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两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明:室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。 相似文献
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《食品工业科技》2015,(11)
采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对大豆中脂肪氧合酶进行分离萃取研究;通过综合考察酶分配系数、相比和回收率,探讨了(NH4)2SO4、PEG2000、Na Cl浓度以及p H对脂肪氧合酶萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,结果表明在单一因素下的最佳工艺条件为:(NH4)2SO415%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、Na Cl 1%(wt%)、p H5.8;正交实验优选出的最佳工艺条件为:(NH4)2SO417%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、p H5.2,可获得酶的分配系数最高可达9.710,萃取率为87.6%。 相似文献
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为提高黑曲霉C2J6发酵液中脂肪酶的分离纯化效率,采用PEG2000/(NH_4)_2SO_4双水相法进行萃取。探讨PEG2000质量浓度、(NH_4)_2SO_4质量浓度、p H、Na Cl质量浓度对脂肪酶萃取的影响,利用Box-Behnken响应面法优化萃取条件。结果表明:在PEG2000质量浓度35%、(NH_4)_2SO_4质量浓度21.60%、p H 6.90的条件下,脂肪酶萃取率高达85.92%,酶活力47.53 U/mL,比粗酶活力提高了3.02倍。此法简捷、高效,为黑曲霉脂肪酶的进一步纯化奠定基础。 相似文献
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《食品工业科技》2015,(14)
目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。 相似文献
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对PEG/(NH4)2SO4双水相提取果胶酶进行了研究,考察了PEG分子量、pH值、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等对果胶酶分配系数的影响,结果表明,双水相最佳提取条件为PEG1000 27%,(NH42)SO4 19%,NaCl 0.002%,pH 5.0,温度50℃,在此条件下果胶酶分配系数(K)可达14.0。 相似文献
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双水相体系萃取粗状假丝酵母脂肪酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过比较不同无机盐与PEG组成双水相体系对粗状假丝酵母脂肪酶的萃取效果,系统地研究了脂肪酶在PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配行为,考察了PEG:分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度和体系pH对脂肪酶分配系数和萃取率的影响,并通过响应面分析法进一步优化了萃取条件.结果表明最佳萃取条件为:PEG2000浓度18.3%,(NH_4)_2SO_4浓度17.4%,pH8.0,室温条件下其分配系数可达到13.3,纯化倍数达到1.53,萃取率达到92.2%. 相似文献
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采用Plackett-Burman (PB)试验、最陡爬坡试验、响应面设计法对双水相萃取分离葡萄籽多糖的条件进行优化.首先,采用Plackett-Burman设计从影响萃取率的5因素中筛选出PEG质量分数、硫酸铵质量分数和萃取温度3个显著影响因素.在此基础上,通过最陡爬坡试验逼近最大萃取率区域,然后通过响应面组合试验对显著因素进行优化.得到最佳萃取条件为:PEG2000质量分数为8.92%、(NH4)2SO4质量分数为16.41%、萃取温度为38℃,萃取率可达55.1%,与预测值56.075%接近. 相似文献
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PEG/(NH4)2SO4双水相萃取法提取果胶酶的研究 总被引:2,自引:1,他引:2
对PEG(聚乙二醇)/(NH4)2SO4。双水相提取果胶酶进行了研究,考察了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响,结果表明:双水相最佳提取条件为PEG 100027%,(NH4)2SO419%,Na-Cl0.002%,pH5.0,温度50℃,在此条件果胶酶分配系数可达到14.0。 相似文献
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研究超声辅助正丙醇(NPA)/(NH4)2SO4双水相技术对雪菊色素的粗提工艺。以(NH4)2SO4质量分数、NPA质量分数、雪菊粉末用量、超声温度、时间及p H为考察因子,以总黄酮为指标,选择差示分光光度法测定粗提物中色素含量,并以单因素试验为基础设计正交试验优化提取工艺,发现雪菊色素主要集中于上相。在最佳水平,建立20.0 g ATPS,(NH4)2SO4质量分数29%、NPA质量分数23%,雪菊粉末用量0.08 g,调pH3,温度60℃下超声提取60 min;雪菊色素得率240.1469 mg/g,RSD为4.414%。与传统提取法相比,超声辅助NPA/(NH4)2SO4双水相粗提雪菊色素时间短、温度低、效率较高,可以实现雪菊色素粗提物的提取分离,且差示分光光度法用于雪菊色素的检测可信度较高,为雪菊色素粗提工艺提供一种新途径。 相似文献
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采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)-(NH4)2SO4双水相体系,分离铜诱导的诱变酿酒酵母菌所表达的金属硫蛋白。以PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数及pH值为考察因素,萃取率为响应值,结合Design-Expert 8.0.6软件做响应面优化分析,优化到最佳萃取条件:PEG相对分子质量2 000、PEG和(NH4)2SO4质量分数分别为22.5%和17.46%、pH 5.98。获取的金属硫蛋白主要分布在上相,萃取率可达81.69%。此方法操作简单、高效、成本低,是酵母源金属硫蛋白分离提纯的新方法。 相似文献