牦牛乳中主要过敏原研究

为分析牦牛乳中主要的过敏原,腹腔注射牦牛乳蛋白质免疫Balb／C小鼠．未次免疫后,小鼠摘眼球取血,测定特异性抗体和组胺质量浓度．在无菌条件下收集并培养脾淋巴细胞．Western-Blotting方法分析牦牛脱脂乳中主要过敏原组分．结果显示,牦牛脱脂乳中主要的过敏原组分为β-乳球蛋白、α-酪蛋白和β-酪蛋白,这3种过敏原蛋白质致敏强度的大小为β-乳球蛋白>α-酪蛋白>β-酪蛋白．因为脾淋巴细胞产生的细胞素IL-4、IL-5质量浓度较高而IFN-γ较低,所以牦牛乳蛋白质为Th2应答．     

谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticillium mobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥，制得粗酶粉的酶活约为1033U／g。对粗酶研究发现，该酶的最适反应温度为52℃，最适pH为6.0；粗酶的pH稳定范围在4－8，温度稳定范围在20－40℃，离子强度对该酶的活性稍有影响，粗酶经CM－纤维素层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶，通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度，得到较弱的单一区带，其中，CM－纤维素层析的纯化倍数为4.5，收率质量分数约为78.8%；凝胶过滤层析纯化倍数为1.11，收率质量分数为50％；用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092。     

β-伴大豆球蛋白的分离纯化及免疫活性鉴定

β-伴大豆球蛋白是7S球蛋白的主要成分,是重要的大豆贮藏蛋白。利用等电点沉淀、分级盐析和凝胶过滤分离纯化大豆中的β-伴大豆球蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹的结果表明,所提取的β-伴大豆球蛋白纯度较高,可以与β-伴大豆球蛋白抗血清特异性结合,具有较好的免疫活性。     

牦牛乳脂肪球膜组成分析及蛋白热稳定性

为分析牦牛奶脂肪球膜(MFGM)的组成及探讨其蛋白的热稳定性,采用物理方法从牦牛奶脂肪中提取分离MFGM．结果发现在分离过程中KCl溶液洗涤次数较关键,洗涤3次较适宜． 牦牛MFGM主要由蛋白质(26.93％)和脂类(70.34％)两大物质组成,还含有少量的己糖、唾液酸和灰分．牦牛MFGM蛋白的主要氨基酸是谷氨酸、亮氨酸、丝氨酸和赖氨酸,其中必需氨基酸占整个氨基酸的49.48％．当加热温度达60 ℃时,MFGM蛋白特别是黄嘌呤氧化酶(XO)、过碘酸稀夫6 (PAS6)和过碘酸稀夫7 (PAS7)损失较大．而β-乳球蛋白和α-乳白蛋白在此温度下与牦牛MFGM开始发生结合,MFGM蛋白属于热不稳定蛋白．     

FPLC在纯化马铃薯酪氨酸酶中的应用

对马铃薯酪氨酸酶的分离纯化进行了初探.其粗酶最佳硫酸铵盐析浓度65%,最佳温度30℃,最佳pH 7.5.分别预装Sephodex G75分子筛凝胶柱和HiTrip Q FF阴离子交换层析柱在FPLC自动分离得到纯化的酪氨酸酶,最高纯化倍数达60,并以L-DOPA作底物,测得比酶活为242.84U/mg蛋白.对酶活最大的组分进行了SDS-PAGE表征,电泳呈现一条带,相对分子质量为5.6×104.米氏常数Km为2.0mmol/L.     

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用,从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３个纯组分,并对各组分的氨基酸组成和Ｎ末端２～３个氨基酸序列进行了分析测定,从而确定了３个组分的结构,它们分别是αｓｌ（６１～７９）、αｓｌ（４３～７）β（７～２４）,与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较,用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短。     

混合模式扩张床吸附从牛乳清中分离乳铁蛋白

采用混合模式扩张床吸附介质Streamline Direct HST,直接从牛乳清中分离乳铁蛋白.考察了新型介质的扩张床膨胀特性和流体混合性能,确定合适的操作流速,选定膨胀率为2,可以满足高处理量和床层稳定性的要求.通过静态吸附实验,考察了pH值和离子强度对乳铁蛋白吸附的影响.结果表明,该介质对乳铁蛋白的吸附容量较大,约110 mg/g介质,具有一定的耐盐特性;改变离子强度不能实现有效洗脱,改变pH值是洗脱的合适途径;进行了扩张床吸附分离,采用pH值阶跃洗脱,从牛乳清中分离得到不同乳清分离蛋白组分,20 mmol/L NaOH洗脱下得到乳铁蛋白,收率为87.8%,纯化因子高达10.5, 分离过程体现了扩张床吸附的集成化优势.     

乙醇-环己烷混合物的分离与回收

研究了物理化学二元液系相图实验中产生的乙醇－环己烷废液的回收利用方法．以水为萃取剂,萃取分离乙醇和环乙烷,得到乙醇水溶液和粗环己烷．粗环己烷经精馏提纯,得到纯度为99．91％的纯品;乙醇水溶液经分馏、CaO脱水后得无水乙醇,纯度达99．74％．回收的环乙烷、无水乙醇可回用于二元液系相图实验中．     

海参肠中溶菌酶的分离纯化及其酶学性质

从海参肠中分离纯化溶菌酶,并测定其酶学性质及抑菌作用。在4℃下将海参肠打浆,用Tris-HCl缓冲液抽提。上清液经浊点萃取法（CPE）浓缩、阳离子交换柱（CM52纤维素）层析和SephadexG-75凝胶过滤层析分步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。该酶的比活力达到3026．1U／mg,纯化倍数为18．7,活力回收为46．0％。对纯化的溶菌酶性质研究表明,该酶相对分子质量约为16000,对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH6．5,在45℃以下和pH4．O～8．0都有较好的稳定性,并与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性。与通常从蛋清中提取的溶菌酶相比较,从海参中分离纯化的溶菌酶具有广谱杀菌功能,即对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌细胞壁均有溶解作用。     

碳氮源对植物乳杆菌L69发酵羊奶产ACE抑制肽的影响

通过单因素试验,研究了在羊乳中添加酪蛋白、乳糖、葡萄糖和大豆蛋白胨等物质对LactobacillusPlantarumL69发酵羊奶过程中的酸度、pH、活菌数及产ACE抑制肽的影响,确定了4种物质的最适添加量．结果表明,酪蛋白、乳糖、葡萄糖和大豆蛋白胨的添加量分别为0．2％、0．7％、O．9％、0．5％时,发酵乳中ACE抑制肽的抑制率分别达74．5％、76．36％、89．12％、88．709／6;酸度和pH是呈负相关性,而活菌数和ACE抑制率没有相关性．     

变性与非变性电泳对牛羊乳蛋白质差异比较研究

主要采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS—PAGE）和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Native—PAGE）对新鲜牛羊乳及其酪蛋白清蛋白的区别进行分析检测,对比研究两种电泳方法测定结果的差异,并用两种方法分别检测了掺入不同浓度牛乳的羊乳样品．结果显示SDS—PAGE法对牛羊乳酪白质的分离效果好,该条件下牛羊乳的区别主要是酪蛋白aS2-CN和aS1-CN,而native—PAGE法则是对清蛋白分离效果较好,该条件下的主要区别是牛乳较羊乳多两条伊乳球蛋白．两种电泳方法对掺入不同浓度的羊乳样品的检测阈值均为5％,但native—PAGE效果更明显．     

β-乳球蛋白IgG抗原决定簇的识别

以β-乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β-乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β-乳球蛋白IgG抗原决定簇,探讨牛乳过敏机理．结果表明,β-乳球蛋白IgG抗原决定簇有2条,它们在β-乳球蛋白中的氨基酸序列定位分别为aa22—36和aa127—141．结果表明通过特异性水解抗原决定簇实现牛奶脱敏的方法是可行的．     

Preparation and Characterization of Cyclodextrin Derivatized Ovalbumin Used as Chiral Selector in Pressure Capillary Electrochromatography

Synthesis and properties of β-cyclodextrin derivatized ovalbumin used as chiral selector were investigated.β-cyclodextrin derivatized ovalbumin was synthesized using β-cyclodextrin and ovalbumin in the presence of ethylene glycol diglycidyl ether in boric acid buffer at pH value 8.7 at 37 ℃.Amino group was coated on the internal surface of the silica capillary by sol-gel technology with triethoxylmethylsiloxane and (3-arninopropyl)trimethoxysiloxane.Covalent binding of β-cyclodextrin derivatized ovalbumin was performed by glutaraldehyde.Enantiomers of chlorpheniramine,phenylalanine and atropine were separated by pressure capillary electrochromatography column coated with β-cyclodextrin derivatized ovalbumin.     

应用分子对接方法筛选桑椹红色素微胶囊壁材

基于分子对接方法,对桑椹红色素微胶囊壁材的选择进行研究。采用对接评分和氢键评价候选蛋白质与桑椹红色素主要成分矢车菊素3-O-(6″-O-α-鼠李糖基-β-半乳糖苷)的结合能力,对筛选出的蛋白质,通过实验验证其用作桑椹红色素微胶囊壁材的适宜性。主要结果如下:大豆蛋白（大豆球蛋白和大豆H-2铁蛋白）与矢车菊素3-O-(6″-O-α-鼠李糖基-β-半乳糖苷)的结合能力强于鸡蛋蛋白（未裂解卵清蛋白和S-卵清蛋白）和牛奶蛋白（α-乳清蛋白和β-乳球蛋白）;以大豆分离蛋白与β-环糊精为壁材的微胶囊,桑椹红色素的包埋率随大豆分离蛋白的比例增加而增加;适宜工艺参数为大豆分离蛋白和β-环糊精质量比8∶2、芯材壁材质量比1∶10;按此制备的桑椹红色素微胶囊,在500、250 nm分辨率下的显微图像中具有完整的包合结构,对热、光的稳定性明显提高。分子对接方法在筛选食品与药品原辅料方面具有可行性和应用潜力。     

牦牛κ-酪蛋白新遗传变异体及进化分析

为明确牦牛乳中κ-酪蛋白中遗传多样性,以κ-酪蛋白基因(CSN3)的IV外显子为研究对象,采用PCR-RFLP方法对麦洼牦牛的CSN3进行分析,旨在从分子水平揭示κ-酪蛋白在牦牛乳中遗传多样性分布.并以CSN3的IV外显子序列建立牛属κ-酪蛋白的系统发育树,从而分析进化关系.结果表明,牦牛乳中κ-酪蛋白多数以纯合体形式存在,并发现了一个新的变异体GU441771.牛属CSN3的系统发育树分析表明,κ-酪蛋白在进化上存在一定的物种特异性.     

牦牛乳中DNA提取方法的建立与优化

为加速牦牛重要基因的挖掘和功能鉴定,以牦牛乳作为试验材料,建立简便的牦牛基因组DNA提取方法.采用常规离心法,从牦牛乳中获得体细胞,进而提取基因组DNA.研究不同去除蛋白方法、不同DNA沉淀剂、不同贮藏条件对牦牛乳中DNA提取质量的影响.DNA质量通过PCR评价.结果表明:高盐法与酚/氯仿法去除蛋白效果相当.高盐法简便...     

Separation and purification of proteinases from Gastric Mucosa of Northern Sheatfish,Silurus soldatovi

The separation and purification method for pepsin of Northern Sheatfish (Silurus soldatovi) was established by using the combination technology of salting-out,gel chromatography and gel electrophoresis,and the enzymic properties were also analyzed.The experimental results indicated that 28% and 56% (NH4)2SO4 saturation could separate the activated protease from the pepsin extract of gastric mucosa of Sheatfish (Silurus soldatovi) ;compared with the homogenate extraction,the pepsin specific activity of purified extraction by Sephadex G-75 gel chromatography system increased 598 fold,was 5 times higher than that of activated liquid,and the total production rate was 10.1%.The purified pepsin liquor at the conditions of pH3.3 0.01 M alanine-formic acid buffering solution,60 cm chromatography column,and the flowing rate of 0.8 ML/min was analyzed by SDS-PAGE,which indicated that there were two bands and the molecular weight was 34.0 kDa and 40.4 kDa,respectively.There were two peaks in the enzyme activity determination of the separated collecting liquor in gel chromatography,and the SDS-PAGE showed the concentrations of the two proteins was different,which indicated that it existed at least two pepsins in the gastric mucosa of Sheatfish (Silurus soldatovi).     

单糖基白头翁皂苷的分离纯化

用柱层析法在氯仿和甲醇液中对白头翁皂苷酶解产物进行分离纯化,得到1种单糖基皂苷和皂苷元。经薄层层析和高效液相色谱检测确定:单糖基皂苷为3-O-α-L-阿拉伯糖-3β,23-二烃基-Δ20(29)-羽扇豆烯-28-酸,其得率为5.1%。高效液相色谱检测结果显示所得纯品纯度可达95%以上。