黑曲霉抗产毒黄曲霉作用的初步研究

采用90 × 2.6 × 1013N+/cm2 注入黑曲霉筛选能抗黄曲霉(Aflavus)生长的突变菌株,以利发酵中控制被黄曲霉污染的原材料的再污染。进行产毒黄曲霉与被离子注入的黑曲霉混合对峙、原黑曲霉菌株与黄曲霉单独培养生长及混合对峙培养实验。结果显示经离子注入的菌株及未注入菌株均对黄曲霉产生抑制作用,但后者仅有微弱抑制,前者不仅表现出几乎不能使黄曲霉生长,且已长出的黄曲霉菌丝体较瘦小,并呈灰白色。从培养基中提取物检验结果显示,黄曲霉组表现出有较明显的荧光反应,而黑曲霉菌株对峙培养物提取物中有微弱的荧光反应,其黑曲霉突变株对峙培养物未见荧光反应检出。这表明黑曲霉原菌株虽然能对黄曲霉只有微弱抑制,但表现出黄曲霉产毒和合成色素能力下降。与对照组相比,突变株有较强抑制黄曲霉生长能力。     

一株黄曲霉拮抗细菌的分离筛选及鉴定

通过稀释分离法从土壤中分离纯化出一株具有黄曲霉拮抗活性的菌株。该菌株的次生代谢产物具有抑制黄曲霉生长的效果,抑菌率可达63%。该菌对多种病原真菌抑制效果明显,具有广谱抑菌效果。根据形态学观察、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

花生黄曲霉毒素污染拮抗菌B25-5的筛选、鉴定及控制效果

黄曲霉毒素是花生中重要的污染物,对人畜的健康具有极强的危害性。本研究筛选对黄曲霉毒素污染具有较强抑制作用的有益微生物,为花生中黄曲霉毒素污染治理提供支持。本研究从河北省滦南县、滦县、玉田、丰南等主产区县的花生中分离有益微生物,通过室内外实验,获得对产毒黄曲霉较强拮抗菌株B25-5。经分子生物学及理化性鉴定,该菌株为解淀粉芽孢杆菌。进一步开展了B25-5对黄曲霉孢子萌发的抑制作用、黄曲霉毒素的消减作用及黄曲霉毒素的分解作用等几个方面的研究,结果表明,拮抗菌可以显著的抑制产毒黄曲霉孢子的萌发、生长、菌丝的生长,降低黄曲霉毒素的产生及消除黄曲霉毒素。     

黄曲霉菌株的分离、鉴定及产毒能力分析

对几株从发霉粮食中分离出的黄曲霉菌菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并进行发酵培养和产毒能力的HPLC测定。结果表明:试验分离菌株均为黄曲霉菌株且含有黄曲霉毒素产生的关键基因aflR;黄曲霉菌株之间产毒能力差异巨大:黄曲霉菌株3.4408产毒量最高,黄曲霉菌株HDWS产毒量最低,黄曲霉菌株3.2572甚至不产生黄曲霉毒素;产生黄曲霉毒素菌株中部分黄曲霉菌株产生4种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2,黄曲霉菌株HDWH只产生黄曲霉毒素AFB1、AFB2。     

黄曲霉菌株的筛选和产毒能力鉴定

本研究从发霉粮食中分离出数株黄曲霉菌菌株,并进行了形态学和分子生物学鉴定。为了探究分离菌株与黄曲霉标准菌株之间产毒能力的差异,通过对分离菌株和黄曲霉标准菌株进行发酵培养和HPLC测定,分析确定产毒能力。结果表明黄曲霉菌株之间产毒能力差异巨大：黄曲霉菌株3.4408产毒量很高,黄曲霉菌株HDWH产毒量很低,黄曲霉菌株3.2572甚至不产生黄曲霉毒素;产生黄曲霉毒素菌株中部分黄曲霉菌株产生四种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2,黄曲霉菌株HDWS只产生黄曲霉毒素AFB1、AFB2。     

藏曲高产糖化酶霉菌的筛选及其产酶条件优化

从藏曲中筛选得到糖化酶活力较高的HJ-63菌株,菌种鉴定为黄曲霉,经检验该菌株不产黄曲霉毒素.对其进行耐受性(温度、pH、酒精度)测试和麸曲制作最佳产酶条件探究.结果表明:该菌株在27～36℃、pH 4.5～6.5、酒精度0～8％vol均能较好生长;麸曲制作的最佳条件为温度31℃、接种量2.5％、水分55 g/100 ...     

一株黄曲霉拮抗细菌F1的筛选、鉴定及其抑菌特性

为获得能有效抑制食品原料中黄曲霉生长的生防细菌,本研究以乳酸菌发酵制品和香辛料为筛菌出发样品,通过菌株分离、初筛和复筛,从黑胡椒中筛选到一株对黄曲霉有强烈抑制作用的菌株F1。依据菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征结合16S rDNA基因序列分析、系统发育树构建来鉴定菌株,最终确定菌株F1为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(保藏编号:CGMCC No.10942),与已商品化的生防菌Bacillus amyloliquefaciens FZB42的亲缘关系最为接近。菌株F1的发酵上清液经过超滤处理以及蛋白酶酶解试验和稳定性试验,结果显示,菌株F1的抑菌成分为分子量30 ku~100 ku的蛋白类物质;在100℃处理30 min后仍能保持87.43%的抑菌活性;在pH值3.0~10.0范围内其相对抗菌活性均在70%以上。研究表明,从黑胡椒中分离到的解淀粉芽孢杆菌F1能够通过代谢产生稳定性较强的抗菌蛋白而达到拮抗黄曲霉的目的,在食品领域具有一定的应用前景。     

一株防治花生采后黄曲霉污染的拮抗菌的筛选及其防控效果

为预防花生储藏过程中的黄曲霉污染,从农田土中分离出2株拮抗芽孢杆菌,通过平板对峙法优选出1株作为研究对象,研究其对黄曲霉的抑制效果及对花生采后黄曲霉污染的防控效果。采用平板对峙法检测拮抗菌的抑菌广谱性并绘制生长曲线,并通过生理生化实验、形态特征观察及16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定。结果表明：优选出拮抗菌B419作为研究对象,其可有效抑制黄曲霉的生长,在拮抗菌浓度为1.0×10⁶ CFU/mL,黄曲霉孢子浓度为1.0×10³ CFU/mL时,黄曲霉孢子萌发抑制率达到98%;相比拮抗菌无菌发酵滤液和拮抗菌细胞悬浮液,拮抗菌发酵液防治花生黄曲霉污染效果最好;该菌株对互隔交链孢霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢等多种霉菌都有抑制作用,对大肠杆菌、酵母菌也有抑制作用;该菌株在培养4 h后进入对数期,14 h达到最大,26 h后进入衰亡期;该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。综上,分离的拮抗菌B419对多种微生物都有抑制作用,不仅可以用来预防花生储藏过程中的真菌污染,在防治植物微生物病害方面也具有良好的应用潜力。     

UV—1229制酱油新菌株通过鉴定

青岛市酿造公司第一酿造厂以青岛1号酱油菌种为母株,采用生产育种及物理诱变等手段,于1982年12月29日筛选得到诱变新菌株UV—1229。新菌株经近三年的大型试验,具有性能稳定,效果好等特点,最近正式通过鉴定。参加鉴定的专家认为UV—1229新菌株,很有开发价值: 1.新菌株UV—1229经初步鉴定属黄曲霉。该菌株经商业部食品酿造研究所、山东省进出口商品检验局检测,新菌株不产生黄曲霉毒素,可用于酱油生产。2.新菌株UV—1229酶系较全,酶活较高,     

枯草芽孢杆菌及其杆菌霉素D对黄曲霉毒素作用机制的研究进展

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)被认为是一种有效抑制黄曲霉并降解其毒素的菌种。己从不同的枯草芽孢杆菌菌株中分离得到具有抑制黄曲霉毒素的杆菌霉素D。杆菌霉素D属于伊枯草菌素家族,是枯草芽孢杆菌抑制黄曲霉毒素最强抗生素,也是目前唯一从枯草芽孢杆菌菌株中得到并且已经鉴定的具有抗黄曲霉活性的物质。笔者对枯草芽孢杆菌及其杆菌霉素D的结构、性质、抑制黄曲霉机制进行了综述。     

布氏乳杆菌细菌素BSX01对金黄色葡萄球菌及其生物被膜形成的影响

为评估布氏乳杆菌所产细菌素在食品工业中的应用潜力，通过培养布氏乳杆菌获得具有抑制金黄色葡萄球菌的抑菌活性物质，经纯化后鉴定其相对分子质量大小与抑菌特性，并对抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成进行探讨。结果发现，布氏乳杆菌在37 ℃ MRS培养基中培养至20 h后进入稳定期，在26 h时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达峰值，为（26.36±0.86） mm。 通过АKTA pure系统串联Superdex 30 Increase纯化后，鉴定得到抑菌活性物质（BSX01）的相对分子质量为773.56，对多种蛋白酶敏感，推测为Ⅰ类细菌素。在pH 10(2 h)和121 ℃(30 min)处理后，BSX01仍具有较好的抑菌活性，最小抑菌质量浓度（MIC）仅为12.50 μg/mL。此外，BSX01在1/2 MIC时可有效降低金黄色葡萄球菌生物被膜的形成，在2 MIC时能够完全抑制生物被膜的形成。基于上述结果，布氏乳杆菌产生的细菌素BSX01是食品工业中的潜在生物防腐剂和抑制食源性致病菌生物被膜形成的有效候选品。     

灵杆菌胞外核酸酶在短短芽孢杆菌中的高效表达

利用短短芽孢杆菌（Brevibacillus choshinensis）原核表达系统对灵杆菌胞外核酸酶（Serratia marcescens non-specific nuclease,SMNE）进行重组表达,以期获得高产量重组SMNE。利用大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体构建SMNE重组质粒,实现其在B. choshinensis HD31-SP3菌株中的表达。通过粗酶活检测验证其活性后,首先对温度、甘油和发酵时长等发酵条件进行优化,随后将获得的重组SMNE经亲和层析、凝胶阻滞层析分离纯化后进行酶活性质表征检测。经B. choshinensis HD31-SP3菌株重组表达的SMNE,初测胞外酶活为4.07×10⁶ U/L。经发酵条件的优化测试,最终在培养基中加入终体积分数5%甘油,于30 ℃下摇瓶培养56 h,获得的发酵上清胞外酶活可达2.6×10⁷ U/L,是未优化条件的6倍;经蛋白质纯化条件筛选,最终经一步亲和纯化后SMNE回收产量即达30~40 mg/dL,比活力为1.3×107 U/mg,为商业化对照的2~3倍。通过对该酶的酶学性质鉴定后发现：该酶最适反应条件为37~45 ℃,pH 8~9;在不存在Mg²⁺/Mn²⁺的情况下仍保持47%的活性,且在300 mmol/L Na+/K+条件下可保持35%~45%的活性。     

玛咖复合黄精和桔梗调节糖脂代谢作用的研究

旨在探讨玛咖、黄精和桔梗3种原料的水提物复方,在细胞水平对调节糖脂代谢的作用。用超声波辅助法分别提取玛咖、黄精和桔梗的水溶性成分,得到玛咖（maca）水提物,将黄精（HJ）水提物和桔梗（JG）水提物按质量比为1∶1的比例混合得到黄精-桔梗（HJJG）水提物。采用游离脂肪酸、果糖和葡萄糖诱导人肝癌细胞株（HepG2）细胞,建立糖脂代谢紊乱模型。以二甲双胍作为阳性对照组,分别评价质量浓度为0.25、0.5、1 mg/mL的maca水提物、HJJG水提物以及两者复配物对模型细胞的影响。测定的指标包括模型细胞的葡萄糖吸收量、细胞内糖原、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）的含量以及细胞内活性氧自由基（ROS）的水平。结果表明,玛咖和黄精-桔梗复配后能够通过促进糖吸收和细胞内糖原合成,以及降低细胞内TC含量和ROS水平P＜0.05）,调节模型组HepG2细胞糖脂代谢,其中质量浓度为1 mg/mL的玛咖和1 mg/mL HJJG（1∶1,体积比）复配后改善效果较优。     

云南不同品种大叶种茶树生化成分季节变化特征分析

探讨品种及季节对云南大叶种茶树生化成分的影响,为茶树种植品种及茶叶加工采摘季节的选择提供一定理论依据.采用云南大叶种云抗10号、云抗14号、雪芽100号、佛香2号和紫娟共5个品种为供试材料,在春、夏和秋三季,分别取其新梢的一芽二叶进行蒸青固样,分析不同季节5个茶树品种主要生化成分(水分、水浸出物、茶多酚、儿茶素组分、氨...     

枸杞多糖体外调节人体肠道菌群的功能研究

为研究枸杞多糖(LBP)对人体肠道菌群结构和代谢产物的影响,对6名健康人的粪便提取物进行单独样本与混合样本的体外模拟厌氧发酵,利用16S rRNA基因高通量测序技术对发酵后肠道菌群进行结构和功能分析,并利用超高效液相色谱(UPLC)检测发酵液中的短链脂肪酸(SCFAs)浓度。结果表明,LBP能够明显改变人体肠道菌群结构与功能,提高肠道菌群中益生菌乳酸杆菌属与双歧杆菌属的丰度,并促进了SCFAs的产生。因此,LBP能够显著影响人体肠道菌群结构与功能。     

枸杞酸奶体外抗氧化活性和保肝功能研究

采用枸杞原浆作为添加到酸奶中的功能成分,探索枸杞酸奶的抗氧化活性和保肝功能.在体外抗氧化活性实验中,采用了铁氰化钾法、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法和水杨酸法.结果表明在枸杞原浆添加一定体积分数范围内,枸杞酸奶总抗氧化还原能力、DPPH自由基清除...     

16S与gyrB基因联合建树快速鉴定一株蜡样芽孢杆菌

开发一种可用于保守序列相似度较高的菌群快速鉴定的方法,并用其鉴定一株从土壤采集的芽孢杆菌。从厦门市同安国家农业科技园区施用动物肥的种植区采集土壤,稀释涂布平板,分离纯化菌株后,扩增16S与gyrB基因序列并测序,在Genbank选择序列相似的ATCC菌株进行比对,将16S序列与gyrB序列线性拼接后,利用Paup* 4.0构建进化树,通过生理生化实验对鉴定结果进行验证。在16S序列与gyrB基因序列单独建树均无法鉴定到种的情况下,通过16S与gyrB碱基线性拼接序列联合建树,将土壤中分离得到的芽孢杆菌HX2016002鉴定为蜡样芽孢杆菌,该方法所构建的进化树自展值高,鉴定结果与生理生化实验一致。对Genbank中已知的蜡样芽孢杆菌序列建树分析表明,该方法在蜡样芽孢杆菌中具有普适性。利用16S与gyrB基因拼接序列联合建树,在保守序列相似度高的属内菌种鉴定中具有进一步研究的价值。     

枯草芽孢杆菌产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的发酵优化

D--阿洛酮糖是D--果糖在C-3位的差向异构体,由于较低的热量和与蔗糖相似的甜度,D-阿洛酮糖成为一个具有发展前景的功能性甜味剂。D--阿洛酮糖 3-差向异构酶（D--psicose 3-epimerase,EC 5.1.3.30,DPEase）能够催化D--果糖生产D--阿洛酮糖,这种生物酶法制备的功能性甜味剂D--阿洛酮糖由于简单的纯化步骤和高产物浓度等优点受到关注。该研究对1株前期构建的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 1A751/pUB-P43dpe-dal产DPEase进行了3 L发酵罐水平培养,通过优化溶解氧（DO）、pH、温度、初始碳源质量浓度确定最适发酵条件为：DO为30%、pH 6.0、温度37 ℃、初始葡萄糖质量浓度15 g/L,最高发酵酶活达78.3 U/mL。在此基础上进行补料发酵优化,得到最适补料条件为：在发酵5 h进行补料,碳源补料速率8.0 g/（L·h）,在此条件下,发酵9 h全细胞酶活高达123.0 U/mL。此发酵策略为扩大工业化生产提供了参考。     

耐盐性谷氨酰胺酶在Bacillus subtilis 168中的整合表达

微生物质粒过表达外源基因,会由于质粒分离稳定性低、种子培养基中需添加抗生素等原因,限制其在工业生产中的应用。为了得到一株可用于工业生产谷氨酰胺酶的菌株,选择食品安全级Bacillus subtilis 168作为宿主,将来源于Micrococcus luteus K-3的编码耐高浓度盐的谷氨酰胺酶基因(Mglu)插入到其染色体上进行整合表达。选择了2个内源性蛋白酶基因作为整合表达位点,通过lox序列的重组消除抗性基因,得到无抗性基因的重组谷氨酰胺酶表达菌株。遗传稳定性研究表明,在不添加抗生素的条件下,通过连续传代重组菌株并测定发酵酶活,发现重组菌株连续传42代时,酶活基本不变。随后,采用5 L发酵罐对重组菌株进行分批补料发酵,最高酶活达到了41.5 U/mL。本研究对提高谷氨酰胺酶重组菌株遗传稳定性提供了借鉴。     

三孢布拉霉遗传转化体系的构建及应用

为解决三孢布拉霉转化过程中原生质体转化率低、孢子细胞壁厚难以导入外源载体等问题,本研究中构建了根癌农杆菌侵染原生质体的转化体系,同时克隆了与非同源末端连接修复途径相关的ku80基因,并将该转化体系应用于ku80的敲除中。将ku80基因敲除框插入双元载体pDHt-sk上构建了重组敲除载体pDH-85H3,通过化学转化法将敲除载体pDH-85H3导入根癌农杆菌LBA4404,并基于农杆菌介导法转化三孢布拉霉原生质体。结果表明,经潮霉素筛选和PCR鉴定,得到的20株转化子中,有18株的基因组插入了敲除框,转化率达90%。经鉴定有2株转化子发生了同源重组,敲除率为10%。该结论表明了根癌农杆菌介导三孢布拉霉原生质体转化技术的可行性。