Lipozyme TL 100L脂肪酶的固定化及其性质研究

比较了8种大孔树脂对脂肪酶Lipozyme TL 100L的固定化效果,选取树脂AB-8为该酶最佳的固定化载体,并对固定化条件进行了优化,得到AB-8固定化脂肪酶的最佳pH为9.0,最佳吸附量为54.5mg/g树脂,最佳含水量为6%～7%。固定化脂肪酶的pH稳定性、热稳定性、操作稳定性和贮存稳定性均有一定程度的提高。     

固定化脂肪酶的制备及其酶学性质的研究

以大孔树脂为载体进行脂肪酶的固定化,通过优化固定化条件得到高活性固定化脂肪酶并对其酶学性质进行研究。结果表明:弱碱性大孔阴离子交换树脂D301R是最佳的固定化载体;最优固定化条件为加酶量10%(以大孔树脂质量计),加水量30%(以大孔树脂质量计),4℃下在异辛烷中固定5 h。与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶具有良好的热稳定性、储存稳定性、吸附稳定性和对有机溶剂的抗逆性,循环使用6次,水解橄榄油的酶活回收率仍可达到50%。     

壳聚糖微球的制备及其对脂肪酶的固定化研究

采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,并以此作为载体固定了脂肪酶。对壳聚糖微球的制备条件、微球的性能及其固定化脂肪酶的条件进行了探讨,结果表明,壳聚糖微球成球效果最好的制备条件是壳聚糖溶液与分散相液体石蜡体积比为1∶2,吐温-80使用量为15mL,壳聚糖浓度为4%,所制得的壳聚糖微球具有良好的热稳定性、耐酸碱性和抗氧化性;壳聚糖微球固定化脂肪酶的最佳条件为戊二醛用量0.6mL,交联时间60min,加酶量1mg/g载体,pH值为7。采用壳聚糖微球固定化脂肪酶具有较高的酶活回收率,为60%     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

吸附-交联法固定化脂肪酶的研究

用X-5大孔树脂和戊二醛进行吸附交联固定脂肪酶,确定固定化脂肪酶的工艺条件为35℃下,用0.05mol/L的磷酸二氢钾/氢氧化钠缓冲溶液,控制体系pH为7.0,树脂与酶的最佳质量比为9:1,在170r/min的恒温摇床上振摇吸附3h,用0.5mL 0.12mol/L戊二醛交联处理2h后得到活性较高的固定化脂肪酶,固定化脂肪酶活力为631.8U/g,活力回收率为62.4%,半衰期大于15d.     

吸附交联法固定化黑曲霉β-葡萄糖苷酶

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用吸附交联法对黑曲霉(Aspergillus niger)β-葡萄糖苷酶进行了固定化。考察了固定化pH、戊二醛含量、吸附时间、交联时间和壳聚糖微球加入量等对固定化酶活力回收率的影响,在单因素试验的基础上,采用正交试验设计确定最佳固定化条件为固定化pH 5.0、戊二醛含量3.0%、吸附时间12 h、交联时间2 h、壳聚糖微球加入量0.91 g/IU,此时固定化酶活力回收率达到87.0%。固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适p H值均为4.2,最适温度分别为65℃和60℃,固定化酶具有更高的耐酸碱性和热稳定性。     

壳聚糖微球固定化脂肪酶的制备工艺及应用性质研究

以壳聚糖微球为载体,采用乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化羟基固定Candida rugosa脂肪酶,测定了不同EDC浓度、给酶量以及固定化时间对固定化脂肪酶活性的影响,并与戊二醛固定化脂肪酶性质作了对比分析.研究结果表明,用EDC活化固定化脂肪酶,当缓冲液pH为7,加酶量达到30 mg,EDc浓度为0.2%,交联时间6 h,固定化脂肪酶最大比活力为26.1 U/mg蛋白、活力回收最高为65.5%.固定化酶的热稳定性、pH稳定性和重复使用稳定性都有较大提高.壳聚糖微球固定化酶合成油酸乙酯循环使用次数达6次,油酸乙酯转化率从66.4%降至26.5%.     

不同固定化菊粉酶方法的比较及条件优化

采用聚乙烯醇-海藻酸钙(PVA-CA)凝胶包埋法、壳聚糖交联法、D201-GM阴离子大孔树脂吸附交联法及人造棉绒布共价偶联法对菊粉酶进行固定化。通过对四种方法的对比得出最佳固定化方法为D201-GM阴离子大孔树脂吸附交联法,其固定化酶酶活力、酶活力回收率及操作稳定性均优于其它三种方法。以D201-GM阴离子大孔树脂为载体,对影响菊粉酶固定化的重要因素进行了考察,获得最佳固定化条件。实验结果表明,在pH为5.4,载体与酶的比例为1:2的条件下,振荡吸附3h后,加入0.5%(终浓度)戊二醛,15℃交联4h时即可获得较好的固定化效果。     

脂肪酶固定化研究及应用初探

以不同的廉价国产大孔树脂为载体,吸附法固定化脂肪酶。重点考察了以大孔树脂b为载体时,酶液浓度、吸附温度和时间、缓冲液pH及离子强度对脂肪酶固定化效果的影响。结果表明,以pH8.5,0.1mol/L的磷酸盐缓冲液为介质,在酶液浓度20mg/mL,固定化温度35℃的条件下,吸附4h,得固定化酶水解活力为137.39u/g,固定化酶的最适pH和温度都比游离酶高。该固定化脂肪酶催化合成结构脂质,连续使用4批催化活力没有任何改变,具有一定的开发潜力。     

PVA-SA-活性炭共聚物固定脂肪酶的研究

以聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(SA)-活性炭共聚物为载体,对脂肪酶进行固定化.研究了活性炭浓度、酶初始浓度、缓冲液pH值、吸附时间及温度对固定化酶的活性及蛋白载量的影响.结果表明:在聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠凝胶中加入1 g/dL活性炭制成复合凝胶球,在25 ℃、pH值5.5的条件下对30 mg/mL的酶液吸附12 h,所得吸附固定化脂肪酶的活性较好.吸附固定的脂肪酶较游离酶的最适作用温度升高10 ℃,最适作用pH范围变宽,且向碱方向偏移0.2个单位.     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊二步法固定化β-葡萄糖苷酶的制备

以二步法制备的ACA微胶囊为载体,对β-葡萄糖苷酶进行固定化,以固定化β-葡萄糖苷酶的酶比活力和酶的稳定性为考查指标,对影响二步法制备固定化β-葡萄糖苷酶的各因素及其性质进行了探讨。ACA微胶囊二步法固定β-葡萄糖苷酶的优化条件是:3.5%海藻酸钠溶解0.15g酶,逐滴滴入到2%的CaCl2溶液中引发25min,所形成微球先在0.4%壳聚糖(0.5%(v/v)醋酸溶解)溶液中进行成膜反应,再在0.2%海藻酸钠进行覆膜反应,然后用1%戊二醛交联4h(4℃)。用上述最适条件制备固定化酶,总酶活的回收率为68.3%。4℃下贮藏,固定化β-葡萄糖苷酶的酶活力在一个月内保持稳定,重复使用3次后其活力仍保持在原来的80%以上。固定化酶反应的最适温度是60℃,最适pH是4.6。     

丁香油微胶囊的制备及表征

以明胶和海藻酸钠为壁材,采用复凝聚法对丁香油进行包覆,通过喷雾干燥法得到干燥的微胶囊产物,研究pH、明胶和海藻酸钠质量比、芯壁质量比、壁材用量、搅拌转速对微胶囊形成的影响,并对微胶囊的缓释性进行研究,采用红外、TG、SEM对优选实验条件下制备得到的微胶囊进行表征.结果表明:经过微胶囊化的丁香油挥发性明显降低,热稳定性大...     

大孔树脂D101固定中性脂肪酶及其生物催化应用

以大孔树脂D101固定化中性脂肪酶,研究了固定化条件对酶催化活性的影响,得到了最佳固定化条件:给酶量为90IU/g,固定化温度为35℃,时间为12h,此时固定化酶的活力回收约为60%。固定化酶的半失活温度由游离酶的53℃提高到57℃,最适反应温度和最适pH分别由42℃上升至44℃和由7.5下降到7.3。对固定化中性脂肪酶在生物柴油合成中应用也进行了初步研究。     

海藻酸钠固定化碱性蛋白酶制备及酶学性质的研究

对采用海藻酸钠固定化碱性蛋白酶的方法和酶学性质进行了研究。在单因素实验基础上,采用响应面优化方法确定固定化的最优条件,得到的最佳条件为:海藻酸钠浓度3.1%,pH9.4,CaCl2浓度3.0%,游离酶添加量10000U/g,时间1.8h,固定化酶活力可达5518U/g。固定化酶的最适pH为10,最适温度为60℃,制得的固定化酶的热力学稳定性和操作稳定性较好。此外,固定化酶重复利用5个循环后酶活力仅降低40%。     

固定化脂肪酶Lipase G 50催化合成甘油二酯的研究

以D380、CAT600、AB-8三种大孔树脂为载体,采用物理吸附法,对偏甘油酯脂肪酶LipaseG50进行了固定化,并利用其催化脂肪酸和甘油酯化合成甘油二酯。结果表明,采用D380固定的脂肪酶酶活最高,用此固定化酶催化反应的最佳条件为:甘油和脂肪酸的摩尔比5∶1,固定化酶酶加量为底物总质量的7.5%,反应温度35℃,在此条件下经过96h的反应,酯化率为76.39%,甘油二酯的含量为43.89%,没有甘油三酯生成。固定化酶重复使用5个批次后酯化率可达65.76%,甘油二酯的含量达到38.45%,具有良好的重复使用稳定性。     

Cocoa butter equivalent from enzymatic interesterification of tea seed oil and fatty acid methyl esters

Cocoa butter equivalent (CBE) was prepared by interesterification of tea seed oil, methyl palmitate and methyl stearate with lipase. The lipase was immobilized on macroporous resin selected from eight carriers. The rate of reaction of lipase immobilized on macroporous resin was 6.9 times higher than that of the free enzyme. After repeating application five times, 83.50% activity, of the immobilized lipase, was retained. Factors such as reaction time, temperature, water content, enzyme load and substrate ratio were studied. Three major acyls (palmitoyl, oleoyl and stearoyl) in triacylglycerols of the product were similar to those of cocoa butter. The melting range and dilatation–temperature curves of the prepared CBE were close to that of the cocoa butter.     

复凝聚法制备白术挥发油微胶囊及表征

以白术挥发油为芯材,壳聚糖和海藻酸钠为壁材,采用复凝聚法制备微胶囊,通过单因素实验研究工艺参数对挥发油包埋率的影响,采用激光粒度分析仪、扫描电镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、热重分析仪(TG-DTA)对微胶囊的粒径分布、表面形貌、化学结构、芯材含量进行表征。结果表明:在芯壁比为1∶2,乳化剂用量为5%,复凝聚温度为40℃,壳聚糖质量分数为1%,海藻酸钠质量分数为2%,pH 1.5,乳化转速6 000 r/min条件下制备的微胶囊包埋效果最好。微胶囊颗粒大致呈球状,表面结构致密,无明显的裂缝和洞孔,包埋率高,热稳定性能好,研究结果可为白术挥发油微胶囊的制备、鉴定、质量控制和制剂学性质的研究提供依据。