乳酸菌发酵核桃粕制备多肽及其体外抗氧化活性

以核桃粕为原料,乳酸菌作为发酵菌种,通过发酵制备核桃粕多肽并对其抗氧化活性进行研究。首先对发酵时间、发酵温度、接种量3个因素进行单因素试验,在单因素试验的基础上进行响应面优化,得到最佳发酵工艺条件,通过体外抗氧化试验测定多肽的抗氧化能力。结果表明：影响试验的因素大小顺序为接种量>发酵温度>发酵时间。核桃粕多肽产量制备的最佳工艺条件：发酵时间12h,发酵温度37℃,接种量13%,在此条件下,多肽产量达到12.84mg/g,与预测值差异不大,证明该优化工艺可靠,按照优化工艺制备所得核桃粕多肽在质量浓度为10 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达82%,具有较强的还原能力。     

固态发酵核桃粕制备活性肽及其抗氧化活性的研究

为高效利用核桃粕,本研究以核桃粕为原料,采用黑曲霉固态发酵制备活性肽.考察接种量、发酵时间、发酵温度和培养基含水比例对多肽得率的影响,通过响应面实验确定最优发酵工艺条件为:接种量5.5％,发酵温度33.50℃,培养基含水比例1.00mL/g,发酵时间84h.经验证实验可知,在最优发酵条件下核桃活性肽得率可达35.68％,比优化前提高了26.7％.该活性肽具有较强的体外抗氧化活性,DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC50分别为0.15、1.75、2.4mg/mL.由此得出核桃粕是一种良好的活性肽生产原料,且该活性肽是理想的天然抗氧化产品.     

酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的研究

利用木瓜蛋白酶酶解核桃分离蛋白制备小分子活性肽,并研究了不同分子量段核桃小分子肽的抗氧化性能。通过单因素实验和正交实验,确定了木瓜蛋白酶制备抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH8.5,温度50℃,酶与底物浓度之比[E]/[S]=3:100,底物浓度[S]=3.5g/100mL,酶解时间5h。用截留分子量分别为3kDa和10kDa的超滤膜将核桃粗肽液分离成<3kDa、3～10kDa及>10kDa3个分子量段,并对不同分子量段核桃多肽的抗氧化性进行了研究,结果表明,分子量<3kDa的核桃多肽的抗氧化性大于其他两个分子量段。     

不同微生物液态发酵对蚕豆蛋白营养价值及功能特性的影响

该试验采用3种菌种(植物乳杆菌、黑曲霉、枯草芽孢杆菌)对脱脂蚕豆粉进行液态发酵,以蚕豆粉发酵前后的粗蛋白、酸溶蛋白、蛋白酶活力、氨基酸含量、持水性、持油性、起泡性等作为考察指标,对各菌种液态发酵蚕豆粉的营养价值及功能特性进行综合性评价。结果表明,经不同微生物液态发酵后,蚕豆粉多肽得率、酸溶蛋白、氨基酸含量均明显增加,经植物乳杆菌发酵后,多肽得率达到1. 46%,与未处理的蚕豆粉相比,其增幅高达71. 65%,效果极其明显;此外,经发酵后其多肽上清液抗氧化活性显著提升,在蛋白质量浓度为168μg/mL时,植物乳杆菌对DPPH的清除率达85. 46%,黑曲霉对ABTS自由基的清除率达87. 89%,经微生物液态发酵后蚕豆的营养价值得以大幅度提升; 3种菌种液态发酵有助于改善蚕豆蛋白的功能特性,植物乳杆菌的作用效果较优。     

木瓜蛋白酶水解核桃粕制备抗氧化活性多肽的研究

利用木瓜蛋白酶水解核桃粕,得到核桃多肽。采用Box-Behnken中心组合分析优化水解条件,以羟基自由基和超氧阴离子自由基清除率为响应值,得到最优水解条件为:pH值6、温度50℃、酶解时间3h、底物浓度3%。在此条件下,核桃多肽对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为32.7%和24.6%。结果表明,木瓜蛋白酶水解核桃粕得到的核桃多肽具有一定的抗氧化活性;并且与VC做对比,其还原能力是VC的37.9%。     

发酵剂对发酵香肠蛋白质降解及多肽抗氧化能力的影响

以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CD101和模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)NJ201作为混合发酵剂制作发酵香肠,以自然发酵为对照。通过测定理化指标、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)、多肽含量、游离氨基酸含量等指标研究混合发酵剂对发酵香肠蛋白质降解情况,并以体外1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除活性及铁离子还原/抗氧化能力(ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)值评价发酵香肠粗肽及小分子多肽(3 kDa)的抗氧化能力。结果表明:混合发酵剂接种组非蛋白氮含量显著高于对照组(P0.05);根据SDS-PAGE结果分析,2组发酵香肠的肌浆蛋白和肌原纤维蛋白均发生降解,接种组的蛋白降解程度高于对照组,尤其是在低分子质量(20 kDa)条带处出现明显累积;接种组粗肽及小分子多肽的DPPH自由基清除活性、ABTS阳离子自由基清除活性及FRAP值均显著高于对照组(P0.05),其中小分子多肽可能是发酵香肠多肽抗氧化能力的主要贡献者;同时发酵剂促进发酵香肠中游离氨基酸的释放。接种该混合发酵剂制作发酵香肠能促进蛋白质降解,得到更多具有抗氧化活性的多肽,从而有助于通过内源性抗氧化肽抑制发酵香肠的氧化,降低生产成本,延长货架期。     

干酪乳杆菌发酵芡实上清液的活性成分及抗氧化活性分析

以芡实为原料,研究干酪乳杆菌发酵过程中上清液中活性成分及抗氧化活性的变化。通过干酪乳杆菌发酵芡实,对其发酵过程中上清液的pH、可滴定酸、多肽产率、多肽分子量分布、游离氨基酸组成、总酚、总黄酮及抗氧化活性的变化进行了研究,并分析各组分与抗氧化活性的相关性。结果表明,在发酵过程中pH呈降低趋势,而可滴定酸含量逐渐升高,在发酵48 h后分别达到3.97±0.02和2.53±0.04 mL/g;多肽产率呈上升趋势,在发酵结束时达到19.09%±0.42%,其中500～180和<180 Da的低分子量多肽比例显著增加（P<0.05）;游离氨基酸总量在发酵过程中增加了5.62倍;总酚和总黄酮的含量持续显著增加（P<0.05）,在发酵结束时分别达到18.00±0.20和10.99±0.14 μg/g;发酵芡实上清液的DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和亚铁离子螯合能力在发酵结束时均显著提高（P<0.05）,可滴定酸、多肽产率、总游离氨基酸含量、总黄酮和总酚含量与抗氧化活性具有极显著（P<0.01）正相关关系。综上,干酪乳杆菌发酵可以促进芡实抗氧化活性物质的释放,提高其发酵上清液的抗氧化活性,可以为芡实产品的开发提供参考。     

菌酶联合制备猪血抗氧化低聚肽

以猪血为原料,依次采用枯草芽孢杆菌发酵和碱性蛋白酶水解制备猪血抗氧化低聚肽,通过响应面试验优化发酵工艺和酶解工艺,最佳发酵参数为:底物浓度59.0 g/L、发酵时间56.5 h、接种量3.22∶100(体积比),此时多肽含量为2.31 mg/mL,·OH清除率为78.94%;最佳酶解参数为:酶解时间3.0 h、pH 9.5、酶解温度60℃、酶底比390 U/g,此条件下制备得到酶解液的多肽含量5.48 mg/mL,多肽含量较单一发酵提高2.39倍,·OH清除率为93.62%。采用超滤分离法,获得分子量分别为0~1 kDa、1 k Da~5 kDa和0~5 kDa的猪血抗氧化低聚肽,采用7种体外抗氧化指标(·OH清除率、·O~(2-)清除率,抑制脂质过氧化能力、还原力、ABTS~+·清除率、DPPH·清除率、总抗氧化力)评价3种不同分子量段的猪血低聚肽的抗氧化活性,结果表明:3种不同分子量段抗氧化肽活性大小为0~1 kDa0~5 kDa1 kDa~5 kDa,提示高抗氧化活性的猪血低聚肽的分子量集中在1 kDa以下。     

冷榨核桃粕液态发酵制备核桃多肽

探讨以冷榨核桃粕为主要原料,采用纳豆芽孢杆菌进行液态发酵制备核桃多肽的方法。分析发酵时间、底物质量浓度、起始pH值、接种量及发酵温度对核桃多肽产量和水解度的影响,并通过单因素试验和Box-Behnken响应面分析法对工艺参数进行优化,得到的最优工艺参数为：发酵时间84 h、底物质量浓度8 g/100 mL、起始pH 8.0、接种量11%、发酵温度33 ℃。此发酵条件下核桃多肽质量浓度和水解度均达到最大值,分别为2.58 mg/mL和37.5%。     

枯草芽孢杆菌和黑曲霉固态发酵制备核桃多肽的工艺条件优化

本研究以核桃粕为原料,对比探究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 10160)、黑曲霉(GIM3.452)两株菌固态发酵制备核桃粕多肽的发酵生产性能,优化了两株菌发酵条件,筛选得到了最优的发酵条件参数。首先对影响固态发酵过程中多肽产量的主要因素(发酵时间、原料粒径、发酵温度、接种量和料液比)进行了研究,并以多肽产量为评价指标进行单因素逐步优化,研究结果表明,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 10160)固态发酵条件为:发酵时间3 d,原料粒径40目,料液比1:1.25,接种量5%,发酵温度28℃,此条件发酵后核桃粕多肽含量可达243.97 mg/g;黑曲霉固态发酵条件为:发酵时间4 d,原料粒径40目,发酵温度28℃,接种量15%,料液比1:1.25,此条件发酵后核桃粕多肽含量可达158.61 mg/g。通过分子量分布测定,进一步验证了枯草芽孢杆菌固态发酵制备核桃粕多肽产量高于黑曲霉。     

4种富锌乳酸菌抗氧化活性及体外消化稳定性研究

以4种富锌乳酸菌（保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌）为研究对象，进行乳酸菌富锌培养的工艺优化，并测定发酵上清液的抗氧化活性，采用体外模拟消化法分析其消化稳定性和生物利用率。结果表明：富锌乳酸菌最佳加锌时间为接种10h后，锌离子浓度为50μg/mL。富锌培养可提高乳酸菌上清液的抗氧化活性，其中经牡蛎多肽锌培养的乳酸菌上清液自由基（ABTS自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基）清除活性均高于其他富锌乳酸菌的。由牡蛎多肽锌富锌培养的保加利亚乳杆菌胃肠道释放率为（3.46±0.17）%，且生物利用率最高为（29.78±0.37）%。综上，保加利亚乳杆菌是潜在的优势富锌菌株，经牡蛎多肽锌富锌培养的保加利亚乳杆菌具有良好的体外抗氧化活性、胃肠道消化稳定性和生物利用率。     

低分子量核桃多肽抗氧化及抗肿瘤活性研究

研究了核桃发酵多肽的抗氧化效果及抗肿瘤活性。结果表明,此多肽具有一定的抗氧化及抗肿瘤活性,当样品浓度为2 mg/mL时其DPPH自由基清除率为91.7%,对人小肠癌细胞（Caco-2）的IC50值为3.67 mg/mL。对四组分发酵多肽（分子量>30 ku、10 ku~30 ku、5 ku~10 ku及<5 ku）进行抗肿瘤活性的试验及筛选,发现<5 ku组份有较强的抗肿瘤活性,表明低分子量多肽对Caco-2细胞增殖具有较强的抑制作用（IC50值为2.63 mg/mL）,且该样品不仅抑制Caco-2细胞生长,对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖也有显著的抑制作用（IC50值为3.76mg/mL）,而对非肿瘤细胞大鼠小肠隐窝上皮细胞（IEC-6）未显示显著的抑制作用。以上结果表明,核桃粕发酵产生的小分子活性多肽有明显的抗氧化及抗肿瘤活性。     

混菌固态发酵榛仁粕制备降血压肽工艺优化研究

为探索固态发酵榛仁粕制备降血压肽的最佳工艺条件,以蛋白酶活力、水解度和粗多肽得率为指标,从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、米曲霉、酿酒酵母中筛选出3株蛋白酶产量较高的菌株,再将其分别两两组合以ACE抑制率、水解度和粗肽得率为指标进行混菌筛选,通过单因素实验和正交实验,优化降血压肽制备工艺条件。结果表明:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、米曲霉更适合固态发酵榛仁粕制备降血压肽。枯草芽孢杆菌和米曲霉按2:3比例混合,接种量15%,含水量60%,发酵温度40℃,发酵时间72 h,在此条件下所得发酵产物的ACE抑制率、水解度及粗多肽得率分别为45.24%,30.13%和25.53%,ACE抑制率提高了104.61%。     

枯草芽孢杆菌发酵豆渣制备多肽及其活性研究

以纤维素酶酶解后的豆渣为原料,利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液态发酵豆渣制备大豆多肽,并以大豆多肽得率为响应值,通过单因素试验及响应面法对其制备工艺进行优化,并测定其抗氧化活性与抑菌活性。结果表明,枯草芽孢杆菌液态发酵豆渣制备大豆多肽的最优工艺条件为：接种量3%、发酵温度37 ℃、发酵时间60 h。在此优化条件下,大豆多肽得率为88.12%;其对1,1二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力的半效应浓度（EC50）值分别为（2.36±0.05） mg/mL、（2.97±0.03） mg/mL;多肽质量浓度为25 mg/mL时,大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）抑菌圈直径分别为（27.65±0.32） mm、（23.18±0.14） mm。结果表明,大豆多肽具有一定的抗氧化及抑菌活性。     

双菌株联合固态发酵冷榨核桃粕提高产品纳豆激酶活性的研究

为提高纳豆芽孢杆菌单菌发酵品的纳豆激酶(nattokinase,NK)活性并减少产品的不良氨味,采用戴尔凯氏有孢圆酵母、植物乳杆菌分别与纳豆芽孢杆菌联合固态发酵核桃粕。结果表明:纳豆芽孢杆菌与戴尔凯氏有孢圆酵母在接种量3%、菌种配比2∶1、发酵温度34℃、发酵时间60 h的条件下得到的核桃粕发酵品NK活性达2040.82 U/g,提高了70.42%,挥发性盐基氮含量为64.18 mg/100 g,降低了84.37%;纳豆芽孢杆菌与植物乳杆菌在接种量9%、菌种配比1.5∶1、发酵温度42℃、发酵时间60 h的条件下得到的发酵品NK活性为1966.02 U/g,提高了64.18%,挥发性盐基氮含量为62.68 mg/100 g,降低了84.74%。混合菌种发酵品的氨味显著减少,改善了传统发酵品的风味。     

北五味子麦芽酵素的制备及其抗氧化活性

以超氧化物歧化酶（SOD）活力为评价指标,通过单因素试验以及正交试验,对植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）发酵的北五味子麦芽酵素的发酵工艺条件进行优化;并对该酵素产品的抗氧化活性进行了研究。结果表明,植物乳杆菌发酵制备北五味子麦芽酵素的最佳发酵工艺条件为北五味子∶麦芽=2∶1（g∶g）,发酵时间为3 d、接种量为1.5%、发酵温度为41 ℃。在此最佳工艺条件下,北五味子麦芽酵素SOD酶活力为3 464.80 U/mL。抗氧化活性结果表明,该酵素对超氧阴离子自由基清除能力、羟自由基清除能力、DPPH自由基清除能力和对ABTS+自由基清除能力分别达到了26.03%、97.25%、89.10%和0.613 7 mmol/L,表明该酵素具有较好的抗氧化活性。     

核桃粕发酵乳菌种筛选及发酵条件优化研究

该试验对乳酸菌发酵核桃粕乳的不同菌株进行筛选,通过pH值、酸度及感官评定分析,从9株乳酸菌中筛选出嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)两株优良菌种。研究两株乳酸菌的复配比例,并与传统发酵剂发酵的核桃粕乳进行品质对比。结果表明,以嗜酸乳杆菌:植物乳杆菌(1∶1)接种发酵后得到的发酵核桃粕发酵乳综合品质最佳,其感官评分90分,氨基酸态氮含量57.0 mg/L,活菌总数7.35×107 CFU/mL,经发酵后的营养价值明显优于传统发酵剂发酵的核桃粕乳。     

响应面法优化黄浆水发酵液制备工艺及其抗氧化活性研究

采用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)3种乳酸菌对黄浆水进行组合发酵,以发酵液DPPH自由基清除率为评价指标,研究发酵温度、发酵时间、脱脂乳粉添加量、葡萄糖添加量和接种量对发酵液的影响。在单因素试验基础上,采用响应面法优化制备高抗氧化活性黄浆水发酵液的工艺条件。结果表明最佳发酵参数为:接种量1%、发酵温度37℃、发酵时间37.50 h、脱脂乳粉添加量8%、葡萄糖添加量5%。在此条件下制备的黄浆水发酵液DPPH自由基清除率为82.36%。抗氧化活性试验表明:黄浆水发酵液提取物抗氧化能力得到显著提升,其清除DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基的半抑制质量浓度(IC50)分别为2.03 mg/mL、1.12 mg/mL和0.30 mg/mL。     

酶解条件对核桃多肽抗氧化活性的影响

以核桃蛋白粉为原料制备核桃蛋白抗氧化活性肽,分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶对核桃蛋白进行酶解,测定了不同酶作用下的核桃多肽抗氧化活性,确定碱性蛋白酶是酶解核桃蛋白的最适蛋白酶。研究了酶解温度、酶解时间、酶解pH、底物浓度、酶添加量等酶解条件对酶解产物抗氧化活性的影响。结果表明:不同的酶解条件对酶解产物核桃多肽的抗氧化活性有显著影响,最佳酶解条件为:温度50℃,时间120 min,pH8,底物浓度3%,酶添加量3%,在此酶解条件下制得的核桃多肽对羟基自由基和超氧阴离子的清除率分别为53.8%和50.0%,还原能力为51.7%。     

米曲霉发酵鳕鱼皮制取低分子肽条件的优化及活性研究

将鳕鱼皮打浆后利用米曲霉进行液态发酵以制取有较高价值的低分子量多肽,从碳氮比、装液量、底物浓度、转速、碳源、表面活性剂、不同起始pH、接种量8个方面进行了单因子实验。进而采用响应面法(Response Surface Methodology,简称RSM)进一步优化影响发酵的最重要因素:碳氮比、底物浓度、接种量,得到发酵的最优条件,即发酵中碳氮比应控制在0.29,底物浓度为7.0%,接种量为4×107孢子/100 mL,此时发酵水解度可以达到36%,对发酵肽的分子量进行测定,发现分子量1 000 u以下小肽占到71.5%。同时测定了多肽产物的抗氧化能力和降血压活性,其DPPH抑制的IC50值为1.3 mg/mL,其血管紧张素转化酶抑制的IC50值为2.53 mg/mL,因此证明所得发酵肽不仅分子量低,且具有良好的抗氧化能力和降血压活性。