重组超氧化物歧化酶1/3杂合酶在大肠杆菌中表达的优化

目的获取活性高的重组SOD 1/3杂合酶。方法用含pET-SOD 1/3的工程菌诱导表达重组SOD 1/3杂合酶,通过分析SDS-PAGE及SOD酶活性,考察诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、Cu 2+、Zn 2+浓度对重组酶表达量和活性的影响。结果正交试验表明,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在A600=1.2时诱导,Cu2+、Zn2+浓度分别为2.4 mmol/L,诱导温度15℃,诱导时间12 h,能获得高活性重组SOD 1/3,其比活性为1681U/mg。结论培养温度和Cu2+、Zn2+浓度是优化表达的最主要因素。降低诱导温度有利于重组酶的可溶性表达,添加Cu2+、Zn2+能促进重组酶活性提高。     

康氏木霉木聚糖酶酶学性质的研究

对1株康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适反应pH为6．0；该酶在20-60℃范围内能保持80％以上的酶活，在pH3．0-10．0的范围内能保持85％以上的酶活；金属离子Ba^2＋、Fd^2＋、Al^3＋，12mmol／L的Cu^2＋和Fe^3＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶反应则有促进作用。     

重组人SOD2/3杂合酶原核表达及纯化方法的研究

目的摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶(rhSOD2/3)。方法利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2+浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯合亲和层析纯化rhSOD2/3。结果重组酶的表达量占菌体总蛋白40%~50%,最佳表达温度15℃、诱导剂浓度0.5 mmol/L,Mn2+浓度2.5 mmol/L,表达时间16 h,亲和层析能较好的纯化rhSOD2/3,比活从粗酶液220 U/mgpr提高到930 U/mgpr以上。结论成功获得了rh SOD2/3最适的表达条件及纯化方法。     

重组人SOD2/3杂合酶原核表达及纯化方法的研究

目的 摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶(rhSOD2/3).方法 利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2+浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯合亲和层析纯化rhSOD2/3.结果 重组酶的表达量占菌体...     

壳聚糖-铜(Ⅱ)配合物固定化青霉素G酰化酶

目的壳聚糖与CuSO4络合为壳聚糖铜后以高分子配位键法固定化青霉素G酰化酶,考察固定化酶的性质。方法单因素优化固定化条件,对Cu^2＋浓度、络合时间、pH、温度、加酶量进行L16（4^5）的正交试验,获得最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性。结果最佳固定化条件为：壳聚糖直接与Cu^2＋络合制备壳聚糖铜载体,Cu^2＋浓度／0．1g·mL^-1,络合时间16h;载体0．3g,酶量1mL,pH4．9,温度30℃,固定化25h。最高固定化酶活性为65U／g湿载体,固定化酶最适反应温度60℃,最适pH9．0,固定化酶具有较好的保存稳定性。结论壳聚糖-铜（Ⅱ）配合物固定化青霉素G酰化酶的活性高,具有一定的应用潜力。     

产生淀粉酶菌株的诱变选育及酶学性质研究

以产生淀粉酶菌株Aspergillus niger AF-0为出发菌株,先后经紫外（UV）、亚硝基胍（NTG）诱变,选育得到了一株产酶活性较高的突变株,其所产马铃薯生淀粉酶的酶活力达43．8U／mL,比原初酶活力19．3U／mL提高了1．3倍。在此基础上,对该酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的最适反应温度为55℃,在60℃以下稳定;最适反应pH为4．0,在pH3．5—5．0范围内稳定;Mn^2＋,Fe^2＋,Zn^2＋,Mg^2＋,Ca^2＋,Ba^2＋对该酶有一定的激活作用,而Cu^2＋,K^＋,Na^＋则抑制酶的活性;该酶以形成孔洞的方式由外向内作用于马铃薯淀粉颗粒。     

粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的发酵条件研究

研究了影响粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的一些摇瓶发酵条件，包括通气量、培养温度、甲醇浓度、Cu2＋浓度等。结果表明，在500mL三角瓶中装入含150μmol／L Cu^2＋浓度的发酵培养基BMMY 50mL，接种后于30℃，200r／min培养7d，用0．5％甲醇诱导，在第5天时漆酶酶活最高可达3．88u／mL。     

杂色云芝漆酶基因在甲醇毕赤酵母中表达条件研究

重组甲醇毕赤酵母（Pichia methanolica）工程菌PMADl6／pMETA-Lccl能分泌表达杂色云芝重组漆酶。本文通过对其发酵条件的研究，找出摇瓶发酵表达漆酶的最适培养条件：在BMMY培养基中添加0．2mmol／L的Cu^2＋．装液量为25mL／250mL三角瓶，接种量体积之比为45：25，0．5％甲醇诱导，20℃条件下摇瓶培养5d，漆酶最高酶活力达1192U／L。     

黑曲霉菊粉酶的分离纯化与酶学特性

黑曲霉（Asperginusniger）105发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到菊粉酶组分,纯化倍数为7．73倍,活力回收率为4．39％。该菊粉酶的最适pH值为6．0,最适温度为50℃,Cu^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋、Fe^2＋对该酶有很强的抑制作用。菊粉酶活力与蔗糖酶活力之比为16．5,表现为内切酶活性。以菊粉为底物时,米氏常数（Kin）为0．1999 mmol／L,最大反应速度（Vmax）为117．32μmol／（mg·min）。     

化学试剂对纺织用纤维素酶性能的影响

采用CMC酶活法和减量法相结合，对金属离子、有机物、表面活性剂和溶液体系等进行研究，分析其对酶活性的影响，结果表明：Na^＋、K^＋、Mg^2＋、Ca^3＋、Co^2＋、Zn^2＋等离子能明显激活纤维素酶．但超过有效浓度后会拥，制酶的活性：舍Cu^2＋、Mn^2＋、Ag^＋等离子的重金属盐是纤维素酶的抑制荆；甲醇、乙醇是纤维素酶的抑制剂，但柠檬酸、甘油、山梨醇等有机物则对纤维素酶起活化作用：离子型表面活性剂易与酶结合，降低了酶与纤维素的结合机会，导致减量率下降．而非离子表面活性剂对纤维素酶有一定的促进作用；纤维素酶整理的溶液最好选择缓冲体系，未经处理的自来水会影响织物整理效果。