聚合度4～6壳寡糖的制备及其活性研究

制备高活性壳寡糖并对其生物活性进行研究。专一性壳聚糖酶酶解壳聚糖制备壳寡糖,采用乙酰丙酮法测定壳寡糖的数均分子量;不同剂量壳寡糖灌喂小鼠,探讨壳寡糖对小鼠免疫功能的影响以及对小鼠肝脏的保护作用。所得壳寡糖的数均分子量为1246.38,聚合度为4～6;该壳寡糖对小鼠免疫器官具有明显的保护和促进生长作用,显著提高了小鼠的抗疲劳能力以及抗菌活力,对小鼠肝脏具有显著的保护作用。专一性壳聚糖酶酶解所得聚合度4～6的壳寡糖具有较高的生物活性,壳寡糖在保健食品开发及医药等领域的应用前景广阔。     

壳聚糖在小鼠体内的组织分布与排泄

研究相对分子质量为50万、脱乙酰度为90%的壳聚糖给小鼠灌胃后在体内的吸收、分布及排泄,为壳聚糖药效学及制剂的开发和利用提供基础数据.用异硫氰酸荧光素对壳聚糖进行标记,产物称为荧光标记的壳聚糖,即FITC-CIS;采用荧光分光光度计测定和HPLC分析相结合的方法,测定小鼠口服FITC-CIS后药物在体内各组织中的分布,并检测给药后24 h内药物从尿和粪中排出的情况.检测方法适用于FITC-CIS在动物体内的药动学研究,实验获得纯化的荧光标记壳聚糖,给小鼠灌胃后壳聚糖在血清中质量浓度非常低,体内主要分布在肾脏中,主要是经粪便排出,粪便中壳聚糖以原形排出,部分分解的壳聚糖从尿液中排泄.     

富锌酵母提取物在大鼠体内的代谢动力学研究

灌胃方式下,研究富锌酵母提取物(ZnE)在大鼠体内的代谢动力学。大鼠分别单次、连续7d灌胃4 mg Zn/kg后,0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48、72、120 h分别采集血液及心、肝、脾、肺、肾、胰、脑、睾丸、骨骼肌、股骨样品。利用高分辨电感耦合等离子体质谱法检测血浆中锌的含量,火焰原子吸收法测定组织中锌浓度,非房室模型计算ZnE的代谢动力学参数。ZnE在大鼠血液及体内各组织中末端消除半衰期大于238 h,平均驻留时间大于59 h,以股骨中锌浓度最高,其次是肝、胰、睾丸、肾、脾、肺、心、肌肉、脑。ZnE中的锌广泛分布在大鼠各组织中,消除缓慢。     

功能性壳寡糖在食品领域的应用研究进展

壳寡糖主要以壳聚糖为原料，经生物酶解加工而成，具有分子量小、聚合度低、水溶性好等特点，分子量小于3 000 Da的壳寡糖很容易通过肠道代谢被肠上皮吸收，具有多种生物功能活性。该文就小分子量的壳寡糖在调节肠道菌群、提高免疫力、抗肿瘤、保护肝脏、降尿酸、降血糖等方面的功能活性进行综述，对小于3 000 Da分子量壳寡糖的功能活性进行比较分析，并充分探究不同分子量和聚合度的壳寡糖的作用机制，结合目前壳寡糖的应用现状，分析壳寡糖未来的发展趋势，为壳寡糖在食品等领域的广泛应用提供参考。     

原花青素B_2代谢产物在小鼠体内组织的分布

为了探究原花青素B_2在小鼠体内主要代谢产物形式及其组织分布。采用高效液相色谱-二级阵列-电喷雾-离子阱-飞行时间质谱技术测定分析原花青素B_2灌胃小鼠的血浆、肝、心、脾、肺、肾、脑、小肠样品中代谢产物。结果表明,原花青素B_2在小鼠体内结合代谢产物形式主要包括:甲基化(8种)、磺酸化(7种)、水合(5种)、羟基化(1种)、葡糖苷酸化(1种);在血浆、肝、小肠、肾、肺、心、脑和脾中检出的原花青素B_2代谢产物的种类分别为6、8、8、6、3、6、2、2种,且发现3种单体表儿茶素及其代谢产物。原花青素B_2结合型代谢产物多样,在小鼠体内组织分布范围广,甲基化、磺酸化和水合代谢是主要的结合型产物形式,肝脏是原花青素B_2结合产物(M_r577.13)形成的主要器官,黄烷键(4β→8)的断裂产物是原花青素B_2重要的吸收形式之一。     

海藻胶寡糖的分离制备及电喷雾质谱分析

为获得不同聚合度的海藻胶寡糖并对其进行确证,以海藻胶经酶解制得的寡糖产品为原料,对其总糖含量、糖醛酸含量以及单糖组成等理化指标进行测定,运用硅胶柱层析对寡糖混合物进行分离,以薄层色谱和电喷雾质谱对所得的寡糖单体进行分析。结果表明：酶解所得到的原料主要为聚合度2～10 的寡居糖醛酸混合物;经硅胶柱层析分离可获得聚合度2～5 糖的单体。本方法可分离、制备和鉴定海藻胶寡糖。     

壳寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用及机制研究

壳寡糖(chitooligosaccharides, COS)是一种具有多种生物活性的低聚寡糖,该文探究了COS对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响作用。通过胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,评估COS及其单体组分(聚合度2～4)对其缓解作用。结果显示,COS显著提高产生胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量,促进其葡萄糖代谢。进一步评估不同聚合度的COS单体发现,壳二糖和壳四糖对胰岛素抵抗的肝细胞无显著改善效果,而壳三糖显著提高胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量。另外,COS及壳三糖显著提高胰岛素受体(insulin receptor, IR)、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1, IRS-1)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4, GLUT4)蛋白水平,活化蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)以及改善相关基因转录水平。综上,COS通过介导Akt/GLUT4通路改善HepG2细胞的胰岛素抵抗,壳三糖在促进糖代谢中表现最优。     

壳二糖、壳三糖单体制备及其结构分析

壳寡糖因自身结构特征而存在多种生物活性,目前对壳寡糖的活性研究大部分是不同聚合度的混合物。为获得单一聚合度壳二糖、壳三糖,采用了专一性壳聚糖酶对壳聚糖进行降解,运用薄层色谱法(TLC)判断酶解反应终点,并采用高效液相色谱法(HPLC)法进行定量分析。结果表明酶解组分主要为壳二糖、壳三糖,含量分别为65.63%,32.48%。将酶解后的混合组分采用实验室自制的阳离子交换树脂QY-H003对酶解产物进行分离,以盐酸浓度为C_1=1.25 mol/L、C_2=1.55 mol/L为洗脱剂进行梯度洗脱得到两个组分。采用TLC、HPLC、红外光谱(FT-IR)及核磁共振氢谱(1HNMR)检测手段对组分进行分析。分离纯化获得的壳二糖、壳三糖组分经HPLC法检测,纯度分别98.06%,96.00%。壳二糖回收率达92.46%、壳三糖回收率达95.53%。该制备工艺放大后可实现高纯度壳二糖、壳三糖单体规模化制备,为壳二糖、壳三糖的生理活性研究及应用提供物质基础。     

壳寡糖及其磷酸化修饰产物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

目的:研究壳寡糖及其磷酸化修饰产物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测壳寡糖及其磷酸化修饰产物在不同质量浓度条件下对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果:壳寡糖及其修饰产物对小鼠脾细胞均具有明显的细胞增殖作用,并存在一定的剂量依赖关系,2种实验药物均能提高IFN-γ水平;IL-2测定结果显示,壳寡糖具有明显提高脾细胞分泌IL-2的作用。结论:壳寡糖及其修饰产物具有明显的免疫增强作用,该作用与诱导小鼠脾细胞增殖、提高脾细胞中IFN-γ、IL-2的水平有关。     

特定聚合度区间壳寡糖的膜分离制备技术

为了制备特定聚合度范围的壳寡糖(Chitooligosaccharides,COS),本研究探索了物料浓度、温度和跨膜压差(transmembrane pressure,TMP)条件对1000 Da纳滤膜分离壳寡糖混合物过程的影响,并针对连续渗滤过程,建立了壳寡糖收率和纯度预测的数学模型。结果表明,料液浓度70 g/L、温度45℃和跨膜压差15 bar为最佳分离条件。在最佳条件下,通过连续渗滤和纳滤浓缩过程处理壳寡糖混合物,获得了以聚合度(Degree of polymerization,DP)2~5为主的壳寡糖,纯度和收率分别为82.1%和42.1%,并利用数学模型成功预测了聚合度2~5壳寡糖的收率和纯度。本研究建立了一种基于纳滤膜分离的聚合度2~5壳寡糖的制备方法,为壳寡糖的功能研究和应用开发提供了基础。     

摄食壳聚糖对小鼠体内铅水平的影响

采用壳聚糖含量为1.05% 的饲料喂食小鼠90d,喂食的四种壳聚糖分别是高分子量壳聚糖(HCS)(重平均分子量Mw7.60 × 105,脱乙酰度(DDA) 85.5%、中分子量壳聚糖(MCS)(Mw3.27 × 104,DDA85.2%)、壳寡糖(COS)(Mw0.99 × 103,DDA 85.7%)和水溶性壳聚糖(WSC)(Mw3.91 × 104, DDA52.6%)。喂养期间,小鼠无非正常症状和死亡发生。实验结果表明,喂食HCS 对小鼠的肝、脾、心脏和肾脏中的铅含量几乎无影响,COS 和WSC使小鼠的肝、脾和心脏中的铅含量有所降低。但是,MCS 却明显增加了肝脏中铅含量。     

益生菌契达干酪抗氧化肽的结构及其体内代谢稳定性

本实验分别向契达干酪中添加瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌制备益生菌干酪,研究其体内抗氧化活性,并将干酪中的抗氧化肽进行分离纯化,利用高效液相色谱-质谱联用法鉴定其结构,采用荧光标记示踪法研究抗氧化肽体内代谢途径及稳定性。结果表明,与衰老模型组相比,喂养干酪提取液的小鼠血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力显著升高（P＜0.05）,其中含瑞士乳杆菌契达干酪提取液体内抗氧化活性最好,小鼠血清中的SOD、CAT、GSH-Px活力较衰老模型组分别提升了45.98%、35.33%和37.93%,且与正常对照组和VC组无显著差异（P＞0.05）。从瑞士乳杆菌契达干酪提取液中鉴定出6 种抗氧化肽,其中肽段QPHQP抗氧化活性最高。该抗氧化肽在体内的作用顺序为：胃、肠→肾、肝、肺→心脏、脾→脑。除胃肠道外,小鼠肝脏中标记肽蓄积量最高且下降缓慢。由此说明,益生菌干酪在体内仍可起到抗氧化活性,干酪中的抗氧化肽进入体内后经胃肠道消化,随血液循环到达靶器官,且主要蓄积在肝脏并发挥活性。     

PHYSIOLOGICAL DISPOSITION,SUBCELLULAR DISTRIBUTION AND TISSUE BINDING OF α-CHACONINE (3H)12

The distribution, absorption, metabolism and tissue binding of radioactivity were studied in hamsters after oral and intraperitoneal administration of α-chaconine-(³H). The material was well absorbed from the gastrointestinal tract and nearly 25% of the label was excreted in 7 days via urine and feces. The excretion was higher in urine (24%) than in feces (1%). Tissue concentrations of radioactivity peaked at 12 h following po administration, with the highest concentrations being in lungs, liver, spleen, skeletal muscle, kidney and pancreas, with heart and brain containing moderate amounts. Excretion of chloroform-soluble products in the feces was 100 higher than that of chloroform-insoluble metabolites after oral and ip administration. In urine, the activity was predominantly in the chloroform-insoluble form and the chloroform-soluble metabolites were relatively small in amounts (0.29, 0.85 and 2.45% versus 0.0, 0.14 and 0.19 for 12, 24 and 72 h, respectively). After 7 days, the chloroform-soluble metabolites in urine increased to 20% of the excreted radioactivity, while the amount of chloroform-insoluble metabolites was less than 1%. Subcellular distribution of the labeled compound indicated the highest concentration of radioactivity in the nuclear and microsomal fractions of brain, liver, and heart tissues. Binding of radioactivity was observed in brain, testes, kidney, lung, liver and heart. All of the label in brain appeared to be in bound form. The results indicated that α-chaconine which is absorbed from the gastrointestinal tract after oral administration persists in various tissues, much of it in bound (nonextractable) form (in microsomal fraction).     

Dietary phytosterols modify the sterols and fatty acid profile in a tissue-specific pattern

Phytosterol consumption reduces the absorption of dietary cholesterol and can alter the tissue fatty acid composition. The effects of manipulating sterol and phospholipid fatty acid profile by increasing levels of phytosterols (1000 and 4000 mg/kg diet) have been investigated in young Sprague–Dawley rats. Cholesterol levels decreased significantly only in liver, heart and skin. Significant increased levels of phytosterols were detected in all ten tissues analysed, with levels of campesterol in general being greater than those of β-sitosterol. The level of phytosterol incorporation ranged widely in tissues, more than doubling in heart, lung, spleen and erythrocytes to no significant increases in brain. In heart, kidney, spleen and lung there were dose dependent increases in phytosterol levels. The phospholipid fatty acid profile showed some small, but significant changes, but these were not consistent between tissues or for fatty acid classes. Dietary phytosterols accumulated differently in tissues and affected cholesterol levels and phospholipid fatty acid composition in a tissue-specific manner.     

农大4号’欧李果实花色苷对D-半乳糖致衰老小鼠保护作用研究

为了研究'农大4号'欧李果实花色苷对衰老小鼠保护作用,采用颈部皮下注射D-半乳糖构建衰老小鼠模型,用不同剂量(高、中、低剂量分别为500、250、125 mg·(kg·d)-1)的花色苷灌胃小鼠,计算小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏及肾脏指数,并测定小鼠血清、心脏、肝脏、脾脏和肾脏中总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的指标变化情况。结果表明:与空白组相比,模型组小鼠肝脏指数、脾脏指数和肾脏指数显著下降(P<0.05),血清和各脏器组织中的T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT均显著降低(P<0.05),MDA含量显著升高(P<0.05),说明衰老小鼠模型构建成功。与模型组相比,高剂量组的肝脏指数、脾脏指数和肾脏指数显著升高(P<0.05),血清和各脏器中的T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT均有显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。由此得出,'农大4号'欧李果实花色能有效增强小鼠的抗氧化能力,对衰老小鼠有较强的保护作用。     

Distribution of procyanidins and their metabolites in rat plasma and tissues after an acute intake of hazelnut extract

Procyanidins are present in a wide range of dietary foods and their metabolism is well known. Nevertheless, the biological target and their distribution are topics lacking information. The purpose of the present work was to study the metabolism and distribution of procyanidins and their metabolites in rat plasma and different tissues, such as liver, brain, lung, kidney, intestine, testicle, spleen, heart and thymus, after 2 h of an acute intake of hazelnut extract rich in procyanidins (5 g kg(-1) of rat body weight). The interest of an acute intake of procyanidins instead of repeated low doses from daily ingestion of is to achieve a concentration of metabolites in the tissues that allows their detection and quantification. The results showed that catechin and epicatechin-glucuronide, methyl catechin and epicatechin-glucuronide and methyl catechin and epicatechin-sulphate were detected in plasma samples at the μmol level. On the other hand, catechin-glucuronide, methyl catechin-glucuronide and methyl catechin-sulphate were identified in some tissues, such as thymus, intestine, lung, kidney, spleen and testicle at the nmol level. Procyanidins with a low grade of polymerization (dimers and trimers) were detected in plasma samples and the intestine. Additionally, a wide range of simple aromatic acids from fermentation by the colonic microflora was detected in all tissues studied.     

菜籽油中芥酸含量对动物食用安全性的影响

采用气相色谱法分析双低冷榨菜籽油和普通菜籽油的芥酸含量;运用掺食法喂饲小鼠含两种菜籽油的饲料(含油量2%),连续饲养5 周,观察小鼠、体质量、摄食量、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、脏器( 心、肝、脾、肺、双肾、睾丸、卵巢) 质量的变化;研究菜籽油中芥酸含量对小鼠食用安全性的影响。结果表明,双低冷榨菜籽油芥酸含量为4.744%,普通菜籽油芥酸含量为 32.595%,双低冷榨菜籽油芥酸含量明显低于普通菜籽油。喂饲双低冷榨菜籽油饲料组小鼠血清TC、TG 水平低于普通菜籽油饲料组;血清HDL-C 水平略高于普通菜籽油饲料组;与普通菜籽油饲料组相比,喂饲双低冷榨菜籽油饲料对小鼠血脂水平有良好影响。与正常对照组和双低冷榨菜籽油组相比,普通菜籽油组小鼠心脏质量和肝脏质量明显升高,可能与芥酸使脂肪沉积于心脏和肝脏有关。喂饲两种菜籽油对小鼠体质量、摄食、其他脏器质量均无明显影响。     

石榴叶多酚对急性酒精性肝损伤小鼠肾脏、心脏及免疫器官的抗氧化作用

目的:研究石榴叶多酚(purified polyphenols from Punica granatum L.leaves,PPPL)对酒精所致急性肝损伤小鼠肾脏、心脏、脾脏、胸腺的保护作用。方法:将66只雄性小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(联苯双酯150 mg/(kg·d)),PPPL低、中、高剂量组(100、200、400 mg/(kg·d)),连续灌胃30 d,第31天除空白对照组外其余各组给予50%乙醇(12 m L/kg),建立小鼠急性肝损伤模型。将小鼠脱臼处死后取肾脏、心脏、脾脏及胸腺,测定其超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。结果:与模型对照组相比,PPPL各剂量组均能提高小鼠各脏器的SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH含量,降低MDA含量。结论:PPPL对酒精性肝损伤小鼠肾脏、心脏及免疫器官具有明显的抗氧化作用。     

新型α-葡萄糖苷酶抑制剂1-脱氧野尻霉素-羟基查耳酮杂合体在大鼠体内的吸收与代谢

本实验研究了新型、高效α-葡萄糖苷酶抑制剂1-脱氧野尻霉素-羟基查耳酮杂合体（DC-5）在大鼠体内的吸收与代谢。超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱（ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS）检测结果表明,DC-5灌胃后大鼠血液中出现了加氢还原、甲基化、磺酸化及葡萄糖醛酸化4 种代谢产物;灌胃后0.5 h,大鼠血液、心、肝、肺、胃、小肠中的DC-5含量达到峰值,而脾和肾中则在灌胃后1 h达到最高值;大鼠血液中DC-5的峰值质量浓度为162.76 ng/mL,半衰期（half-life in the terminal phase,T1/2）为30.66 h,平均驻留时间（mean residence time,MRT）为11.41 h;粪便是DC-5的主要排泄途径,24 h内排泄量为灌胃量的2.26%,显著高于24 h内尿液中的排泄量（0.015 6%）;药代动力学分析结果表明,DC-5在大鼠体内的生物利用度为1.47%。