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研究大肠杆菌表达的重组人角质细胞生长因子-Ⅰ型N端缺失突变体(△N23KGF-Ⅰ)的mPEG-马来酰亚胺(mPEG-maleimide、mPEG-Mal)修饰工艺及修饰位点和初步体外生物活性。首先修饰得到聚乙二醇化的△N23KGF-Ⅰ,然后对△N23KGF-Ⅰ作还原和非还原质量肽图,确定其各肽段,对△N23KGF-Ⅰ-m PEG-Mal-20K做还原质量肽图,确定修饰位点。最后,通过BAF-3细胞对△N23KGF-Ⅰ国际标准品、△N23KGF-Ⅰ、△N23KGF-Ⅰ-m PEG-Mal-20K测活。结果表明,在尿素环境下,mPEG-MAl被均一修饰在△N23KGF-I的Cys40位。与国际活性标准品相比,△N23KGF-Ⅰ的活性保留了116%,△N23KGF-Ⅰ-m PEG-Mal-20K的活性保留了36%。 相似文献
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<正>宜兴天山水泥有限责任公司5 000t/d生产线采用双系列五级预热器,2012年11月3~9日,C5B共发生4次堵塞,其中最严重是11月3日发生的堵塞,导致停窑50.6h,构成重大工艺责任事故。本文对这几起预热器堵塞事故作一分析。1第一起预热器堵塞事故1.1事故经过11月3日3:33篦冷机发生故障,窑止料保温,处理好后于7:03投料,投料后发现入窑斜槽堵塞,再次止料处理。8:20高温风机开始拉风,C5B锥部负压显示 相似文献
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为研究门冬胰岛素制备工艺,参照毕赤酵母偏好密码子,设计合成N-端连接引导肽EEAEAEAEPK,以KEWK作为短C肽,A、B链结构完整的门冬胰岛素c DNA序列。利用Xho I-Not I酶切位点将其插入表达质粒p PICZαA,采用电转移方法将重组质粒转入毕赤酵母x-33,筛选高拷贝重组子作为工程菌株进行高密度发酵,表达量可达到0.57 g/L。发酵液经金属螯合层析和SP阳离子层析纯化后鉴定正确。建立CPB/Trypsin双酶切工艺,对不同温度及p H条件下产生的酶切产物进行分析,初步建立了酶切最佳p H值和温度条件。酶切产物经纯化后制得纯度为91.7%的门冬胰岛素,副产物为B链30位缺失的门冬胰岛素。该设计方法为含短C肽EWK门冬胰岛素制备中选用Lys-c酶切成本过高的问题提供了备选解决方案。 相似文献
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研究了大肠杆菌表达的重组Ⅰ型人角质细胞生长因子缺失突变体(△23KGF-Ⅰ)二硫键的配对形式及生物活性。结果表明,重组大肠杆菌可溶性表达的△23KGF-Ⅰ中Cys40,Cys102和Cys106三个游离半胱氨酸间无二硫键形成,经铜离子处理形成Cys102-Cys106配对的二硫键,且经体内外活性研究,发现含二硫键配对的△23KGF-Ⅰ比不含二硫键形式的活性分别高40%和70%左右。 相似文献
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观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含二硫键)进行体内抗纤维化活性的比较,并研究其对人肝星状细胞系的抑制作用。结果表明,与模型组相比,KGF-1突变体的各项指标均优于模型组,并且△23Ser102 KGF-1可明显抑制人肝星状细胞系的生长,可见KGF-1突变体不含二硫键组对大鼠试验性肝损伤有明显保护作用。此外实验还证明二硫键的有无会直接影响蛋白质的生物活性。 相似文献
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