南美白对虾酚氧化酶的提取及生化特性

以南美白对虾为研究对象,分析以Tris-HCl为提取缓冲液,研究提取液浓度、提取液pH值、浸提时间对酚氧化酶活力的影响,以L9（33）正交试验方法优化酚氧化酶提取条件,然后对南美白对虾酚氧化酶生化特性进行研究。结果表明：提取液浓度为0.2 mol/L、提取液pH值为8.0、浸提时间为20 min条件下提取的酶具有最大的活力;以邻苯二酚为底物时,酚氧化酶最适pH值为8、最适温度为40℃,在该条件下酶促反应动力学符合米氏方程,米氏常数Km为0.717 mol/L,Vmax为0.130 A/min。     

金帅苹果多酚氧化酶提取及部分酶学特性研究

实验确定了从金帅苹果中提取多酚氧化酶(PPO)的最佳条件,研究了该酶的某些特性。确定pH7.4磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(含2%的PVPP和0.25%TritonX100)、料液比1.6mL/g为最优提取参数。金帅苹果PPO酶促反应产物在412nm下有最大吸收峰;以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数为Km=2.6667×10-2mol/L,PPO动力学方程为:V=3333.33犤S犦0.027 犤S犦;该PPO的最适pH为5.0,在pH5.0～6.8范围内有较高的稳定性;最适温度为40℃。     

白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶提取条件优化及酶学性质研究

本文以白鲢鱼肌肉为原料,通过单因素实验对白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶(LOX)提取条件进行优化;用圆二色谱法和荧光光谱法对其贮藏稳定性、热稳定性、最适p H进行研究;探讨磷酸盐缓冲液p H、离子强度、二硫苏糖醇(DTT)和乙二胺四乙酸(EDTA)添加量对白鲢鱼肌肉LOX提取工艺的影响。结果表明,白鲢鱼肌肉LOX适宜提取条件为磷酸盐缓冲液p H7.8、离子强度50 mmol/L、EDTA和DTT添加量均为2 mmol/L,在此条件下提取白鲢鱼肌肉LOX的酶液浓度为(1.98±0.037)mg/m L,活力为(244.44±5.93)U。通过对LOX酶学性质研究可知,白鲢鱼肌肉LOX在常温条件下0~2 d内酶活性较为稳定,最适作用温度为40℃,最适p H为7.8。     

响应面法优化无花果中蛋白的提取条件

采用单因素试验方法,研究磷酸盐缓冲液浓度、料液pH、固液比对无花果中蛋白提取量的影响,并利用Design-Expert软件响应面分析法构造模型,确定无花果中蛋白的最优提取条件为:磷酸盐缓冲液浓度0.08 mol/L,pH 7,固液比1∶50,无花果蛋白提取量的最优预测值为9.633 27 mg/g,试验验证,所得蛋白提取量的实际值为9.475 0 mg/g。     

转氨酶的固定化及酶学性质研究

利用环氧树脂载体进行固定化转氨酶的研究,通过单因素优化确定了较优的酶固定化条件:ES-103b树脂载体、转氨酶和辅酶磷酸吡哆醛最佳质量比为50:6:5,在pH为7.0的1mol/L磷酸钾缓冲液介质中吸附25 h.将得到的固定化颗粒重新置于pH为9.0的100 mmol/L磷酸钾缓冲液中,30℃保温30 h.取出后置于pH为8.5的3 mol/L甘氨酸-NaOH缓冲液中,25 ℃保温12h,制得固定化转氨酶,其比活力为52.7 U/g(湿载体),酶活回收率达到49.3％.酶学性质研究表明:固定化转氨酶催化反应最适pH、温度分别为7.0、50℃;固定化酶热稳定性及pH稳定性明显提高,50℃条件下的半衰期为20.2 d;在pH 8.0的三乙醇胺缓冲液中(4℃),10 d后酶活仍保持初始酶活的82.3％.     

乙醇提取海南番木瓜中木瓜蛋白酶的工艺研究

主要是采用乙醇作为提取剂对番木瓜中木瓜蛋白酶进行提取,并通过紫外法测定其酶的活性。实验中,我们对各种影响因素进行了研究分析。并确定出几组最佳工艺参数,结果表明:在提取工艺中,L-cys和EDTA添加量分别为0.04mol/L和0.004mol/L时对木瓜蛋白酶活性起到最佳保护作用,乙醇添加量为45%,pH为7.0时能获得最佳提取效果。在测定工艺中,最适酶反应时间为10min,最适酶反应温度为80℃,同时,在实验中我们也考察了金属离子对酶活性的影响,实验结果得,Cu2+、K+对木瓜蛋白酶活性有一定的抑制作,而Ca2+离子则对其活性有一定的激活作用,且在浓度为0.05mol/L时效果最为明显。     

荔枝果肉过氧化物酶提取与初步纯化

酶促褐变是影响荔枝果肉加工和贮藏的重要问题,过氧化物酶(POD)被认为是参与酶促褐变的重要酶类.用丙酮粉磷酸缓冲液提取荔枝果肉中的过氧化物酶,提取液最佳离子浓度为0.3mol/L、最适pH为7、最佳提取时间为30min,最适料液比为1:15(g:mL).通过丙酮粉缓冲液提取,硫酸铵沉淀和DEAE-Sepharose F F层析进行初步纯化.该酶被纯化了7.3倍,得率为6.4%.     

黑曲霉H1-9b 葡萄糖氧化酶的分离纯化及部分性质研究

采用研磨法破碎黑曲霉H1-9b 菌丝体,经pH5.7 磷酸缓冲液抽提获得粗酶液,粗酶液经DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200 凝胶过滤层析,得到葡萄糖氧化酶纯品。该酶的比活力为30569.7U/mg,回收率为30.2%,提纯倍数为41.4 倍,分子质量为94.1kD,为单亚基酶。该酶最适温度为37℃,最适pH 值为5.7,在30～40℃温度范围内稳定性较好,在pH4.0～8.0 范围内活性稳定。以不同浓度葡萄糖为底物在最适条件下测得该酶K_m 值为30.69mmol/L,V_max 为21.88μmol/L。Ag^+、Cu²⁺、Zn²⁺ 对该酶活性有较大抑制作用。结果表明,该酶稳定性较好,有一定的应用价值。     

马氏珍珠贝肉糖蛋白的提取工艺优化及其抗氧化活性的研究

以马氏珍珠贝为原料,研究了提取缓冲液pH、盐浓度、料液比对贝肉糖蛋白提取率及抗氧化活性的影响。在单因素实验分析基础上,进行了三因素三水平正交实验,最终确定珍珠贝肉糖蛋白提取的最佳工艺条件为:提取缓冲液pH为7.2,NaCl浓度0.10mol/L,料液比为1:2,在此条件下,蛋白质回收率可达25.67%,总糖回收率57.60%,DPPH·清除率68.92%,超氧阴离子自由基清除率44.61%。     

大菱鲆鱼皮透明质酸酶的提取及酶学特性研究

以大菱鲆鱼皮为原料,经pH 4.7乙酸-乙酸钠缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、透析后获得鱼皮透明质酸粗酶液,并对其酶学性质进行研究。结果表明,鱼皮透明质酸粗酶的最适pH为6.6,最适反应温度为20℃,在-3℃～45℃具有较高稳定性,浓度为0.15 mol/L的NaCl可使鱼皮透明质酸酶保持较高活性。50 mmol/L的金属离子Ca~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+),50 mmol/L的EDTA、L-半胱氨酸和抗坏血酸对鱼皮透明质酸酶均具有抑制作用。双倒数法绘制米氏动力学曲线确定米氏常数K_m为0.094 mg/mL,鱼皮透明质酸酶对不同底物的水解能力依次为:肝素钠透明质酸硫酸软骨素C硫酸软骨素A。在4℃和-18℃条件下贮藏32 d,鱼皮透明质酸酶活性损失分别为79.21%和56.78%。     

缬氨酸转氨酶拆分DL-缬氨酸的催化条件

利用具有缬氨酸转氨酶活性的工程菌对DL-缬氨酸进行拆分,考察了反应温度、pH值、底物摩尔比、底物浓度和金属离子对酶活性和底物转化率的影响。结果显示,该催化反应的最适反应条件为:反应温度是45℃,pH=9,L-缬氨酸与丙酮酸的摩尔比1∶8,DL-缬氨酸初始浓度为0.6 mol/L、丙酮酸初始浓度为2.4 mol/L,0.5 mmol/L的Mg2+和Na+对酶活性有明显的促进作用。     

酶法提取香菇多糖工艺研究

本实验将木瓜蛋白酶和纤维素酶应用于香菇多糖的提取,研究了酶法提取的工艺条件。结果显示,木瓜蛋白酶的最佳酶解条件是:酶浓度0.5%,酶解温度50℃,pH6～7,酶解反应1h;纤维素酶的最佳酶解条件是:酶浓度0.25%,酶解温度40℃,pH4.5～5.0,酶解反应1h。采用酶水解后,香菇多糖的提取率显著提高。     

南瓜谷氨酸脱羧酶酶学特性及γ-氨基丁酸富集条件

对生鲜南瓜(Cucurbita moschata)所含谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)的最适反应温度、最适pH、热稳定性和冷冻稳定性等酶学特性进行研究,并利用其富集γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA),探索了反应时间、南瓜品种、缓冲体系、南瓜及味精添加量、料水比对富集效果的影响。结果表明,南瓜GAD最适反应温度为30~35 ℃,最适pH为5.8。南瓜GAD对热比较敏感,50 ℃保温30 min,酶活力损失20%,70 ℃以上保温30 min可导致酶活力完全丧失。冷冻对GAD影响较小,但长期冷冻仍会导致酶活力损失,冷冻8周酶活力损失36%。GABA最适富集条件为:以pH5.8,0.2 mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液作为反应溶液,南瓜与缓冲液比例为1:3,南瓜添加量25%,味精添加量1.5%,30 ℃反应18 h,反应液中GABA浓度可达7633.2 mg/L,转化率为93.3%,单位质量南瓜GABA富集量为30.5 mg/g,与未富集时相比提高了132倍。     

AOT-异辛烷反胶束萃取技术分离牛初乳IgG的研究

在一个琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠(AOT)-异辛烷反胶束体系中，研究了水相pH值、离子强度和有机相表面活性剂AOT浓度等因素对牛初乳乳清蛋白中IgG分离效果的影响。结果表明，在以下两组优化条件：①pH值为7．668，[Na^ ]浓度为0．270mol／L，[AOT]浓度为0．088mol／L；②pH值为6524，[Na^ ]浓度为0．205mol／L，[AOT]浓度为0．175mol／L，水相IgG的残留率或纯度分别达到最大值，分别为90．23％和98．35％．RID分析表明，反胶束萃取过程对原牛初乳乳清IgG的免疫反应活性基本无影响。     

低聚半乳糖酶法合成条件的研究

研究了低聚半乳糖(galactooligosaccharides,GOS)的酶法合成条件,利用高效液相色谱方法进行检测,以GOS产率为指标,考察了缓冲溶液类型及浓度、起始乳糖浓度、反应温度、加酶量、pH、反应时间等因素对GOS产率的影响。结果表明,酶法合成GOS的最佳条件为:缓冲溶液选取0.1 mol/L、pH 7.0的Na2HPO4/NaH2PO4,起始乳糖浓度为45%(W/V),反应温度为55℃,加酶量为20 U/g乳糖。在此条件下反应12 h,GOS产率可达44.5%。     

Na2S2O3/LiBr/SDS体系溶解废旧羊毛的工艺

采用还原法与金属盐法结合,利用Na2S2O3/LiBr/SDS溶剂体系溶解废旧羊毛提取角蛋白,通过设计正交试验和单因素对比试验,以羊毛溶解率和大分子量角蛋白回收率为考察对象确定最佳工艺条件,结果表明:Na2S2O3浓度1.5 mol/L,LiBr浓度0.2 mol/L,SDS浓度0.03 mol/L,pH值12,反应温度80℃,反应时间3 h,羊毛溶解率达91.8%,角蛋白回收率44%,相比单纯还原C法均有提高。     

冠突散囊菌胞外黑色素碱法提取工艺的研究

以碱性溶液为提取剂,运用单因素试验及响应面法对马铃薯液态培养基培养冠突散囊菌（Eurotium cristatum）所产的胞外黑色素的提取工艺条件进行优化,得到最优提取条件。单因素试验以NaOH溶液浓度、提取温度、色素酸沉pH值和料液比（发酵液∶NaOH溶液）为评价因素,黑色素提取量为响应值,并在此基础上建立4因素3水平响应面试验。结果表明,冠突散囊菌胞外黑色素的最佳提取工艺参数为：NaOH浓度1 mol/L,提取温度74 ℃,色素酸沉pH值2.5,料液比为1∶1.4（V∶V）。在该优化条件下,提取的黑色素含量最高,为3.982 mg/mL。     

蛋壳膜中胶原蛋白的提取分离

以废弃的鸡蛋壳为原料,采用酶法对鸡蛋壳膜中的胶原蛋白进行提取,探讨胶原蛋白提取的最佳条件。结果得出,壳膜的最佳分离条件为0.5 mol/L盐酸,pH7.0,温度30℃,固液体积比1∶10,反应时间1 h;胶原蛋白的最佳提取条件为0.5 mol/L醋酸,胃蛋白酶5%(150 U/g),温度40℃,pH2.5,提取体积1∶10,反应时间24 h。     

基于响应面法优化酿酒黄水酶促酯化条件的研究

优化了酿酒黄水的酶促酯化条件。以乙醇体积分数、pH、红曲酯化酶活力和反应时间为因子,应用响应面法得到了总酯产量达最大时的工艺条件。由多重回归分析和方差分析的结果可知,实验数据与所得二次多项式方程的拟合度较高。由从数学模型得到的3-D响应面图所确定的黄水酶促酯化的最优条件为:乙醇体积分数22.64%,pH2.77,红曲酯化酶活力283.00mg/100mL,反应时间为20d。在(32±0.2)℃条件下,黄水发酵液中的总酯含量由发酵前的(0.82±0.06)g/L提高到(6.90±0.14)g/L。     

响应面法优化酥李果汁的酶法提取工艺

目的:研究酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件,为李深加工利用提供理论参考。方法:以酥李出汁率为指标,在单因素实验基础上采用响应面试验优化,对单一果胶酶、单一纤维素酶、复合酶（果胶酶和纤维素酶）提取酥李果汁的工艺条件分别进行优化。结果:不同加酶方式中对酥李出汁率的影响因素顺序均为酶解温度>加酶量>酶解pH>酶解时间;果胶酶酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件为:加酶量0.45 g/L、酶解温度38 ℃、酶解pH3.8、酶解时间72 min,出汁率提高27.13%;维素酶酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件为:加酶量0.55 g/L、酶解温度41 ℃、酶解pH4.2、酶解时间105 min,出汁率提高20.18%;复合酶酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件为:果胶酶添加量0.45 g/L、纤维素酶添加量0.55 g/L、酶解温度41 ℃、酶解pH4.0、酶解时间87 min,出汁率提高31.79%。三种加酶方式中,回归模型均能较好地反应相应酶制备酥李果浆的出汁率,所得工艺合理可靠。结论:在酶法提取酥李果汁过程中,果胶酶和纤维素酶的不同添加方式均能有效提高酥李出汁率,其中采用复合酶提取酥李果汁效果最佳。本研究成果为贵州李产品开发提供了一定的技术参考。