人血清中A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量ELISA检测方法的建立

目的建立人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖Ig G抗体含量的ELISA定量检测方法,并进行验证。方法筛选适用的酶标板,优化抗原包被浓度,确定ELISA检测过程的关键条件,对建立的ELISA方法的特异性、线性、准确性、精密度、最低检测值和稳定性进行验证,并建立实验室质控血清的质控检测范围。结果酶标板的板内CV为9.8%,板间CV为16.4%,符合检测使用要求。免疫血清经多糖吸收后,群特异性抗体含量与同群多糖吸收剂量呈明显的剂量依赖关系。12份美国CDC质控血清中各群Ig G抗体含量与血清的稀释度呈负相关,相关系数(r)和斜率(slope)均接近-1,线性关系良好;检测结果与CDC公布数据一致性良好,一致性相关系数A、C、W135、Y群分别为0.912 5、0.939 6、0.963 7和0.920 6,准确度较好。实验室内部质控血清Men20中各群Ig G抗体含量试验内和试验间精密度分别小于10%和20%,精密度较好;各血清群别的CV值均30%,稳定性较好;A、C、Y、W135群多糖Ig G抗体含量最低检测值分别为0.092、0.118、0.067和0.035μg/ml,质控血清的检测范围分别为:92.49~36.53、37.29~17.69、66.18~25.54和50.15~23.31μg/ml。结论建立了标准化的检测人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖Ig G抗体含量的定量ELISA方法,并确定了实验室日常用质控血清Men20的质控检测值范围。     

四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMPCRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。     

分光光度法测定W135群脑膜炎奈瑟菌生物量

目的建立快速准确测量W135群脑膜炎奈瑟菌(Neissria meningitidis)生物量的紫外分光光度法。方法取W135群脑膜炎奈瑟菌发酵液进行系列浓度稀释,利用紫外-可见光分光光度法在最适吸收波长处测定各稀释度发酵液的A值,同时测定各浓度下细菌数、菌体干湿重,建立W135群脑膜炎奈瑟菌A值与菌体干湿重、细菌数间的关系曲线,利用所建立的回归方程计算细菌生物量。取4组不同浓度的W135群脑膜炎奈瑟菌培养液,采用建立的方法测量细菌生物量并与实际测量值对比,验证该方法的准确性。结果 W135群脑膜炎奈瑟菌A_(450)值与菌体干湿重、细菌数呈线性关系,R~2分别为0.990、0.980和0.926。利用所建立的回归方程得到的生物量结果与实际测量结果无统计学差异(P0.05)。结论利用所建立的A值与生物量的关系方程可快速简便地检测到W135群脑膜炎奈瑟菌生物量的变化。     

层析法纯化脑膜炎球菌A、C、Y、W135群多糖工艺的建立

目的建立一种新型脑膜炎球菌A、C、Y、W135群多糖层析纯化工艺。方法将A、C、Y、W135群粗糖样品溶解后,用含2%脱氧胆酸钠(SDC)的Tris-HCl缓冲液稀释,用串联的Capto Adhere和Capto DEAE介质,采用流穿模式,经一步层析将多糖与其他杂质分离,再经Sephodex G25脱盐后获得精糖原液,根据《欧洲药典》7.0的方法和标准,对各型样品的各项指标进行检测。结果 4群多糖均可在柱上流穿,多糖可与蛋白及核酸完全分离;纯化多糖样品的各项指标均符合《欧洲药典》标准,各群多糖的回收率均高于55%。结论建立了一种新型脑膜炎球菌A、C、Y、W135群多糖层析纯化工艺,缩短了生产时间,提高了回收率,可替代传统的苯酚抽提工艺,用于脑膜炎球菌A、C、Y、W135群多糖的纯化。     

A、C、W_(135)、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的研制

目的研制A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗,并采用新方法去除细菌内毒素。方法经细菌培养后,分别提取A、C、W135和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖,纯化后,采用超速离心和层析技术相结合去除内毒素,按一定的配比制成四价多糖原液,加入保护剂,制成冻干疫苗,并进行检定。结果所研制的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗各项指标均达到了质控标准,内毒素含量小于10EU/μg,具有良好的安全性及有效性。结论已成功制备了A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗。     

B群流行性脑脊髓膜炎疫苗的研究进展

流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是一种由革兰阴性的奈瑟双球菌导致的呼吸道传染病,以急性脑膜炎和败血症为主要症状。根据脑膜炎奈瑟双球菌荚膜多糖的特征可将其菌株至少分为12个血清群,其中A、B、C、W135、Y血清群是主要的致病菌群,随着A、C、Y、W135血清群菌株多糖疫苗的广泛应用,有效控制了相应血清群脑膜炎的流行,B血清群成为流脑主要的流行菌群之一,因此研制有效的疫苗对于预防流脑流行至关重要。本文对B血清群流脑疫苗研究所用抗原成分的变异程度、作用机制和免疫原性作一综述,同时对两种已批准上市的B血清群流脑疫苗进行比较。     

MenA PS-EA偶联物的制备及其在多糖抗体检测中的应用

目的制备MenA PS-EA偶联物及以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂。方法培养A群脑膜炎奈瑟菌,提取多糖(MenA PS),与卵清蛋白(EA)以还原氨基法偶联,Sepharose CL-4B纯化。制备以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂,考察试剂的精密性和稳定性,并与血清杀菌力试验(SBA)比较。结果纯化的MenA PS-EA经高效液相色谱检测,纯度为81.50%;以MenA PS-EA为包被抗原的ELISA检测试剂精密性和稳定性良好;将该试剂与SBA法比较,其敏感性为96.91%,特异性为90.00%,一致性为95.83%。两种检测方法之间差异无显著意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体ELISA检测试剂可用于检测多糖IgG抗体,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供参考。     

冻干A、C、W_(135)、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的稳定性

目的观察冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存的稳定性。方法将冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗放置在2～8℃条件下30个月,定期取样,观察其物理外观,进行鉴别试验,并测定多糖含量、分子大小、水分含量、异常毒性等质量控制指标,评价疫苗质量的稳定性。结果冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗于2～8℃30个月保存,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准。结论冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存,其质量稳定。     

差异火箭免疫电泳定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖方法的建立及验证

目的建立差异火箭免疫电泳(differential rocket immunoelectrophoresis,DRIEP)定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖的方法,并对该方法进行验证。方法制备非均一性抗体琼脂糖凝胶,建立脑膜炎A群、C群、Y群、W135群游离多糖的DRIEP定量检测法,并对该方法的专属性、分离效果、线性、重复性及稳定性进行验证。分别采用DRIEP法及DOC沉淀化学法对11批各群脑膜炎球菌单价结合物进行检测。结果各群多糖抗原只与其相应特异性抗体发生结合,无交叉反应;各群结合物或混合物中的TT可完全与多糖分离;A群、W135群游离多糖定量对照品在2.5~20μg/ml范围内,C群、Y群游离多糖定量对照品在2~10μg/ml范围内,与沉淀峰高度呈良好线性关系,R2均>0.99;各群单价结合物的9次检测结果的CV值均<15%;多价脑膜炎球菌结合疫苗中各群游离多糖含量均比较接近。DRIEP法检测值较DOC沉淀化学法高约1/2倍,但两种方法检测结果的高低趋势具有相似性。结论DRIEP法可用于四价脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的定量检测,提高了该疫苗的质控水平。     

人血白蛋白琼脂培养基在A、C、Y、W_(135)群脑膜炎球菌培养中的应用

目的比较A、C、Y、W_(135)群脑膜炎球菌冻干菌种在羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中的复苏培养效果,为人血白蛋白琼脂培养基代替羊血琼脂培养基进行复苏培养提供依据。方法将A、C、Y、W_(135)群脑膜炎球菌冻干菌种分别接种至羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中,待长满琼脂培养基后转至相同体积、相同成分的基础培养基中,培养过程中取样测定A600。结果 A、C群脑膜炎球菌在人血白蛋白琼脂培养基中复苏培养效果优于羊血琼脂培养基,而Y、W_(135)群脑膜炎球菌在人血白蛋白琼脂培养基与羊血琼脂培养基复苏培养中效果相当。结论人血白蛋白琼脂培养基能够很好地应用于A、C、Y、W_(135)群脑膜炎球菌的复苏培养。     

水镁石、水菱镁石和斜方云石资源、加工与应用

对水镁石、水菱镁石和斜方云石资源及其加工和应用进行了评述。包括上述资源的发展历史、化学组成和物性参数、资源储量和矿石品位、生产加工以及在不同领域(如镁质阻燃剂、中和剂、重金属离子脱除剂、镁肥、饲料添加剂等)的应用,并对它们的发展前景进行了展望。     

Stable silyl, germyl, and stannyl cations, radicals, and anions: heavy versions of carbocations, carbon radicals, and carbanions

The rapidly growing chemistry of the cations, radicals, and anions based on the group 14 elements heavier than carbon (Si, Ge, Sn, and Pb) is one of the most important organometallic fields. Recent developments in this research area moved such species from the class of short-lived reactive intermediates to the class of easily accessible, isolable, and fully characterizable compounds. In this Account, we deal with the major accomplishments in the field of the stable representatives of "heavy" cations, radicals, and anions.     

Breaking, making, and twisting of chemical bonds in gas, liquid, and nanocavities

In this Account, we recount on our studies of 1'-hydroxy-2'-acetonaphthone (HAN, a proton transfer prototype molecule) in gas, solutions, and nanocavities. The internal H-bond photoreaction in HAN leads to a keto type structure, and following its formation, an internal twisting motion gives birth to keto rotamers. Theory, temperature, and solvent effects on its photodynamics show the involvement of efficient radiationless processes in both keto structures. When HAN is caged in a cyclodextrin nanocavity, the spectroscopy, photodynamics, and issues of twisting motion are strongly affected and could be tuned: a behavior relevant to those of many chemical and biological systems.     

Thermoplastic processing,rheology, and extrudate properties of wheat,soy, and pea proteins

Plant protein isolates (wheat gluten, soy, and pea protein) were treated in a thermoplastic extrusion process, yielding protein based bioplastic material. The application of glycerol as plasticizer in amounts of 50–67% of total mass and high temperatures above 140°C led to smooth and homogeneous extrudates. Viscosity measurements of the protein melt under extrusion conditions confirmed the thermoplastic behavior, obeying the power law with power law indices of 0.31‐0.4. Chemical changes in the material were qualitatively shown by amino acid analysis and fluorescence measurement. High moisture sensitivity and low mechanical stability of the extrudates, as determined by solubility, water vapor permeability, sorption isotherms, and tensile strength, can be partially ascribed to the high glycerol content. The application of pure protein bioplastics for technical purposes, e.g., as packing material, is discussed on basis of the presented data considering stability, appearance, and long time storage. POLYM. ENG. SCI., 55:1912–1919, 2015. © 2014 Society of Plastics Engineers