戊糖片球菌表面蛋白性质及抑菌作用研究

以戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) F28-8为研究对象,菌株的生长情况与产酸能力分析表明,F28-8具有良好的酸适应能力,透射电镜(TEM)观察表明其存在蛋白层结构。应用5 mol/L LiCl提取菌株表面蛋白并进行SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS分析,发现该菌株表面含有主要组分为分子量83.5 kDa的N-乙酰基胞壁酿-L-丙氨酸酰胺酶和分子量51. 1 kDa的LysM肽聚糖结合域蛋白。进一步的菌株表面性质测试、胶原蛋白黏附实验以及抑菌实验结果显示,表面蛋白的剥离显著降低了菌株F28-8的表面性质(自动聚集能力、表面疏水性和表面电荷),降幅达到19.0%～56. 1%;LiCl提取的F28-8表面蛋白能显著降低沙门氏菌(Salmonella enterica subsp. CICC 21513)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus CICC 21600)对胶原蛋白的黏附力,降幅分别为74. 59%和81. 16%;LiCl提取的F28-8表面蛋白对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别达到31. 5%和15. 6%。研究结果表明,戊糖片球菌F28-8表面蛋白能改变菌体表面性质,增强其抑制致病菌黏附的能力并表现出一定的抑菌能力,在抗菌剂开发领域具有一定的应用潜力。     

NaCl胁迫下Ca2＋调控发芽大豆生理代谢和γ-氨基丁酸含量变化

为研究NaCl胁迫下Ca2＋对发芽大豆主要生理指标和γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid,GABA）富集的调控作用,利用CaCl2和乙二醇二乙醚二胺四乙酸（ethylene glycol tetraacetic acid,EGTA）处理发芽大豆,研究NaCl胁迫下外源和内源Ca2＋对发芽大豆主要生理代谢和GABA含量的影响。结果显示,发芽大豆经NaCl联合CaCl2处理,其芽长和呼吸速率显著增加,表明CaCl2缓解了NaCl对发芽大豆生长的抑制,同时过氧化氢酶及过氧化物酶活力显著提高,说明CaCl2可能是通过提高抗氧化酶活力来缓解NaCl胁迫下发芽大豆的抑制效应,而施用EGTA则呈相反的变化趋势;NaCl联合CaCl2处理后发芽大豆中GABA含量与单独NaCl处理无显著差异,但显著高于对照组;在NaCl联合CaCl2或EGTA基础上施用氨基胍,发芽大豆子叶中GABA含量分别下降17.1%和9.8%,胚中分别下降26.5%和8.5%,表明NaCl胁迫下施用CaCl2在促进发芽大豆中GABA富集的同时还可保证生物产量,且CaCl2和EGTA处理下多胺降解途径对GABA富集贡献降低。     

响应面试验优化广昌白莲蛋白提取工艺及其酶解多肽抗氧化活性

以广昌白莲为原料,通过单因素试验和响应面试验优化超声波辅助提取白莲蛋白的工艺,并采用胃蛋白酶和碱性蛋白酶对白莲蛋白进行单酶和有次序双酶水解,研究其酶解产物的抗氧化活性。结果表明,广昌白莲蛋白的最佳提取条件为：在超声功率固定250 W条件下,料液比1∶14（g/mL）、提取温度35.5 ℃、提取时间58 min、NaCl浓度0.14 mol/L。所得蛋白提取率达到89.86%,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE）分析显示其分子质量主要分布在14～25 kD和35～60 kD之间;不同酶解方式显著影响了白莲蛋白的酶解效果及其酶解产物的抗氧化活性,其中先胃蛋白酶后碱性蛋白酶的双酶酶解为最佳方式,其蛋白水解度达到20%,其酶解产物（P-A）H的总还原能力（A700 nm）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力和·OH清除能力IC50值分别达到1.002、0.379 mg/mL和1.093 mg/mL,表明广昌白莲蛋白酶解产物具有较强的抗氧化活性。     

源于自然发酵腐乳中5’-AMP脱氨酶高产菌株的筛选

5’-AMP脱氨酶能够不可逆的将腺苷酸转变为肌苷酸,在医疗保健、调味品等领域中应用十分广泛.该研究通过豆腐的自然发酵制备腐乳半成品,并分别以PDA、YPD和MRS培养基进行腐乳中微生物纯化,获得单一菌株36株.通过进一步的摇瓶发酵培养,检测到具有5’-AMP脱氨酶活性的为18株.选取活性最高(编号为DFP-102)的菌株进行菌落形态分析,初步鉴定该菌株为毛霉菌属.通过培养基发酵条件优化,确定该菌株产酶的适宜发酵条件为培养基pH值为6.0,培养温度24℃,接种量为5％,发酵48h.在最佳产酶条件下,5’-AMP脱氨酶活性可达472.3U/mL.     

鸡蛋清蛋白酶解肽的抗氧化活性

分别采用胃蛋白酶和碱性蛋白酶对鸡蛋清蛋白进行单酶和双酶水解,筛选得到水解度较高的鸡蛋清蛋白酶解产物Ⅰ(P-A)H,并对上述酶解产物依次进行超滤和树脂分离,得到高活性的组分ⅠF2。通过总还原力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基(·OH)抗氧化评价体系,分析酶解产物Ⅰ(P-A)H和组分ⅠF2的抗氧化能力。结果表明:Ⅰ(P-A)H具有较强的总还原力和DPPH清除力以及显著的·OH清除能力;组分ⅠF2与酶解产物Ⅰ(P-A)H的抗氧化活性相比,其活性显著性提高。     

一株黄曲霉拮抗细菌F1的筛选、鉴定及其抑菌特性

为获得能有效抑制食品原料中黄曲霉生长的生防细菌,本研究以乳酸菌发酵制品和香辛料为筛菌出发样品,通过菌株分离、初筛和复筛,从黑胡椒中筛选到一株对黄曲霉有强烈抑制作用的菌株F1。依据菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征结合16S rDNA基因序列分析、系统发育树构建来鉴定菌株,最终确定菌株F1为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(保藏编号:CGMCC No.10942),与已商品化的生防菌Bacillus amyloliquefaciens FZB42的亲缘关系最为接近。菌株F1的发酵上清液经过超滤处理以及蛋白酶酶解试验和稳定性试验,结果显示,菌株F1的抑菌成分为分子量30 ku~100 ku的蛋白类物质;在100℃处理30 min后仍能保持87.43%的抑菌活性;在pH值3.0~10.0范围内其相对抗菌活性均在70%以上。研究表明,从黑胡椒中分离到的解淀粉芽孢杆菌F1能够通过代谢产生稳定性较强的抗菌蛋白而达到拮抗黄曲霉的目的,在食品领域具有一定的应用前景。     

不同工艺提取葡萄籽油对体内抗氧化特性的影响

本文研究两种不同方法提取的葡萄籽油对衰老模型小鼠体内抗氧化功能的影响。首先采用纤维素酶浸提和超声波辅助提取葡萄籽油,精炼后灌胃由D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型小鼠,测定小鼠心脏、肝、脑和血清中T-AOC、SOD、GSH-Px和MDA的含量。结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠心脏、肝、脑和血清中T-AOC、SOD、GSH-Px均有不同程度的降低,MDA含量有不同程度的升高,说明小鼠衰老模型构建成功;与模型组相比,两种葡萄籽油各剂量组均能对小鼠脑、肝、心脏和血清中的T-AOC、SOD、GSH-Px活性均有不同程度增强,对MDA值有不同程度的降低;纤维素酶辅助提取的葡萄籽油在增强小鼠体内总抗氧化能力和增强小鼠血清中GSH-Px活力方面稍优于超声波提取的葡萄籽油。结果表明,葡萄籽油能够显著增强衰老小鼠的抗氧化能力;纤维素酶辅助提取的葡萄籽油体内抗氧化能力稍强于超声波辅助法所提葡萄籽油。     

源于鸡蛋清溶菌酶ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定

利用胃肠消化酶系水解疏水性氨基酸含量高的蛋清溶菌酶蛋白,筛选能抗胃肠消化的高活性ACE抑制肽。通过超滤、制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)、分析型RP-HPLC纯化、氨基酸组成分析及基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS),从胃肠消化水解液中分离鉴定出两种ACE抑制肽Lys-Val-Phe(KVF)和Trp-Ile-Arg(WIR),化学合成该两种三肽后,ACE抑制活性测定结果显示其IC50值分别为14μmol/L与88.5μmol/L。研究结果表明,蛋清溶菌酶蛋白来源的ACE抑制肽有望用于高血压的预防与治疗。     

肠道菌群中鼠李糖乳杆菌的菌落免疫印迹计数与分离

本研究通过制备鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,Lr)菌毛蛋白Fim I特异性抗体,建立了Lr菌落免疫印迹计数与分离方法。将重组Fim I蛋白(r Fim I)免疫BALB/c小鼠获得抗血清,用Western和全菌Dot-Blot鉴定抗血清的反应性和特异性,建立基于r Fim I抗血清的菌落免疫印迹方法,并对模拟样品(小鼠肠道菌群+Lr)以及灌胃小鼠粪便中的Lr进行定量分析。结果显示获得的r Fim I抗血清效价为1:51200,该血清和Lr裂解蛋白和菌体均呈强阳性反应,与小鼠肠道菌群没有交叉反应。菌落免疫印迹中r Fim I抗体最佳浓度为1:2000,所有含有Lr样品的菌落转印膜上都能呈现清晰的免疫印迹,测定的阳性菌落数和模拟样品中预设的Lr浓度一致,并能较好的反应灌服Lr的小鼠粪便中Lr的消长趋势。本研究建立的菌落免疫印迹方法为肠道样品中Lr的选择性计数和分离提供了快捷的方法。     

浸麦过程中添加金属离子对麦芽内源抗氧化活力的影响

以大麦为实验材料,通过在浸麦阶段添加不同量(0、20、40、60、80、100mg/kg)金属离子(K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+和Cu2+),测定所制得成品麦芽的相关氧化还原酶(SOD、CAT、POD和PPO)活力、总酚含量、DPPH自由基清除率、还原力和TBARs值,以考察浸麦过程中添加的金属离子对麦芽内源性氧化还原酶与抗氧化活力的影响。结果表明:不同添加量的各金属离子对麦芽氧化还原酶类的影响不尽相同;适宜添加量的上述金属离子均有效增强了麦芽的总酚含量、DPPH自由基清除能力和还原力,降低了麦芽的TBARs值。