纳他霉素高产突变菌株高通量筛选方法的建立

为了提高纳他霉素（natamycin）高产菌株诱变后的筛选效率,建立一种24孔深孔板/酶标仪发酵初筛和摇瓶发酵复筛的高通量筛选检测方法,得到在24孔深孔板发酵结果与摇瓶发酵有很好的一致性,证实了酶标仪检测可以替代高效液相色谱法检测用于突变菌株的快速高通量筛选。以褐黄孢链霉菌（Streptomyces gilvosporeus TUST01）作为出发菌株,通过多轮的紫外诱变、常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma,ARTP）以及硫酸二乙酯复合诱变、孔板初筛与摇瓶复筛,从887株突变株中筛选出遗传性稳定的高产菌株S. gilvosporeus Y-4-75,其摇瓶纳他霉素产量（5.95 g/L）与生物量（29.19 g/L）较出发菌株分别提高了31.93%和15.19%。     

一株产α-葡萄糖苷酶菌株的鉴定和选育

通过平板初筛和摇瓶复筛,结合酿酒酵母利用可消化性糖和高效液相色谱法,从海泥中分离到一株产α-葡萄糖苷酶菌株YX41,纯化后经形态观察、生理生化特征和26 S rDNA序列及系统发育树分析,鉴定菌株YX41为伯顿毕赤酵母。通过UV-LiCl对出发菌株YX41进行复合诱变处理,获得一株正向突变株ZG36,该突变株经摇瓶发酵,α-葡萄糖苷酶活力达到4.32 U/mL,比出发菌株提高了32%。     

多不饱和脂肪酸高产菌株的诱变选育

为获得多不饱和脂肪酸高产菌株，以深黄被孢霉（Mortierella isabellina）AS3.3410为出发菌株，利用紫外线（UV）及氯化锂（LiCl）对其进行复合诱变，通过乙酰水杨酸初筛、苏丹黑B染色，摇瓶复筛，得到高产多不饱和脂肪酸突变菌株，并对其遗传稳定性和油脂组成成分进行分析。结果表明，筛选得到一株突变株SLZH-20，具有较好的遗传稳定性，其摇瓶发酵5 d时，生物量和油脂含量分别为22.76 g/L、52.30%，比出发菌株分别提高34.60%和24.30%；该菌株所产油脂中不饱和脂肪酸包括棕榈一烯酸、油酸、亚油酸、γ-亚麻酸、α-亚麻酸，含量为81.41%，多不饱和脂肪酸含量为16.24%，比出发菌株分别增加5.72%和2.18%。     

增加ccaR基因剂量提高棒状链霉菌克拉维酸产量的研究

CcaR蛋白对棒状链霉茵(S.clavuligerus)中克拉维酸的合成具有正调控作用,由ccaR基因编码.PCR获得包含ccaR完整基因及其上下游一定区域的扩增产物,构建重组质粒pSET152-ccaR并转化大肠杆茵ET12567/pUZ8002后,通过属间接合转移至棒状链霉菌B71-14中.pSET152含有attP位点,可以与链霉菌基因组中的attB住点特异性同源整合,将重组质粒pSET152-ccaR携带的ccaR插入到S.clavuligerusB71-14染色体中的attB位点,实现了在S.clavuligerusB71-14基因组中增加一个拷贝ccaR基因的目的,所得的突变株S.clavuligerusB71-14:ccaR产酸量可达821.92 mg/L,是出发菌株的1.54倍.     

高产ε-聚赖氨酸白色链霉菌的复合诱变选育研究

为了进一步提高ε-聚赖氨酸的产量,本实验以白色链霉菌SA为出发菌株,采取紫外照射复合氯化锂(15W,25s,0.5%LiCl)诱变选育及0.025mol/L亚硝酸诱变选育,得到一株具有遗传标记AEC的抗性突变高产菌株UN2-71,在液体摇瓶发酵培养基中,ε-聚赖氨酸产量达到1.64g/L,较出发菌株提高57.7%.     

十二碳二元酸产生菌热带假丝酵母的诱变

以热带假丝酵母菌(Candidatropicalis)为出发菌株,经紫外线和氯化锂复合诱变或亚硝酸诱变获得突变株.通过摇瓶分批发酵,对菌株诱变前后发酵产长链二元酸量进行了测定.筛选出能够发酵产酸的突变株12株,其中8株表现出正突变,菌株最高产酸量提高了9.16%.     

TTC在发酵木糖高产乙醇的休哈塔假丝酵母选育中的应用

TTC可以作为筛选发酵葡萄糖产酒精能力强的酵母茵的显色剂,但发酵木糖产乙醇的酵母茵的代谢和发酵途径与之相比都有所不同,本实验用TTC作为初筛显色剂筛选发酵木糖产酒精能力较强的休哈塔假丝酵母.紫外诱变后从TTC平板上挑取显红色菌株150株进行摇瓶发酵测定乙醇产量,得到的正突变率为29%,负突变率为10%;挑取显白色菌株100株,得到的正突变率为0,负突变率为56%.将紫外诱变后产量已经有所提高的突变株S28进行氮离子注入诱变,从TTC平板上挑取显红色菌株100株进行摇瓶发酵测定乙醇产量,得到的正突变率为20.05%,负突变率为10.14%,其中的部分突变株的产量相比S28又有所提高.可见TTC能将乙醇产量较低的菌株淘汰,筛选出乙醇产量高的休哈塔假丝酵母菌.     

利用甘蔗糖蜜发酵生产酵母单细胞蛋白的菌种选育

以甘蔗糖蜜作为发酵原料,经过摇瓶发酵培养,筛选得到一株总蛋白得率较高的啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)S9。以S9为出发菌株进行60Co诱变选育实验,筛选到一株高生物量高蛋白含量的S906突变菌株,在相同的发酵条件下,生物量为11.25g/L,蛋白质质量分数为45.96%,总蛋白质得率达5.17g/L,比诱变前增加了39.0%。S906传代10次,其生物量、细胞粗蛋白含量无大的变化,表明该菌株遗传性状稳定,经过改良可作为工业化生产单细胞蛋白菌株。     

枯草杆菌纤溶酶高产菌株的物理化学诱变

以枯草杆菌FM-S2作为出发菌株,经γ-射线和2.5%硫酸二乙酯复合诱变,结合牛奶蛋白平板从2341株存活菌中初筛得到200株诱变菌株,经摇瓶测定纤溶酶活性进行复筛得到7株生产性能较出发菌株显著提高的突变株,它们的纤溶酶活性超过2000UK.U/ml。其中突变株γ-DES36纤溶酶活性最高达到2719.89±242.51UK.U/ml,同时该菌株遗传性能稳定。     

棒状链霉菌F613-1的诱变及其发酵工艺优化

该实验旨在获得克拉维酸高产菌株,并通过发酵条件优化提高其产量。以棒状链霉菌（Streptomyces clavulans）F613-1为出发菌株,通过紫外和亚硝基胍（NTG）联合诱变及含链霉素固定培养基筛选并在对突变菌株添加发酵前体研究基础上,通过单因素试验和响应面法优化其摇瓶发酵条件。结果表明,成功筛选一株棒状链霉菌衍生菌株,克拉维酸产量较出发菌株提高19.9%;添加1.5%甘油和0.15%谷氨酸可大幅缩短突变株发酵时间;突变株前36 h时25 ℃培养,后37 h时29 ℃培养,发酵pH值为7,克拉维酸产量达5.44 g/L,较出发菌株提高了55.8%。棒状链霉菌高产菌株的摇瓶发酵条件优化效果显著,为进一步提高克拉维酸生产提供依据。     

原生质体融合法提高棒状链霉菌的克拉维酸产量

采用原生质体融合技术,将克拉维酸生产菌——棒状链霉菌甘油耐受性突变株B71-14和舒巴坦钠耐受性突变株B71-50进行了原生质体融合。以2种抗性为选择标记,筛选融合子。从形态上与2亲本菌株不同的98株融合子中发现了1株融合子F-11,既有甘油抗性又有舒巴坦钠的抗性,其克拉维酸产量为742.71 mg/L,是亲本菌株B71-14(538.20 mg/L)的1.38倍,是亲本菌株B71-50(479.91 mg/L)的1.55倍。     

claR基因的扩增对棒状链霉菌棒酸合成的影响

从棒状链霉菌中克隆对克拉维酸具有正调控作用的基因claR。构建了claR的重组质粒pSET152-claR,通过接合转移将重组质粒pSET152-claR转入了野生型S.clavuligerus中,通过pSET152-claR中的attP位点整个质粒插入到S.clavuligerus基因组中的attB位点,实现了S.clavuligerus基因组DNA中增加一个拷贝claR基因的目的,所得突变株S.clavuligerus∷claR通过发酵培养,HPLC检测克拉维酸产量为原产量的1.86倍。     

PCR-Targeting体系构建棒状链霉菌基因突变株

棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)可产生多种β-内酰胺类化合物,其中包括克拉维酸。利用聚合酶链式反应(PCR)-Targeting体系构建棒状链霉菌突变株是获得克拉维酸高产菌株的又一可行方法。采用该体系对棒状链霉菌的lat基因进行了敲除,获得了没有抗性标记的lat基因被敲除的突变株S.clavuligerus lat::scar,其克拉维酸产量是出发菌株的2.8倍。由于最终构建的突变株没有抗性标记,因此可以将该方法应用于突变棒状链霉菌的其他基因,实现用一种抗性标记突变同一菌株不同基因的目的,为链霉菌的基因突变提供了又一种有效的方法。     

棒状链霉菌中lat基因的突变及其对克拉维酸产量的影响

以棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus NRRL3585的染色体为模板扩增得到1条1.77kb的lat基因片段,并将其用于构建重组质粒pKCLES。将pKCLES由E.coli ET12567接合转移至S.clavuligerus中。重组质粒pKCLES与S.clavuligerus染色体中野生型lat基因发生同源交换,从而获得了带有阿泊拉抗性的突变菌株。对S.clavuligerus NRRL3585以及lat突变菌株的基因组进行PCR验证,且测定了这2种菌株的产头酶素C的能力。结果均表明,突变菌株中的lat基因中插入了含有阿泊拉抗性的pKC1139片段而遭到了破坏。另外,以HPLC法测定了这2种菌株在不同培养时间(72h和96h)下的克拉维酸的产量,结果显示,lat突变菌株的克拉维酸产量最高能达到其原始菌株的2.3倍。     

Isolation and identification of a novel microorganism producing the immunosuppressant tacrolimus

An extensive screening program has isolated a novel microorganism capable of over-producing tacrolimus, an effective immunosuppressant with a superior potency relative to cyclosporine A. The initial screening step based on anti-fungal activity against Aspergillus niger ATCC 6275, a FK506 sensitive test strain, resulted in the isolation of 127 Actinomycetes from Korean soil samples. Subsequent T-cell proliferation assay demonstrated that among the 127 Actinomycetes isolated, only one strain exhibited immunosuppressive activity. Examination of the general taxonomical characteristics and data from the phylogenetic sequence analysis of the 16S rRNA gene led to identification of the isolate as a strain of Streptomyces clavuligerus. The immunosuppressive activity of this newly isolated strain, S. clavuligerus CKD1119 was confirmed to be identical to that of tacrolimus. Moreover, a 7 l jar fermentor experiment using the isolate yielded a peak titer of 58 mg/l for FK-506 production after 8 d of culture in production medium.     

基于智能感官多源信息融合技术的滇红工夫茶汤综合感官品质评价

依据专家感官评价，将21 个滇红工夫茶汤综合品质由好到差依次划分为甲、乙、丙三类，基于电子鼻、电子舌、电子眼多源信息融合技术得到112 维的数据集用以表征茶汤综合品质。结果表明：正交偏最小二乘判别分析（R2Y=0.937，Q2=0.900）可以实现3 类茶汤的有效区分，基于变量投影重要性值大于1.5筛选出S1（AHS）、S5（NMS）、B71和B32（橙花醇）、B27（月桂烯）、S4（CTS）、B29（柠檬烯）7 个变量对分类起到重要作用。进一步，基于偏最小二乘回归和逐步多元回归分析实现了对茶汤综合品质得分的定量预测：前者绝对误差在1.86 分之内，相对误差在2.06%以内；后者绝对误差在3.57 分之内，相对误差在4.07%以内。结果表明，电子鼻、电子舌、电子眼多源信息融合技术结合多元统计分析，可以实现滇红工夫茶汤综合品质的定性和定量评价，为茶汤的品质控制和质量评价提供了有效的技术支撑。     

The aromatic volatile composition of Lonicera edulis wines produced with three different strains of Saccharomyces cerevisiae

Three different strains of Saccharomyces cerevisiae – D₁₅, Dibosh and 71B – were evaluated in the fermentation of Lonicera edulis wines. Volatile aromatic components were analysed by gas chromatography–mass spectrometry coupled with headspace solid‐phase microextraction. In all, 81 volatile compounds were identified in L. edulis wines, including 43, 48 and 38 individually found in wines fermented with D₁₅, Dibosh and 71B. There were 17 common volatile aromatic components found in all the three L. edulis wines. The main volatile compounds in wines fermented with D₁₅ and Dibosh yeasts were 2‐methyl‐1‐butanol (24.8%) and hexane (20.6%). Pentanol was the primary volatile aromatic compound in wines produced with S. cerevisiae 71B, accounting for 40.8% of total volatile aromatic compounds. Combining the sensory analysis, S. cerevisiae D₁₅ was suggested to be the most suitable strain for producing L. edulis wine. © 2018 The Institute of Brewing & Distilling     

Antibiotic resistance of Aeromonas hydrophila isolated from marketed fish and prawn of South India

From February to November 1999, 198 samples of chicken meat for sale in retail outlets and supermarkets in nine provinces of Castilla and León (Spain) were analysed for the prevalence of Salmonella and Campylobacter. Salmonella was isolated from 71 (35.83%) of the samples analysed. The predominant serovars were S. enteritidis (47.88%), S. hadar (25.35%) and serotype 4,12:b:-(II) (19.71%). Other serovars such as S. mbandaka, S. derby, S. virchow and S. paratyphi B were isolated in much lower levels. Thermophilic campylobacters were isolated in 49.50% of the samples studied.     

3 种酵母发酵生产红树莓酒香气成分的GC-MS分析

以D254、71B、D15 3 种果酒酵母进行发酵制备红树莓酒,并分析其香气化学成分。采用顶空-固相微萃取法提取3 种酵母酿造的红树莓酒香气成分;利用气相色谱-质谱进行香气成分的分离测定,结合计算机检索技术对分离化合物进行鉴定,利用峰面积归一法测定各香气化学成分的相对含量,共鉴定出105 种香气成分,其中D254、71B、D15酵母发酵的红树莓酒中分别检测出35、48、57 种香气成分,共有8 种成分相同。D254酵母发酵的红树莓酒的主要香气成分为3-甲基-1-丁醇（54.39%）;71B酵母发酵的红树莓酒的主要香气成分为丙烯酸异辛酯（12.41%）、脱羰秋水仙碱（12.06%）、癸酸乙酯（8.21%）;D15酵母发酵的红树莓酒的主要香气成分为三辛酸甘油酯（11.06%）和安非拉酮（8.81%）。综合气相色谱-质谱分析与感官评价结果表明,71B酵母发酵生产的红树莓酒香气较好,适宜大众口味,从而得出71B酵母为生产红树莓酒的最优菌株。