抗SARS刺突蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗SARS病毒表面刺突蛋白单克隆抗体,用于SARS研究。方法大肠杆菌中表达的SARS-S2蛋白经纯化后免疫小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备单克隆抗体,并进行ELISA和Westernblot鉴定。结果所制备的抗SARS病毒表面刺突蛋白单克隆抗体,能与表达的SARS-S2蛋白发生特异性结合。结论已获得了抗SARS病毒表面刺突蛋白单克隆抗体。     

普洱茶水提物对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的探讨普洱茶水提物对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法以佛波酯处理THP-1细胞48 h,分化得到巨噬细胞,以其为炎症细胞模型,用不同浓度的普洱茶水提物(125、250μg/ml)与终浓度为100 EU/ml的脂多糖的混合物作用于巨噬细胞,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量。结果普洱茶水提物能有效抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌,且浓度为250μg/ml的普洱茶水提物对TNF-α分泌的抑制作用强于浓度为125μg/ml的普洱茶水提物,呈剂量依赖性。结论普洱茶水提物对巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌具有抑制作用。这种效果与已知的绿茶抗炎的主要成分EGCG无关。     

发酵对普洱茶中游离咖啡因含量的影响

目的探讨普洱茶发酵过程中咖啡因的存在形式及游离咖啡因含量的变化,为监测茶叶发酵程度,控制茶品质量提供依据。方法应用低pH沉淀结合高效液相色谱法(HPLC)检测普洱茶发酵全程中6个主要发酵阶段[一翻、二翻、三翻、四翻、五翻样品和出堆样品(熟茶)]样品的游离咖啡因和结合咖啡因含量。结果普洱茶发酵过程中,游离咖啡因含量逐渐降低,从一翻样品的(2.555±0.104)%降至出堆样品的(1.878±0.049)%,超过1/4的咖啡因与茶中的其他组分相结合,形成结合咖啡因。结合咖啡因的含量不断增加,四～五翻期间增幅最大,从0.084%增至0.647%;出堆样品中结合咖啡因的含量最高,为0.703%。结论发酵过程中,普洱茶中的游离咖啡因含量逐渐降低。本实验为监测茶叶发酵程度,控制茶品质量提供了依据。     

核桃油对脂多糖诱导小鼠小肠炎性因子TNF-α的影响

探讨核桃油（Walnut oil,WO）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠急性损伤小肠组织中炎性因子-肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor alpha,TNF-α）水平的影响。将昆明种小鼠随机分为4组：正常对照组（Con）、LPS组、LPS+WO组和WO组,采用酶联免疫法、实时荧光定量PCR、免疫组化、蛋白印迹和苏木素-伊红染色方法检测小鼠血清与小肠组织炎性因子TNF-α表达水平及其组织病理学变化。结果表明：与Con组相比,LPS组小鼠血清和小肠组织中TNF-α表达水平显著增高,小肠组织病理加重;与LPS组相比,LPS+WO组小鼠血清和小肠组织中TNF-α表达水平显著降低,小肠组织病理减轻;WO组与Con组相比,TNF-α表达水平无显著变化。核桃油可能通过抑制小鼠小肠组织中炎性因子TNF-α的表达水平对LPS诱导的急性肠道损伤发挥保护作用。     

pET28a-Chaperonin 10重组载体的构建及SARS-CoV蛋白高效表达

目的建立在大肠杆菌中高效表达SARS-CoV蛋白的表达系统。方法PCR扩增BCG分子伴侣10基因,并将其连接到pET28a载体上,构建成分子伴侣10融合蛋白表达载体。在该载体Chaperonin10基因的3′端克隆SARS-N、SARS-E、SARS-S和SARS-M基因,在BL21(DE3)中进行诱导表达。结果SARS-E、SARS-N在与分子伴侣10融合后能获得高效表达。结论该表达系统可使部分在大肠杆菌中难于表达的SARS-CoV蛋白获得高表达。     

人巨细胞病毒融合表达载体的构建及鉴定

目的构建含人巨细胞病毒(HCMV)gB680糖蛋白基因和突变的pp65蛋白基因(pp65m)的融合表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达。方法用PCR法从HCMV基因组中钓取gB680和pp65m蛋白基因,分别亚克隆入pMD18-T载体中,经酶切鉴定并测序后,构建真核表达载体pVAX1/gB680+pp65m,以ELISA法检测其在COS-7细胞中的瞬时表达。结果重组质粒含有gB680和pp65m融合基因,并能在COS-7细胞中表达。结论已成功构建了人巨细胞病毒融合表达载体,并可在真核细胞中表达。     

表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立

目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验。结果表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同。Westernblot检测显示,在相对分子质量约17000处有特异蛋白反应带。ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31μIU/ml。小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显。结论人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达。     

重组分泌型人生长激素的纯化

rh GH工程菌 W310 0发酵培养后 ,经低渗裂解、阴离子交换柱层析、疏水层析、分子筛层析 ,得到纯化的人生长激素 ,纯度为 97%以上 ,比活大于 2 .5 IU / mg     

天然二苯乙基类化合物的结构、来源及药理活性研究进展

二苯乙基类化合物是两个苯甲基结构单元通过甲基的C-C单键连接而成的一类重要化合物。其广泛分布于不同的植物中,结构类型多样,并具有调节植物生长、抗氧化、抗菌、抗病毒活性和细胞毒活性等多种生物活性而成为研究的焦点。总结了天然二苯乙基类化合物的结构、来源及药理活性等的研究进展,旨在为二苯乙基类化合物的深入研究提供参考。