鲢鱼蛋白水解物的双酶法制备工艺优化

利用双酶法(Alcalase碱性蛋白酶与Flavourzyme复合风味蛋白酶)制备鲢鱼蛋白水解物,应用响应面分析法对酶水解工艺优化,最佳酶解条件为底物浓度为料水比1∶2,Alcalase碱性蛋白酶用量为0.4%,Flavourzyme复合风味蛋白酶用量为0.8%,水解温度60℃,水解pH值6.5,水解时间4h,此条件下水解度为65.2%。     

环文蛤肉复合酶的水解工艺初探

以环文蛤为原料,采用酶水解的方法制备环文蛤肉水解液。先选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶,分别对环文蛤肉进行单酶水解实验;并用复合酶解新技术对环文蛤肉进行水解研究。实验结果表明:3种酶复合水解的最佳工艺为:在料水比1:8(m/v)、pH7.0、50℃条件下,用中性蛋白酶6000U/g原料先水解4h,再依次使用碱性蛋白酶4000U/g、菠萝蛋白酶12500U/g连续水解4h后水解度达到43.27%。复合酶解液中游离氨基酸含量丰富,约为117.89μg/mL,其中必需氨基酸占51.39%。环文蛤肉经复合蛋白酶水解,适当调配可制作营养丰富、海鲜风味浓郁、具有一定保健功能的口服液。     

虾下脚料制备虾味香料的酶解工艺技术研究

文章以对虾下脚料为原料,利用生物酶解技术对对虾下脚料进行处理,以提高其风味物质的含量。通过试验得出:风味蛋白酶和中性蛋白酶的复合处理对对虾下脚料蛋白的酶解效果最好,同时得出该复合酶解作用的最佳条件为:pH7.0,料水比1:2,反应温度45℃,同时分别加入3%中性蛋白酶和风味蛋白酶,反应3h,此时水解度达到23%,酶解液中虾风味较浓郁,可以作为一种虾味香料的调味剂。     

凡纳滨对虾虾头协同水解工艺的响应面优化

利用风味蛋白酶协同虾头内源酶水解凡纳滨对虾虾头,制备水解度高、苦味值低的新型虾风味食品基料.以苦味感官为指标,采用响应面法研究pH、温度、底物浓度对产物水解度和苦味的影响.在pH值6.92,温度52.5 ℃,底物浓度为22.25 g/100 mL的条件下,每克虾头添加144 U风味蛋白酶水解3 h,与自溶水解液相比,水解度增加了6.4%,苦味值降低了48.5%,游离氨基酸总量增加了16.8%,疏水性氨基酸总量增加了4.5%.风味蛋白酶可以协同虾头内源酶水解凡纳滨对虾虾头,制备出水解度高、苦味值低的水解液.     

双酶法水解香菇蛋白的工艺研究

研究了纤维素酶和枯草杆菌中性蛋白酶共同水解香菇蛋白的工艺,确定了两种酶的水解条件:即第一步先纤维素酶水解,用量为150U/g,温度45℃, 料水比1∶8,pH(4.5±0.05)水解1h后;再进行中性蛋白酶的水解,用量2000U/g,温度50℃,pH(7.0±0.05),时间4h。水解液通过活性炭进行脱色澄清处理,得到香味浓郁清澈的香菇蛋白水解液。     

文蛤的营养成分分析及其用于海味香精的酶解液制备

以文蛤肉为原料,测定其脂肪酸组成和无机离子含量,利用木瓜蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、复合风味蛋白酶对文蛤肉蛋白质进行水解,通过正交实验确定最适酶解条件。结果表明,文蛤中含有丰富的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸,EPA和DHA含量分别高达6.904%和7.244%,无机离子中呈咸味的Cl-含量最高,达601mg/100g。用于制取海味香精的文蛤肉酶解最适条件为:料水比1∶2,温度50℃,pH7.0左右(±0.1),先加入0.5%木瓜酶和0.3%中性酶水解1h,再加入0.4%风味酶继续水解3h,该条件下水解度为35.8%,总氮回收率为51.2%,感官评分为6.0分。     

紫贻贝酶解产物抗菌活性及其工艺优化研究

以果蔬病原菌Botryiscinerea为供试菌,采用微孔板培养法,测定了胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解产物对Botryiscinerea的抗菌活性,并采用正交试验对胰蛋白酶的酶解条件进行了优化。结果表明,胰蛋白酶酶解产物抑菌活性最强,其抑菌率分别比胃蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解产物高38.4%、19.5%和18.2%(P<0.01);胰蛋白酶获取最佳抑菌酶解产物的条件为:55℃、pH8.5、加酶量300U/g、酶解时间2h、料水比1∶1。     

复合酶水解巴非蛤肉工艺研究

以巴非蛤肉为原料,选择木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和中性蛋白酶分步水解制备水解液.通过时水解条件的研究,确定木瓜蛋白酶最适酶解条件为:酶用量6000U/g原料、料水比1:8(w/v)、50℃、pH6.5下酶解4h,水解度为35.84%.分步酶解的工艺条件为:在料水比1:8(w/v)、pH6.5、温度50℃条件下,用木瓜蛋白酶先水解4h,菠萝蛋白酶、中性蛋白酶再依次水解4h,水解度达到48.35%.复合酶水解液的氨基酸分析结果表明,游离氨基酸含量丰富,约为866.4mg/100mL(色氨酸未计),其中必需氨基酸占32.6%,尤其是谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸等呈味氨基酸含量丰富.结果为巴非蛤肉复合水解液作为疗效营养剂或高级调味料提供了依据.     

固定化酶水解鱿鱼碎肉制备高F值寡肽的工艺优化

为了研究鱿鱼碎肉通过固定化双酶水解法制备高F值寡肽的工艺,以蛋白质水解度为指标,通过单因素和正交试验确定固定化胃蛋白酶和固定化风味酶的最佳酶解条件。第1步采用固定化胃蛋白酶,其最佳酶解条件是:料水比1∶5、加酶量26.83 U/g鱿鱼碎肉、水解时间5 h、水解温度55℃;第2步采用固定化风味酶,其最佳酶解条件是:加酶量1 692 U/g鱿鱼碎肉、pH 7.0、水解温度55℃、水解时间3 h;两步酶解后的总水解度为(32.09±0.58)%,OD_(280)为0.238±0.001。酶解液经多级活性炭串联吸附脱除芳香族氨基酸后,支链氨基酸和芳香族氨基酸的比值(F值)大于20。鱿鱼碎肉经固定化胃蛋白酶和固定化风味蛋白酶分步水解后,活性炭串联吸附脱芳后可制备高F值寡肽。     

酶法制备水解鳗鱼头蛋白及其应用的研究

测定了烤鳗下脚料鳗鱼头的成分,研究了酶解鳗鱼头提取水解鱼蛋白及其在海鲜调味料中的应用。双酶水解的最适条件为温度50℃,pH7.0,加酶量为中性蛋白酶木瓜蛋白酶60u/g∶40u/g水解时间4.5h,料液比1∶1.1～1.5,水解鱼蛋白中粗蛋白含量达87.63%,蛋白质收率37.1%。确定了以水解鱼蛋白为基料制备风味调料的最适配方,该产品具有营养价值高,海鲜风味浓郁的特点。     

纺织用酸性蛋白酶的性质及其在羊毛处理中的应用

以蛋白酶水解羊毛的能力来衡量自制酸性蛋白酶的活力，对自制酸性蛋白酶的性质及其在羊毛细化处理中的应用进行研究。发现所用酸性蛋白酶最适作用温度为40℃，最适作用pH值为3．0；一些金属离子在一定条件下可提高蛋白酶的活力，促进蛋白酶对羊毛纤维的减量细化．除温度、pH值外，酶用量、浴比、表面活性剂JFC的用量对蛋白酶水解羊毛的效果也有一定的影响。用所制得的酸性蛋白酶处理64支内蒙古羊毛的最佳条件为温度40℃，pH值3．0，酶用量4％，浴比1：25．JFC0．9％。     

哈尔滨地区生鲜牛乳中嗜冷菌数量与蛋白酶酶活力关系的测定

对嗜冷菌产生的蛋白酶的活性进行了研究。原料生奶经过4℃贮藏,在贮藏0,12,20,28,36,44,48,52 h分别对牛奶取样测定嗜冷菌数量和其酶的活力,实验结果表明,在4℃下贮存44~48 h时嗜冷菌数量最多,蛋白酶活力最强。     

杆菌属蛋白酶基因的结构及其应用

本文介绍了杆菌属中蛋白酶基因的结构及其在工业、科学研究中的广泛应用。杆菌属中的蛋白酶基因具有典型的“ｐｒｅ┐ｐｒｏ┐成熟酶前体”编码特征。其中ｐｒｅ┐序列编码信号肽，ｐｒｏ┐序列编码一段为蛋白酶形成具有生物活性的合适构象所需的肽链。ｐｒｅ┐与ｐｒｏ┐序列都在蛋白酶前体从细胞中分泌出来后被切去。具有相同性质的蛋白酶即使来源于不同菌种，在基因结构上仍具有很高的同源性；而性质不同的蛋白酶，即使来自同一菌种，它们在氨基酸组成，在ｐｒｅ┐、ｐｒｏ┐序列上都存在着很大差异。克隆的蛋白酶基因可用以构建具有蛋白酶高表达活性的基因工程菌，也可被用来研究蛋白酶的结构与性能的相互关系，还可被用于构建具有特殊功能的克隆载体。     

中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白研究

采用中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白制备大豆多肽,采用茚三酮分析法测定酶解液中氨基氮含量以判断其酶解效率。影响大豆分离蛋白酶解主要因素有中性与碱性蛋白酶用量比、酶解pH值、酶解温度、酶解时间,通过单因素和优化酶解条件正交试验分析,筛选出酶解最适实验条件:中性蛋白酶与碱性蛋白酶用量比为1∶3、温度55℃、pH 8.5、酶解时间6 h;在此条件下酶解,氨基氮含量为15.86 mg/g。     

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。     

中性蛋白酶芽孢杆菌BX-4产酶条件及部分酶学性质

采用稀释平板分离法从土壤中分离到一株产中性蛋白酶芽孢杆菌BX-4．通过单因素碳、氮源以及正交试验确定了最佳产酶培养基配方，同时还研究了起始pH值、金属离子、接种量对产酶的影响以及温度、pH值、金属离子以及表面活性剂对酶稳定性的影响；以最佳培养基为发酵培养基，于37℃、160r／min振荡培养48h，酶活达2519．35U／mL；该酶最适作用温度为55℃，最适作用PH值为7．5，在pH7．5缓冲体系中，55℃反应60min后仍有50％的酶活力，Ca^2＋和表面活性剂对酶有一定的激活作用，但激活作用不明显。     

巴西松子中蛋白酶的分离纯化及酶学性质

在单因素试验基础上,通过正交试验研究pH值、提取时间和料液比3个因素对巴西松子中蛋白酶活力的影响,得出巴西松子中蛋白酶的最佳提取缓冲液为pH9.0的硼酸-硼砂缓冲液、提取时间为60min、料液比为1:8(m/V);采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析分离纯化巴西松子中的一种蛋白酶,结果表明:纯化后蛋白酶比活力提高到了8.61倍,回收率为21.65%。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明:该蛋白酶分子质量为33kD。酶学性质结果表明:该蛋白酶最适pH值为9.0,属碱性蛋白酶;反应的最适温度为50℃;金属离子Mn2+对该蛋白酶活性有强烈的激活作用,而Ca2+、Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用。     

AS1.398和2709混合蛋白酶脱毛对猪皮蛋白的水解

制革中猪皮有温有浴酶脱毛工艺大多是采用单一酶：AS1．398或2709进行脱毛，在酶脱毛过程中同时使用两种酶的则很少，本文将AS1．398与2709按不同的比例定量（500酶活单位／g皮）混合，在相同的温度、不同的pH值、不同时间下进行脱毛，从而得出了最佳的脱毛条件，在该条件下，脱毛废液中总蛋白含量稍高，而胶原蛋白损失仅为单一酶的1／4到1／3，从而为克服有温有浴猪皮酶脱毛易产生松面和在我国牛皮和羊皮有温有浴酶脱毛并没有真正推向工业化生产等不足，提供了有参考价值的新的研究思路。     

嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究

从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4．36倍,得率为5．3%,经SDS-PAGE电泳测得其分子量为30．6kDa。酶的最适温度与pH实验表明,该酶最适温度为65℃、最适pH为7．5,并且该酶在50℃时表现出1h以上的稳定性。该蛋白酶的活性受到丝氨酸族蛋白酶专一性抑制PMSF和金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,Zn2+能提高酶活性,因此该蛋白酶为Zn2+激活的丝氨酸族蛋白酶。     

LEKTI-1 in sickness and in health

The stratum corneum (SC) is a biosensor that mediates responses to a variety of exogenous insults through various signalling mechanisms, including the activation of SC serine proteases (SP) kallikrein cascade. The SPINK5 gene encodes an SP inhibitor, the lympho-epithelial-Kazal-type-1 inhibitor (LEKTI-1), which in turn will buffer the excess of SP cascade initiation, key in the maintenance of permeability barrier homeostasis. We demonstrate that LEKTI processing can occur within the SC after secretion from stratum granulosum keratinocytes at least partially by klk7, an SC-specific chymotryptic SP. Unlike the recently described LEKTI-2, neither recombinant full-length LEKTI-1 nor recombinant LEKTI-1 fragments exhibit antimicrobial activity. Finally, we discuss the pathophysiological implications of LEKTI-1 in skin biology as well as its contribution to the pathogenesis of Netherton Syndrome and its potential involvement in atopic dermatitis.