表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶的重组腺病毒的构建及其免疫原性

目的构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的重组腺病毒,并检测其免疫原性。方法从质粒pMD19T-simple-NA中扩增NA基因,克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中,经同源重组获得重组腺病毒质粒,转染Ad-293细胞,包装出重组腺病毒Ad-NA,RT-PCR和免疫荧光法检测NA基因在Vero细胞中的转录和表达。CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒,免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗NA抗体滴度。结果重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定表明带有目的基因的穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中;NA基因在Vero细胞中成功转录和表达;重组腺病毒可刺激小鼠产生抗NA抗体,初免后4周,抗体水平达最高,为1∶100 000。结论成功构建了表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白的重组腺病毒,其可刺激小鼠产生有效的免疫应答,为甲型H1N1流感病毒基因工程疫苗的研发奠定了基础。     

人睫状神经营养因子基因克隆、表达、纯化及其生物活性

［摘 要］目的 克隆人睫状神经营养因子（hCNTF）基因，在大肠杆菌宿主系统中高效表达并纯化，获得具有生物活性的hCNTF蛋白。方法 以人染色体DNA为模板，经PCR扩增到编码CNTF成熟蛋白的cDNA序列，并克隆进原核表达载体 pBV220，在大肠杆菌 BL21（Gold）中进行表达，产物经 CM-Sepharose FF柱纯化后，以体外培养的鸡胚背根神经节（DRG）测定生物活性。结果 重组表达质粒pBV22Z- CNTF在大肠杆菌BL21（Gold）中获得了非融合的稳定、高效表达，目的蛋白占细胞总蛋白的45％左右，以可溶性和包涵体两种形式存在，表达上清及包涵体复性后经CM柱一步纯化纯度达90％以上；表达的重组hCNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长。结论 基因工程rhCNTF的获得为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定基础。     

表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白受体结合域和N蛋白的重组腺病毒的构建及鉴定

目的 构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)Delta突变株S蛋白受体结合域（receptor binding domain,RBD）和N蛋白的重组腺病毒,并进行鉴定。方法 将SARSCoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上,构建重组质粒pcDNA3.0BA-RBD-N,PCR扩增RBD-CMVN片段,连接至穿梭载体pShuttle-CMV上,将穿梭质粒pShuttle-RBD-N与pAdeasy-1进行同源重组,获得重组质粒pAdeasy-1-RBD-N,转染HEK293细胞进行重组腺病毒Ad-RBD-N包装,RT-PCR法检测重组腺病毒中RBD和N基因在HEK293细胞中的转录,Western blot和免疫荧光法检测重组腺病毒中RBD和N蛋白的表达。将Ad-RBD-N通过肌肉注射免疫12只雌性BALB/c小鼠,免疫剂量为5×109copies/只,免疫后14 d经尾静脉采血,ELISA法检测血清抗体效价。结果 重组腺病毒RBD和N基因能在H...     

大坝建基面直剪试验及其影响因素讨论

该文简述了获取大坝建基面抗剪强度参数的重要手段的原位直剪试验,结合工程示例来说明如何确定抗剪强度参数.讨论了原位直剪试验的主要影响因素,以便在以后试验实践中加以注意,在运用原位直剪试验的方法来确定大坝建基面抗剪强度参数方面具有参考意义.     

基于加速度信号的悬置螺栓疲劳寿命研究

零件在实验工况下所受应力数据对预测其疲劳寿命至关重要。针对发动机悬置螺栓等无法通过应变片传感器直接得到载荷数据的部位,提出一种基于加速度信号的悬置螺栓疲劳寿命估计方法。通过宏观断口及力学模型分析,明确了在不同工况下造成悬置螺栓疲劳失效的主要矢量载荷与加速度载荷的转换关系。结合悬置螺栓S-N曲线,计算出不同工况下由加速度引起的弯矩和拉压波动载荷的时间历程,并进行了发动机悬置螺栓的疲劳损伤计算,从而形成了一种复杂载荷下的发动机悬置螺栓疲劳寿命分析方法。最后基于悬置螺栓在两种道路的应力载荷谱所分别对应的疲劳寿命,建立起了针对悬置螺栓的道路间的当量关系。     

先进控制技术在常减压蒸馏装置的开发应用

介绍了先进控制技术在锦西石化北蒸馏装置上的应用情况,设计开发的基本思路、主要研究内容及关键技术情况。通过对RMPCT特点和功能的介绍、加热炉支路参数平衡控制及动态机理模型的建立过程的阐述,揭示了先进控制技术在常减压装置应用过程中的实用性和先进性。通过实施后的效果对比可知,RMPCT技术在常减压装置自控上有着常规PID控制不可比拟的优越性。     

碳酸氢铵水溶液酸碱性的探讨

一、引言我们知道,碳酸氢铵(即碳铵)是二元弱酸和一元弱碱生成的酸式盐,是我国农村目前使用量最大的一种化肥。如果对其酸碱性认识不足,不顾土壤的酸碱度及农作物对不同pH值的要求,一概直接施用碳铵,则往往起到事倍功半,甚至适得其反的不良后果。为了正确使用碳铵,使其充分发挥肥效,应对其水溶液的酸碱性有个正确的认识,因此需要进行探讨。由于碳铵是多元弱酸和一元弱碱生成的酸     

重组Neurturin对大鼠面神经损伤模型中面神经元的保护作用

目的　建立大鼠面神经损伤实验动物模型 ,观察重组Neurturin对面神经元的营养与保护作用。方法　以切断面神经总干的方法 ,造成大鼠两侧面神经损伤模型 ,在右侧面神经损伤处给予重组Neurturin ,左侧作为对照侧 ,给予PBS ,分别于手术后 7、14、2 8和 4 2d ,取脑组织行双侧面神经核切片 ,甲苯胺兰染色 ,观察面神经元形态 ,分别计数两侧面神经元数量。结果　给予重组Neurturin的一侧大鼠面神经核大部分细胞仍保持正常形态 ,对照侧面神经核神经细胞多呈空泡样变性、坏死 ,部分正常形态已消失 ;手术后 7及 14d ,给药一侧存活的神经元数量明显比对照侧多 ,2 8和 4 2d差异无显著意义。结论　重组Neurturin对损伤的大鼠面神经核神经元细胞具有营养和保护作用。