新技术在原料乳与乳制品中致病菌检测方面的应用

介绍了ATP生物发光技术、环介导等温扩增(LAMP)技术、基因芯片技术、生物传感器技术和微流体芯片技术等一系列迄今为止最为新兴的技术,在原料乳与乳制品检测方面的应用情况。     

环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌

利用环介导等温扩增方法的快速、简便等优点,建立一种检测乳中阪崎肠杆菌的方法.以阪崎肠杆菌的OmpA序列为靶基因,设计特异性引物.优化并建立LAMP检测乳中阪崎肠杆菌的方法.结果表明,LAMP检测阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度为3.7×101cfu/mL,其灵敏度是PCR方法的10倍.人工污染阪崎肠杆菌灭菌乳的检测限为4.3×101 cfu/mL.对23株致病菌进行特异性实验,特异性良好.该方法具有特异性强、灵敏度高、设备简便、耗时短等优点,在食品检测中具有良好的应用前景.     

乳及乳制品中动物水解蛋白L-羟脯氨酸的检测技术

介绍了检测乳及乳制品中L-羟脯氨酸的常用方法,主要包括高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法、氨基酸自动分析仪测定法,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法和分光光度法,并对今后乳及乳制品中动物水解蛋白检测技术的发展趋势进行了分析。     

嗜酸乳杆菌NCFM胞外多糖对小鼠免疫相关基因的调控

目的：研究嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)NCFM胞外多糖对小鼠免疫相关基因的调控作用。方法：通过构建小鼠模型,对小鼠脏器系数进行分析,提取肠组织RNA,采用Real-time RT-PCR方法对免疫相关基因chemokine (C-C motif) ligand 2(CCL2)和interleukin 18(IL18)的表达情况进行分析。结果：脏器系数随着天数的增加而增加,实验组的脏器系数较对照组相比,显著增加。在2个免疫相关基因中,随着时间的延长,IL18和CCL2呈现出先迅速增加后减少的趋势,同时均在第4天表达量达到最大值,且与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。结论：胞外多糖可以提高小鼠免疫脏器的质量,并且能够引起免疫相关基因出现特定表达变化,对小鼠机体的免疫调控具有一定的作用。     

PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌的研究

近年来,金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件频发,这就需要建立一种快速准确地检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。传统方法检测食品中金黄色葡萄球菌活菌存在很多缺点。由于细胞死亡后其DNA依然能够存活许久,所以传统方法不能有效区分DNA来自死菌还是活菌。通过荧光染料PMA与快速检测技术LAMP相结合的方法快速、灵敏的检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌,并对死/活菌进行区分。根据金黄色葡萄球菌nuc基因设计引物,并对LAMP反应体系及PMA-LAMP方法进行优化,同时优化了灭菌乳中提取DNA的方法。在纯培养的金黄色葡萄球菌中,PMA-LAMP方法检测灵敏度为3.2CFU/mL,PMA-PCR方法的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL;对人工污染灭菌乳中的金黄色葡萄球,PMA-LAMP方法检测灵敏度为5×101CFU/mL,而PMA-PCR方法检测灵敏度为5×103CFU/mL。整个反应需要大约6h,说明PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌活菌的新方法。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定乳及乳制品中青霉素类药物残留量

建立了超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中青霉素类药物残留量的方法。利用UPLC-MS/MS外标法进行样品中青霉素类药物的测定。乳制品经乙腈、乙酸锌、盐酸溶液提取,样品再经HLB固相萃取柱富集净化后,进行UPLC-MS/MS检测。结果表明,10种青霉素在1~50 ng/mL范围呈良好线性,线性相关系数大于0.9991。牛奶的平均回收率为88.8%~92.0%,测定结果的相对标准偏差为1%~7%;奶粉的平均回收率在88.7%~91.3%之间,相对标准偏差为5%~11%。研究表明,该方法操作简便、快速、灵敏度高,适用于牛奶和奶粉中10种青霉素类抗生素残留的同时测定。     

植物乳杆菌NDC 75017的降胆固醇作用

植物乳杆菌NDC 75017分离自中国内蒙古传统发酵乳制品。本实验对其体外环境耐受性及其降胆固醇作用进行研究。采用活菌计数法检测植物乳杆菌NDC 75017在pH 2.0～3.0的酸性环境、胆盐质量浓度0.3g/100mL、NaCl质量浓度0～7g/100mL以及模拟人工消化液环境下的耐受情况;同时以邻苯二甲醛法测定其体外降胆固醇能力。结果表明:植物乳杆菌NDC 75017可耐受pH3.0及0.3g/100mL胆盐环境;在7g/100mL的高盐质量浓度条件活菌数仍可达108CFU/mL;可以通过胃进入肠道而保持活性,在肠道处理8h后存活率为58.73%。体外降胆固醇实验测得细菌发酵上清液、菌体洗涤液和细胞破碎液中的胆固醇脱除率分别为16.43%、26.35%和32.87%。植物乳杆菌NDC 75017环境耐受能力良好,具有体外降胆固醇作用,该菌株可以作为降胆固醇的潜在益生菌。