大西洋三文鱼和虹鳟鱼双重PCR检测方法的建立及应用

为了实现大西洋三文鱼和虹鳟鱼的物种掺假快速检测,本研究建立了一种基于双重PCR（普通和荧光）的物种鉴定方法。通过序列分析,分别基于线粒体COⅠ和Cyt b基因设计大西洋三文鱼和虹鳟鱼特异性引物,验证引物的特异性并对双重PCR反应体系进行优化,建立大西洋三文鱼和虹鳟鱼的双重PCR快速鉴定方法。利用本研究设计的引物,仅大西洋三文鱼和虹鳟鱼可以分别扩增出108 bp和207 bp的特异性条带,而其他23种非目标物种均未有扩增条带。经验证,在双重PCR反应体系中,大西洋三文鱼和虹鳟鱼引物的最佳添加量分别为0.1和0.4 μmol/L,熔解温度分别约为81.5 ℃和85 ℃。利用该方法从29份市售“三文鱼”样品中检测到6份大西洋三文鱼和3份虹鳟鱼,且与DNA条形码比对结果一致。本研究建立的大西洋三文鱼和虹鳟鱼双重PCR（普通和荧光）鉴定方法具有良好的特异性和适用性,为大西洋三文鱼和虹鳟鱼物种鉴定提供了可靠的技术手段。     

金枪鱼制品中几种DNA提取方法的效果比较

金枪鱼种类繁多,市场上以次充好、以假乱真的现象时有发生。基于DNA的检测技术已经被广泛用于金枪鱼制品品种掺假检测。而DNA提取对DNA检测技术的运用至关重要。本研究以28份深加工金枪鱼产品为样本,采用3种DNA提取方法(SDS法以及2种市售试剂盒)进行DNA提取,并对DNA的质量、得率、PCR扩增及方法的可操作性等方面进行比较研究。结果表明,3种方法均可用于大多数金枪鱼制品的DNA提取。与其它2种市售试剂盒相比,SDS法提取的DNA得率较低,但纯度较好,A_(260)/A_(280)比值为1.89,盐残留少,对实时荧光定量PCR的抑制少,且成本相对价格经济,满足金枪鱼制品掺假检测的需求。     

鱼肉DNA提取方法比较及物种鉴定研究

本研究采用改进煮沸法(BP法)以及传统蛋白酶K法(TP法),从16种鱼肉样品中提取DNA,分析比对两种方法提取DNA的浓度、纯度、以及普通PCR和荧光PCR的效果。同时,运用BP法从70个市售鱼肉产品中提取总DNA,并采用DNA条形码技术进行物种鉴定。结果表明,BP法提取DNA耗时较短,对于大部分鱼肉样品,BP法提取的DNA浓度低于TP法,但两种方法提取的DNAA260/A280无显著差异,均满足普通PCR和荧光PCR扩增要求。另外,BP法提取的DNA可用于市售鱼肉产品DNA条形码鉴定,通过比对发现,81.43%的鱼肉产品可匹配到相似度≥98%的物种,在种水平和属水平的鉴定成功率分别为48.57%和72.86%。BP法在提取DNA过程中可缩短时间,降低提取成本,便于大批量样品的检测。