蚕蛹蛋白酶解产物体外抗氧化和降血压活性筛选及响应面工艺优化

以蚕蛹蛋白为原料,使用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶对其进行酶解,采用1,1-一苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH自由基)法、超氧阴离子自由基(O2－ ·)法、羟自由基( ·OH)法和血压紧张素转化酶(ACE)法对酶解产物进行抗氧化和降血压活性分析,筛选同时具有较强抗氧化和降血压活性的酶解产物,并确定获得较强活性时的水解度,再通过响应面对该水解度下酶解工艺条件进行优化。结果表明：碱性蛋白酶在水解度为20%左右时获得的水解产物抗氧化和降血压效果较好,并由响应面分析结果表明酶解温度和加酶量之间存在显著的交互作用,同时得到最佳酶解工艺条件为：酶解温度51℃,pH值为9.05,加酶量为0.38%,酶解时间3h,在此条件下,水解度为20.53%,再通过实验验证其误差值小于5%,说明采用响应面试验设计方法对蚕蛹蛋白酶解体系进行优化具有较好的可靠性。此时酶解产物的DPPH自由基抑制率为51.2%,ACE抑制活性为50.3%。     

驼乳与牛乳乳清蛋白酶解工艺优化及其产物抗氧化能力分析

为了研究不同蛋白水解酶对驼乳和牛乳抗氧化能力的影响,向驼乳和牛乳乳清蛋白中添加不同蛋白水解酶,探究乳清蛋白抗氧化活性肽的最佳制备条件,并对其抗氧化能力进行比较分析。首先从3种蛋白酶中筛选出最佳用酶,在此基础上以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-Trinitrophenylhydrazine,DPPH)自由基的清除率为响应值,进行单因素和响应面试验,同时研究了驼乳和牛乳乳清蛋白抗氧化肽对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的清除效果。结果表明,木瓜蛋白酶水解物的能力最强,水解度可达15%。驼乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6.4,酶解温度55 ℃,底物浓度2.73%,DPPH自由基清除率可达71.9%。牛乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6,酶解温度54 ℃,底物浓度4%,DPPH自由基清除率达69.9%。在最佳酶解条件下,驼乳乳清蛋白酶解液的·OH清除率为58.2%,O₂-·清除率为67.2%;牛乳乳清蛋白酶解液·OH清除率为52.2%,·O₂-清除率为60.7%。驼乳乳清蛋白酶解液的抗氧化性在不同程度上均高于牛乳乳清蛋白酶解液,驼乳和牛乳乳清酶解液的DPPH自由基清除能力较强,其次是O₂-·清除能力,·OH清除能力最弱。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

酶解青蛤边下脚料制备抗氧化肽的研究

为了充分利用青蛤(Cyclina sineusis Gmelin)加工过程中产生的边下脚料制备抗氧化肽,对青蛤边下脚料进行了匀浆预处理。以酶解产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶6种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为最佳酶解用酶,通过单因素试验和正交试验确定木瓜蛋白酶酶解青蛤边下脚料制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量2 500 U/g、底物浓度7%、反应pH 7.0、反应温度50℃、反应时间3 h。在该条件下对青蛤边下脚料的水解率为31.56%,酶解产物的DPPH自由基清除率为74.62%,羟自由基清除率为59.29%,超氧阴离子自由基清除率为27.84%。     

不同蛋白酶和水解条件对酪蛋白酶解产物性质的影响

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰蛋白酶分别对酪蛋白进行酶解,发现碱性蛋白酶水解酪蛋白的水解程度最大。当酪蛋白经不同的酶水解至相同水解度(DH)时,酶解物的分子量分布存在显著差异。随后选定碱性蛋白酶以考察水解条件对酪蛋白酶解产物性质的影响,采用p H-stat法控制水解过程p H恒定(8.5±0.02),制备DH8%和12%的酶解产物,分别测定其DPPH自由基清除率,TCA可溶性氮含量,采用SE-HPLC测定分子量分布。结果表明,不同酶解条件下,DH 8%和DH 12%水解产物的DPPH自由基清除率分别为32.76%~34.02%和39.87%~41.02,DH 8%和DH 12%水解产物的TCA可溶性氮含量值分别为58.98%~60.43%和69.69%~70.34%。方差分析显示水解度相同,不同产物的DPPH自由基清除率无显著性差异,TCA可溶性氮含量的结果亦如此(p0.05)。HPLC的结果进一步证明尽管水解条件不同,水解至相同DH时,水解产物的分子量分布一致。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

复合酶解牦牛乳酪蛋白工艺优化及抗氧化性的研究

为了优化牦牛乳酪蛋白酶解工艺,研究其产物抗氧化活性,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,在其最适条件下酶解牦牛乳酪蛋白,以水解度(DH)、DPPH·自由基清除率和超氧阴离子清除率为评价指标,筛选出2种效果最优的单酶进行复配,采用单因素试验及L9(34)正交试验确定最优酶解工艺。结果表明:中性蛋白酶和胰蛋白酶比例为1:2效果最佳,最佳酶解工艺条件为底物浓度5%(w/v),温度42.5℃,p H值7.5,复合酶添加量3%,作用时间150 min,酶解产物抗氧化活性最高,DPPH·自由基清除率达到了64.26%±0.18%,超氧阴离子清除率达到40.34%±0.92%。     

梅鱼抗氧化肽制备条件的响应面优化

优化胰蛋白酶和中性蛋白酶酶解梅鱼制备抗氧化肽的条件。以酶解产物对1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的清除率为指标,通过响应面优化酶解条件。结果,酶解条件在p H 6.2、温度44℃、时间4 h、胰蛋白酶与中性蛋白酶的比例为5∶2,产物对DPPH自由基的清除率达到最大值81.11%。响应面分析表明,酶解温度对产物的抗氧化活性有显著影响,酶解时间与胰蛋白酶和中性蛋白酶的比例,酶解温度与p H,p H与胰蛋白酶和中性蛋白酶的比例在酶解工艺中存在复杂的交互作用。     

超声波辅助酶解制备猪血源抗氧化肽

超声波处理可以提高胰蛋白酶溶液的酶活力和溶解度。实验利用超声波处理胰蛋白酶溶液,其酶活力和蛋白酶溶解度分别提高104.9%和2.4%。针对胰蛋白酶水解猪血血红蛋白酶解液,通过单因素试验和正交试验优化,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl?radical,DPPH)自由基清除率和胰蛋白酶水解度为指标,得到最佳抗氧化肽工艺优化条件为:超声频率20?k Hz、超声时间8?min、超声功率540 W、胰蛋白酶添加量0.8%、反应体系p H 8.0,酶解2 h即可达到常规酶解6 h的酶解度,此时DPPH自由基清除率为75.78%。应用超声波辅助处理可以提高酶解效率,缩短工作时间。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

鸽肉酶解液水解工艺优化及其体外抗氧化性研究

以乳鸽胸脯肉为原料,利用风味蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,以水解度为指标,利用单因素实验和正交实验对酶解工艺进行了优化,并以抗坏血酸为对照,以还原能力、DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、羟自由基清除能力为指标分析了酶解液的体外抗氧化能力。结果表明,最佳水解工艺为:风味蛋白酶600 U/g(原料),水解温度55 ℃,pH7. 0,在此条件下水解2.5 h,水解度达到28.69%±0.29%;水解得到的鸽肉酶解液具有一定的还原能力,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基均具有很好的清除作用。     

奇亚籽蛋白酶解制备抗氧化肽的工艺优化

以奇亚籽粗蛋白为原料,酶解法制备抗氧化肽并通过响应面法优化工艺。同时以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基清除率为指标,通过单因素试验,筛选最佳酶并考察加酶量、pH值、时间、温度等对产物抗氧化能力的影响。在单因素试验基础上,通过响应面分析法对酶解工艺进一步优化,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。结果表明:中性蛋白酶为最适酶,酶解最佳工艺为:加酶量3170 U/g,pH 6.9,酶解时间4.9 h,酶解温度50℃,此时DPPH自由基和羟基自由基清除率分别为54.90%、41.03%,与理论值无显著差异,回归模型较可靠,抗氧化能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)值为(0.53±0.03)μmol TE/mg,表明奇亚籽抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。     

大鲵肽酱香酒酶解工艺优化及抗氧化活性研究

为研发一种具有抗氧化活性的大鲵肽酱香酒,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率为主要指标,多肽含量为辅助指标,比较酸水解、酶水解和直接浸泡等不同预处理方式对大鲵肽酱香酒抗氧化活性的影响,并在单因素试验基础上采用响应面法对大鲵肽酱香酒酶解条件优化。结果表明,酶水解法优于酸水解法和直接泡制,其最佳酶解工艺为木瓜蛋白酶添加量6 126 U/g、酶解时间4 h、酶解温度55 ℃、酶解pH 4.5。在此优化条件下,大鲵肽酱香酒多肽含量为（14.20±0.11） mg/mL,对DPPH自由基的清除率为（77.98±0.99）%,羟自由基清除率为（70.66±0.70）%,还原能力（吸光度值A700 nm）为0.651,表明大鲵肽酱香酒具有一定抗氧化性。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

响应面优化冰岛刺参内脏团抗氧化肽制备工艺及其组成分析

以冰岛刺参内脏团蛋白为原料,利用复合蛋白酶酶解制备抗氧化肽。在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺条件,并分析其抗氧化活性、分子量分布和氨基酸组成。结果表明,最佳工艺条件为底物质量分数4.4%,加酶量4887 U/g,pH7.0,酶解温度56 ℃,酶解时间4.2 h,在该条件下,2 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率可达89.18%±0.11%,0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由基清除率和Fe2+螯合率分别为68.11%±0.12%、72.59%±0.08%,1.5 mg/mL酶解产物的羟基自由基清除率和还原力分别为71.86%±0.09%、0.7473±0.0105;分子量分布和氨基酸分析表明,冰岛刺参内脏团抗氧化肽中分子量低于1000 Da的肽占94.26%,富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸,具有较高的抗氧化活性和营养价值。该研究为冰岛刺参深加工产业的发展提供了技术参考。     

苜蓿多肽制备工艺优化及其抗氧化活性

以苜蓿(Medicago sativa)为原料,对碱性蛋白酶添加量、酶解时间、酶解温度、酶解pH四个因素进行单因素实验,通过响应面法对苜蓿多肽的酶解工艺进行优化。结果表明,最佳酶解工艺条件为:加酶量3000 U/g,酶解pH8.79,酶解温度49.9 ℃,酶解时间4.9 h,得到多肽含量为4.94 mg·mL-1。在该条件下,1 mg·mL-1样品对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力较强,分别为74.61%和72.14%,对DPPH自由基清除能力较弱,为61.53%,说明苜蓿多肽具有良好的抗氧化活性,为苜蓿进一步开发利用提供理论依据。     

棘胸蛙肌肉水解物的制备及抗氧化活性评价

以棘胸蛙腿部肌肉为研究材料,利用木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶两种酶,以成品率和水解度为指标,通过单因素结合响应面分析的方法优化棘胸蛙水解物的酶解工艺,同时对棘胸蛙水解物抗氧化能力进行研究。结果表明,棘胸蛙水解物经木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶的最佳酶解条件为：在各酶最适pH和温度的条件下,料液比为1:15（g/mL）、酶解时间4 h、加酶量为2%（m/m）;该工艺条件下,棘胸蛙水解物的水解度分别为19.23%、23.51%,成品率分别为22.66%、15.32%,清除DPPH自由基的IC50值分别为2.61、2.95 mg/mL,清除ABTS+自由基的IC50值分别为3.46、3.20 mg/mL,清除羟基自由基的IC50值分别为8.20、9.23 mg/mL。综上,通过响应面法优化的棘胸蛙水解物酶解工艺方便可行,制备得到的水解物具有较强抗氧化活性,为棘胸蛙资源的开发提供了理论基础。     

百香果皮总黄酮的复合酶辅助超声波提取工艺优化及其抗氧化活性分析

采用复合酶辅助超声波法对百香果皮总黄酮进行提取,以黄酮得率为指标,单因素实验分析复合酶的用量、酶解时间、液料比、超声时间对百香果皮总黄酮提取的影响,响应面试验（Box-Behnken）进一步分析黄酮提取的主要影响因素和最优组合,并通过体外检测对DPPH自由基和羟自由基的清除率及还原力。结果表明:复合酶辅助超声波提取百香果皮总黄酮的最佳工艺条件为纤维素酶与果胶酶复配比例2:1、复合酶的用量4.8%、酶解时间为1 h、乙醇体积分数60%、液料比30:1 mL/g、超声时间41 min,在该条件下,百香果皮的黄酮得率为（2.20%±0.05%）,回归模型的实测值与预测值2.24%（<1%）接近,模型可靠,抗氧化活性结果表明,当提取液浓度在0.44 mg/L时,DPPH自由基的清除率为90.8%;当提取液的浓度为44 μg/mL时,羟基自由基的清除率最大,此时清除率为84.1%。通过复合酶辅助超声波提取百香果皮中总黄酮可为百香果皮的资源化利用提供途径。综上所述证明百香果皮总黄酮具有较好的抗氧化性,是一种理想的天然抗氧化剂。