉积金纳米颗粒,然后利用溶剂蒸发法在纳米金层表面再修饰混有壳聚糖的羧基化多壁碳纳米管。实验设计以多壁碳纳米管/纳米金共修饰的玻碳电极作为电化学传感元件,采用循环伏安法(CV)和微分脉冲伏安法(DPV)检测MG。结果表明电极的修饰膜可加速MG的电子传递速率,促进电位变化,并显著增强MG的氧化峰电流。得到的差分脉冲峰电流与孔雀石绿浓度对数值在2.5×10-9～2.5×10-4 mol/L范围内呈良好线性关系,检测限为9.3×10-10 mol/L。结论本研究制备的基于纳米金-壳聚糖/多壁碳纳米管修饰玻碳电极的电化学传感器适于孔雀石绿的快速、灵敏检测。     

硅烷法固定ssDNA制作的压电式DNA传感器

利用硅烷法将ssDNA固化T方向切割、3.58MHz和10MHz石英晶体金电极上,构建了压电DNA传感器,建立了快速检测葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的方法。优化了固定SEB基因的条件,并用动态法、静态法和斑点杂交法进行了固化效果观察。结果表明:该传感器2h后,有较好响应;对不同长度DNA探针固化效果进行比较,169bp(即169个碱基)SEB探针固定和杂交效果较好;利用0.5mol/LNaOH进行电极洗脱,时间为45min,电极可以再生,且传感器可以重复使用3次;利用1.2mol/LNaOH和1.2mol/LHCl洗涤电极,该电极可多次再利用;固化好的电极于4℃条件下可以保存三周之久。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌分泌的肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为与食品中毒相关的重要毒素之一而被广泛报道。同时由于其具有热稳定性、易制备、高毒及易传播等特点引起科研人员的高度重视,因此,建立SEB高效的检测方法非常重要。本文对SEB的检测方法进行了综述,主要讨论了生物学检测、免疫凝集实验、琼脂糖扩散法、酶联免疫检测技术、放射性免疫检测技术、免疫荧光检测技术、胶体金试纸条检测技术、基因探针、仪器分析、生物传感检测等检测方法的原理及相关国内外研究进展的应用和局限,这对提前预防金黄色葡萄球菌肠毒素B引起的食物中毒具有重要意义,同时也为今后开发新型检测方法提供理论参考和技术支持。     

基于分子印迹膜用于检测组胺的电化学传感器

利用电化学传感技术,对水样中的组胺进行检测,为研发相应的食品快检技术与设备提供技术基础。在金电极上制备分子印迹膜,应用电化学进行表征,建立电化学检测组胺的方法。该方法检出限:0.5ng/mL,检测范围:0.5ng/mL~50 ng/mL,检测时间30 min。所建立的方法对于检测水样的组胺具有灵敏度高、准确度好和精密度高。     

食品安全快速检测技术研究进展

食品安全关系人民群众生命安全与社会的长治久安,保障食品安全是民生工程、民心工程,更是一项重大而艰巨的政治任务。进入新时代,人民群众日益增长的美好生活需要对食品安全提出新的要求。食品安全检测技术对我国的食品安全意义重大,但传统大型的、检测时间长的食品检测已不能满足当前需求,这使得时间短、成本低的检测技术成为中国食品检测未来的发展趋势。快速检测技术将检验过程简单化、快速化,检测仪器上手容易、操作简单,近年来,随着多学科的交叉融合,食品安全快速检测技术得到了迅速的发展。本文综述了快速检测技术在食品安全领域的主要应用,列举了当前食品安全快速检测技术研究热点,并展望了其未来发展的方向。     

上转换发光免疫层析法快速检测牛奶中雌二醇

建立定量快速检测雌二醇(E2)的上转换免疫层析技术。以上转换发光材料(UCP)为新型标记物,采用戊二醛法偶联单克隆抗体(m Ab),制备UPT-m Ab复合物,并以其作为探针,基于小分子竞争结合,建立免疫层析试纸条方法,并对试纸条性能进行评价。方法特异性强,稳定性好,灵敏度高,最低检出限低至2.75 ng/m L,线性范围为5 ng/m L~2 000 ng/m L,回收率88.88%~103.5%,变异系数CV10%。成功构建了上转换免疫层析法用于检测雌二醇,适用于现场快速检测,具有良好的经济价值和应用前景。     

量子点荧光免疫检测牛奶中己烯雌酚、雌二醇

研究牛奶中己烯雌酚、雌二醇的荧光免疫检测技术并对实际样品进行检测。辅助量子点标记技术,结合间接竞争酶联免疫吸附法原理建立检测标准曲线,评价特异性,对实际样品进行检测。己烯雌酚的荧光免疫检测在0.472 ng/mL~66.597 ng/mL内呈线性关系,最低检测限为0.236 ng/mL。雌二醇在0.418 ng/mL~195.065 ng/mL内呈线性关系,最低检测限为0.109 ng/mL。建立一种快速检测牛奶中己烯雌酚的荧光免疫检测方法,方法可同时运用于雌二醇的检测,特异性与回收率良好,可补充传统方法用于实际样品中雌激素类残留测定。     

应用于食品检测的上转换材料的合成与修饰

镧系元素掺杂的上转换发光纳米颗粒(UCNPs)因其独特的化学和光学特性而成为了食品检测领域中最具应用前景的材料之一。发现该技术在布鲁氏菌、链球菌及大肠杆菌等食品安全检测中应用效果极好。为了进一步的推进其在食品安全领域中的应用,需要改进其的合成方法与表面修饰方法。本文利用水热法合成了不同表面包覆剂包覆的UCNPs并且探讨了几种修饰UCNPs的方法,使其能够更好地应用于食品检测领域。     

青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB与luxCDABE在大肠杆菌中表达与发光特性比较

目的对比淡水发光细菌——青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE在新的表达体系中的表达,为构建特异性检测毒性的重组菌提供基础。方法设计引物扩增得到青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE,将其分别与表达载体pET-22b连接,转化大肠杆菌DH5α测序,阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。检测两种重组菌的发光特性及重金属离子对其毒性影响。结果通过测定重组菌的相对发光强度(RLU)和OD600值可知:luxAB和luxCDABE重组菌在癸醛和IPTG浓度均为1μL/mL培养基里培养第1小时后达到最大RLU,值分别为750618.5和140901.5。检测重金属离子Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cr~(6+)对重组菌的毒性,EC_(50)(半有效浓度)值分别为:luxAB重组菌:5.160、5.129、7.097 mg/L;luxCDABE重组菌:6.137、7.643、7.736mg/L。结论在相同培养条件下,luxAB重组菌比luxCDABE重组菌获得了更大的RLU,说明lux AB表达效果更好。重金属对重组菌的毒性影响检测,luxAB重组菌得到了更低的EC_(50)值,进一步论证了这个观点。