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应用单管半巢式PCR技术筛查转基因食品 总被引:4,自引:0,他引:4
建立转基因作物中常见的两种外源调控元件的单管半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)测方法,为转基因食品的筛选检测提供一种快速、精确的方法。针对6 种转基因作物中CaMV35S启动子和NOS终止子的一致性核苷酸序列,分别设计巢式PCR的内、外引物,在测试不同引物组合的扩增效率基础上,建立CaMV35S启动子和NOS终止子的单管半巢式PCR方法。结果表明,上述方法对两种转基因成分具有良好的特异性,检测灵敏度分别为0.01%和0.05%,显著优于常规PCR方法。该方法具有便捷、准确、灵敏等特点,适合筛查食品中的转基因成分。 相似文献
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PCR方法检测食品中的转基因成分35S和NOS的研究 总被引:10,自引:2,他引:10
根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV358)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特性异好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。 相似文献
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利用PCR技术,对转基因大豆中CaMV35S启动子、NOS终止子、CP4-EPSPS和大豆凝集素基因进行了定性检测,并且以大豆凝集素基因为内置标准检测了CaMV35S启动子。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行分析,并对两种电泳进行了比较。聚丙烯酰胺凝胶电泳有利于提高定性PCR筛选方法的准确性。 相似文献
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豆粕中转基因成分检测技术研究 总被引:3,自引:0,他引:3
针对豆粕中核酸含量低且被严重破坏,DNA难以提出的问题对CTAB法进行优化,有效地从豆粕中提取到可以用于扩增反应的DNA。同时定性检测出外源调控序列CaMV35S启动子和NOS终止子及目的基因Cp4-EPSPS序列,成功建立了豆粕中转基因成分的检测方法。 相似文献
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本文对转基因稻米及其加工食品进行了针对标记基因bar、CaMV35S启动子和Nos终止子DNA序列的PCR检测.结果表明,改良SDS法适于提取转基因稻米以及经过蒸煮、微波膨化加工后稻米食品中的DNA并能够满足PCR检测的需要.食品加工使稻米基因组DNA降解为较小的片段,但不影响PCR检测效果,PCR技术能够检测稻米加工食品中的转基因成分. 相似文献
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为提高对转基因大豆的监督检测能力,研制了转基因大豆DNA检测芯片。根据转基因大豆(Roundup Ready)中所转入的外源基因,选择CaMV35S启动子、NOS终止子、NOSIEPSPE基因和内源Lectin基因设计特异性引物,采用多重PCR法对待测样品进行扩增,通过缺口平移法合成DIGdUTP标记杂交探针,并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时,比较了芯片检测的特异性和重复性,并对检测的灵敏度进行测试。结果表明,该方法具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达0.5%,由于采用了多重PCR技术,一次可同时检测多个基因,提高了检测的准确性和效率。 相似文献
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根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子和NOS终止子的方法 .并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 1 3份样品中有 6份检出3 5S启动子、NOS终止子 ,其余 7份样品的检测结果为阴性 .表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出 3 5S和NOS成分 ,其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点 ,多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确 相似文献
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转基因大豆的PCR-免疫层析筛查方法研究初探 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立转基因大豆的PCR-免疫层析(PCR—ICT)快速筛查新技术。方法利用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的筛查标记,根据其序列设计特异性引物和探针,分剐用生物素和地高辛标记,用胶体金免疫层析技术检测并鉴定PCR产物。结果用新建立的PCR—ICT方法可以检出含0.5%转基因大豆的标准品,对大豆样品的检测结果与琼脂糖凝胶电泳检测结果一致。结论PCR—ICT方法通过DNA杂交和金标显色来同时检测、鉴定PCR产物,可以简便、快速地筛查转基因产品。 相似文献
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目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)技术,建立快速检测转基因大豆的方法。方法:采用以CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3 种外源基因和内源基因Lectin(大豆凝集素基因)为目的片段设计4 对特异引物,建立反应体系,通过HDA方法对内源基因和3 种外源基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对结果进行同源性分析。结果:建立了转基因大豆HDA检测法,检测特异性良好,3 种外源基因的检出限为0.2%。结论:转基因大豆的HDA检测方法具有普通聚合酶链式反应的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。 相似文献
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目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。 相似文献
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PCR法检测大豆加工食品中的转基因成分 总被引:5,自引:1,他引:5
通过分子生物学手段,以聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,建立了检测大豆加工食品中转基因成分的方法。实验分别采用CTAB法和试剂盒(Kit)法对大豆锅巴、豆浆、豆奶粉、豆腐、豆腐丝等五种大豆加工食品中的DNA进行了提取,用内标基因Lectin对此两种方法的提取效果进行了比较,并以提取的DNA为模板,利用不同的引物分别对目标基因35S和NOS进行了PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:Kit法的DNA提取效果优于改良CTAB法,上述五种大豆加工食品中均检测出35S启动子和NOS终止子,且均含有转基因成分。 相似文献
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转基因番茄DNA检测芯片的研究 总被引:4,自引:1,他引:4
自19世纪70年代世界上第一例转基因植物问世以来,它对人类健康及环境的安全性问题,受到了全世界广泛的关注:本研究根据转基因番茄(Zeneea)中所转入的外源基因,选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PG/NOS基因和内源PG基因设计特异性引物,采用多重PCR法对待测样品进行扩增,通过缺口平移法合成DIG—dUTP标记杂交探针,并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时,比较了芯片检测的特异性和重复性,并对检测的灵敏度进行测试。结果表明,该方法具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达0.5%,由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因,提高了检测的;隹确性和效率。 相似文献