PP/EVA复合发泡材料的制备与性能研究

以高熔体强度聚丙烯（PP）和乙烯-醋酸乙烯共聚物（EVA）为主要原料,通过化学?模压发泡法制备聚丙烯/乙烯-醋酸乙烯酯（PP/EVA）发泡复合材料并采用差示扫描量热仪（DSC）、扫描电子显微镜（SEM）、旋转流变仪等设备对复合材料测试分析,研究了不同含量EVA对PP发泡性能及力学性能的影响。结果表明,EVA的加入对PP的结晶度影响不大;当EVA添加量为5 %时,复合发泡材料的弯曲强度明显提高,从10.8 MPa提高到了15.5 MPa,但对拉伸强度影响不大;同时,复合材料泡孔孔径从68.36 μm减小到33.58 μm,孔径分布更均匀;在EVA添加量为5 %时,泡孔平均直径达到最小值,泡孔密度达到最大值,泡孔孔径分布最集中。     

HIV-1 Gag蛋白酵母工程菌表达条件的优化

<正>为了探索构建的表达HIV－1核心蛋白Gag酵母工程菌GS115/pPCGAG的最佳表达条件，我们将该酵母工程菌分别在不同条件下进行诱导表达，通过ELJSA检测培养上清中目的蛋白的表达量来分析最佳表达条件，并分析了浓缩上清时最适硫酸铵饱和度。     

检测绵羊衣原体流产菌株血清抗体的间接ELISA建立和评价

本文建立了用于检测鹦鹉热衣原体流产菌株的间接ＥＬＩＳＡ方法。所使用的抗原是衣原体原体相继用Ｎ－甲基甘氨酸、ｎ－辛基－β－Ｄ－吡喃型葡萄糖处理后溶解于Ｎ－甲基甘氨酸和二硫苏糖醇中。用过碘酸钠处理包被抗原的反应板，可以增加对流产菌株抗体的特异性。用实验感染的绵羊血清和非感染的对照组绵羊血清来进行本试验的评价。监测了这些绵羊的产羔表现和ＭＩＦ法。与间接微量免疫荧光试验（ＭＩＦ）同用，间接ＥＬＩＳＡ对２５份取之无典型胎盘病变的母羊血清中检出２０份为阳性。ＥＬＩＳＡ和ＭＩＦ法联合使用对来自有感染史的６个羊群的血清和４个已知非感染羊群的血清能作出准确的鉴别     

HIV-1核心蛋白Gag与IL-6共表达重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性研究

分别将IL-6和HIV-1gag基因插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTAL串联启动子和复合启动子(ATI-P7．5)下游，构建了重组鸡痘病毒表达质粒pUTA-GAG-IL6。经同源重组和Western blot检测，获得重组鸡痘病毒，并将该重组病毒免疫BALB／c小鼠，检测免疫小鼠血清抗体水平和特异性CTL杀伤活性。结果获得的重组鸡痘病毒可同时表达HIV-1核心蛋白和IL-6，并在感染细胞内形成病毒样粒子。重组病毒具有良好的免疫原性，可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。     

共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游,构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1,与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞,经RT-PCR、IFA及Western blotting检测,成功获得能正确表达目的蛋白的重组鸡痘病毒株vU-TAL3CP1。并与FMDV重组核酸疫苗免疫小鼠实验表明,各实验免疫组均能诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫反应,其中以重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫效果好于其它实验各组。     

抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达

人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120,经条件优化,pBV—120和pBV—SL120分别在E．coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达,表达量分别占菌体总蛋白的27．673％和32．519％。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。     

HIV-2型gp105、gag核酸疫苗构建与免疫学研究

目的 构建含 HIV－2 gp 105和 gag基因的核酸疫苗，并评价其免疫效果。方法 将 HIV－2 gp 105型和gag 基因克隆到核酸疫苗载体 pcDNA3．l（＋）中，构建重组核酸疫苗质粒。通过间接免疫荧光试验在细胞水平上检测gp105和ggg基因的表达产物。重组核酸疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4+、CD8+淋巴细胞亚类数，用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体。结果 构建了3种重组核酸疫苗质粒pcgag、pcgp105和pcgag-gp105-gp105，转染BHK细胞后都能表达外源蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖，并诱导产生抗HIV-2特异性抗体，其中pcgag-gp105的免疫效果较pcgag和pcgp105显著。结论 构建的重组核酸疫苗质粒均能诱导机体产生免疫反应，含有融合基因的pcgag-gp105免疫效果最显著。     

中国株HIV-1融合基因gag-gp120在大肠杆菌中的表达

<正>艾滋病是目前人类最难控制、耗资最大的一类病毒性疾病,引起艾滋病的主要病原为HIV-1。GaP蛋白是HIV-1的主要结构蛋白之一,它在病毒的复制、成熟、感染和形态维持等方面均起着重要的作用,并能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。由于它在不同毒株间相对保守,因此,其诱导的抗体水平在临床上成为HIV感染的主要检测指标。Gp120蛋白是由HIV-1Env蛋白经剪切而形成的,在gp120上的C2区及其羧基末端等都与中和抗体的产生有关,因此,它已作为首选的HIV-1亚单位疫苗和重要的诊断试剂。在大肠杆菌中表达外源基因具有操作简便,成本低廉等优点。尽管有些表达的产物不能被忠实地翻译后加工,但可作为检测和诊断方面的研究。     

应用毕赤酵母表达中国株HIV-1核心蛋白Gag

目的 构建含HIV-1Gag全长基因的重组酵母表达质粒pPICGAG，并在毕赤酵母中进行表达。方法用Not I和XhoI将含HIV－1 Gag全长基因的质粒pKSGAG双酶切后，克隆到酵母表达载体pPIC9中，构建了重组表达质粒 pPICGAG。pPICGAG用 SacI线性化后，电转化毕赤酵母 GS115，PCR鉴定阳性酵母转化子，并分别将PCR阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果 酵母转化子的整合率为72．7％。SDS-PAGE结果显示表达蛋白的相对分子质量为55000左右，与预计计算的值相同。Western blot结果显示表达蛋白能与单克隆抗体发生特异性反应。结论 在毕赤酵母中成功地表达了HIV-1核心蛋白Gag，且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。     

抗HIV-1gp120单链抗体的原核表达与初步纯化

目的 在原核细胞表达抗HIV-1gp120单链抗体基因,纯化后检测其活性。方法 将单链抗体基因插入pET28原核表达载体进行诱导表达,对包涵体进行变性复性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达的蛋白进行初步纯化,纯化后的单链抗体与gp120标准抗原膜条反应。结果 表达产物主要以包涵体形式存在,最高表达量占菌体总蛋白量的51％,金属螯合层析一步纯化后纯度超过85％。纯化后的单链抗体可以特异地识别gp120标准抗原。结论 在原核细胞表达的单链抗体,复性纯化后具有生物学活性。