植物乳杆菌JLA-9产细菌素的分离纯化

将来源于东北传统发酵酸菜中的植物乳杆菌JLA-9产的细菌素进行分离纯化,首先利用饱和度为80%的硫酸铵溶液对发酵上清液进行沉淀粗分离。复溶后利用Sephadex LH-20进行凝胶层析纯化,之后采用Hitrap QFF进一步进行离子交换层析纯化,利用反相高效液相色谱(Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography,RP-HPLC)C_(18)柱进行最终纯化,得到单一活性抑菌组分,说明细菌素得到基本纯化,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF/MS)确定该细菌素的分子质量约为0.9 kDa左右。采用琼脂扩散法测定了细菌素对常见的食源性致病菌和腐败菌的抑菌效果,结果显示该细菌素具有较好的抑制作用。     

格氏乳球菌素garviecin LG34分子结构及抗菌活性研究

Garviecin LG34（格氏乳球菌素）是由发酵蔬菜中分离出的格氏乳球菌（Lactococcus garvieae）产生的新型广谱乳酸菌细菌素。采用冷乙醇沉淀、Sephadex G50葡聚糖凝胶层析、SP琼脂糖快速阳离子交换层析及液相色谱-质谱联用对garviecin LG34进行分离纯化和分子质量测定;采用Edman降解法、圆二色谱法和蛋白质结构预测软件分析garviecin LG34的理化性质和分子结构;并研究了细菌的最小抑菌浓度及对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌生长的影响。结果表明,garviecin LG34的分子质量为5654.32 Da,由46个氨基酸组成,二级结构主要为α-螺旋结构和无规则卷曲,相对含量分别为36.6%、51.9%,具有亲水性和结构稳定性。Garviecin LG34具有广谱抗菌活性,当浓度达金黄色葡萄球菌和埃希氏大肠杆菌最小抑菌浓度的2.0倍（MIC×2.0）时,对两种菌均表现为杀菌作用。     

乳酸菌活性物质LPX-600的分离纯化及其性质的研究

经硫酸铵沉淀、阳离子交换层析、凝胶过滤、反相高效液相色谱等分离纯化过程,从类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum LPX-600)的发酵液中分离出1种活性物质LPX600。LPX600在酸性条件下活性较高,对热稳定,对蛋白酶K、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感,并且对沙门氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、粘性沙雷氏菌等食品致病菌有很强的抑菌活性。     

面包乳杆菌(Lactobacillus panis)C-M_2细菌素的分离纯化及特性分析

本实验对面包乳杆菌C-M2所产的新型细菌素进行分离纯化和特性研究。通过乙酸乙酯萃取、阳离子交换层析和半制备液相三步分离纯化该细菌素。最终细菌素的比活力达到5 044.96 AU/mg,纯化倍数为79.8倍,但回收率仅为0.35%。通过液相色谱-串联质谱法分析,该细菌素的分子质量为863.52 D,氨基酸序列为MVKKTSAV,它是一种新型的Ⅱ类细菌素。该细菌素具有广泛的抑菌谱,可以抑制革兰氏阳性和阴性的食品腐败菌。该细菌素对热和p H值稳定,即使在121℃灭菌15 min,仍保留82.1%的抑菌活性,在p H 6条件下保留85.6%的抑菌活性。它能被多种蛋白酶失活,不能被脂肪酶和淀粉酶失活,这些结果表明该细菌素具有作为食品生物防腐剂的潜在应用价值。     

甘油半乳糖苷的分离纯化及鉴定

以半乳糖和甘油为原料,β-半乳糖苷酶为催化剂,制备甘油半乳糖苷。采用活性炭吸附法对其分离纯化,采用L9（34）正交试验对分离纯化的工艺条件进行优化筛选,进一步用G-15色谱柱纯化,以获得高纯度的甘油半乳糖苷。结果表明：活性炭吸附法分离纯化甘油半乳糖苷的最佳工艺条件为反应液稀释倍数20、活性炭用量2 g/mL、洗脱剂乙醇体积分数30%,甘油半乳糖苷的回收率和纯度分别为62.53%和48.84%,分别比单因素试验结果高4.52%和4.76%;经G-15柱色谱进一步纯化,甘油半乳糖苷的纯度达到97.80%;经质谱鉴定合成产物为甘油单半乳糖苷。     

一株伯克霍尔德菌所产类细菌素的分离纯化

利用硫酸铵分级沉淀、固相萃取小柱层析、高效液相色谱分离的方法纯化一株伯克霍尔德菌所产类细菌素。结果表明,纯化效果较好,在保留时间5.783 min时出现一个较强的单一吸收峰,抑菌物质的最大吸收波长为223.06 nm,蛋白质含量为452 μg/mL。     

乳酸链球菌素Q13的纯化及其对保加利亚乳杆菌的抑菌机理

为探讨乳酸链球菌素Q13对保加利亚乳杆菌LMG-1（Lactobacillus bulgaricus LMG-1）的抑菌机理，本研究利用硫酸铵沉淀、超滤和葡聚糖凝胶柱层析等对乳酸乳球菌Q13（Lactococcus lactis Q13）所产细菌素进行分离纯化，并运用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其纯化效果和分子质量，同时通过研究乳酸链球菌素Q13对保加利亚乳杆菌细胞膜通透性、胞内酶活性及菌体形态结构等的影响，阐明乳酸链球菌素对保加利亚乳杆菌的抑菌作用机制。结果表明，乳酸乳球菌Q13所产细菌素硫酸铵沉淀的最适饱和度为60%，硫酸铵沉淀得到粗提物超滤后仅分子质量大于10 kDa组分具有抑菌效果，将具有抑菌活性的超滤组分利用葡聚糖凝胶柱层析进行纯化后，共收集到2 个具有抑菌活性的洗脱峰，电泳图谱仅呈现出一条分子质量约为17.5 kDa的蛋白条带，分析其可能为乳酸链球菌素的多聚体形式，并将其命名为乳酸链球菌素Q13；抑菌机理实验结果显示，乳酸链球菌素Q13对保加利亚乳杆菌LMG-1的抑菌机制主要是通过在靶细胞细胞膜上形成孔洞、增加细胞膜通透性和破坏细胞膜完整性，导致内容物外泄，胞内Na＋/K＋-ATP酶和碱性磷酸酶等关键酶含量降低，影响细胞正常能量代谢活动，最终诱导菌体细胞死亡。     

植物乳杆菌KLDS1.0391所产细菌素的纯化

植物乳杆菌KLDS1.0391的无细胞上清液首先经过饱和度为70%的硫酸铵沉淀,收集的沉淀溶于1/40体积0.02mol/L的乙酸钠缓冲液(pH 6.5),复溶后的样品采用填充SP SepharoseTMFast Flow的COLUMN XK 16/20层析柱进行阳离子交换纯化,之后采用SOURCE 5RPC ST 4.6/100层析柱进行反相纯化。结果表明,具有抑菌活性的细菌素纯化样品经高效液相色谱检测,显示为单峰,说明其基本得到纯化,经Tricine-SDS-PAGE分析和MALDI-TOF质谱,判定该细菌素的分子质量约为1770D。     

清香型白酒酒醅中乳酸高产菌株的筛选及乳酸的分离纯化

该研究以分离自清香型白酒酒醅的10株乳酸菌为研究对象，采用溶钙圈法和液体发酵法从中筛选高产乳酸菌株，并对其产乳酸条件进行考察；然后通过活性炭和离子交换柱对乳酸进行分离纯化，并通过高效液相色谱（HPLC）法检测乳酸纯度。结果表明，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）SL32-2为高产乳酸的菌株，其在高粱糖化液中产乳酸的最佳发酵温度和初始pH值分别为35 ℃和7.0。活性炭对其发酵液的最适处理条件为活性炭添加量1.5 g/100 mL、处理温度60 ℃、处理时间2 h，此时脱色率、脱糖率和脱蛋白率分别为72.65%、3.75%和85.81%。经离子交换柱进一步纯化后，乳酸总得率为51.12%，其中阴离子交换柱的洗脱液中乳酸纯度较高。     

大蒜中蒜氨酸分离纯化工艺研究

以大蒜为原料,分别研究了醇沉法和葡聚糖凝胶G-10对蒜氨酸的分离纯化效果。结果表明醇沉法分离蒜氨酸的最佳工艺条件为:大蒜提取液真空浓缩至可溶性固形物含量为20%,加入乙醇至终浓度为80%,静置18 h,分离得上清液及沉淀,再将所得上清液及沉淀复溶后按上述条件分别进行醇沉,得二次醇沉上清液,合并,冷冻干燥,得蒜氨酸粗品。蒜氨酸粗品经葡聚糖凝胶G-10色谱法纯化最佳条件为:上样液浓度为30%,上样量2%柱体积,洗脱流速1 mL/min,通过葡聚糖凝胶G-10分离后,蒜氨酸的纯度可达到43.5%。     

长白楤木嫩芽中刺龙芽皂苷C的分离纯化及结构鉴定

为了寻找长白楤木嫩芽中的皂苷活性单体,采用70%乙醇提取,AB-8大孔吸附树脂纯化,硅胶柱层析、凝胶柱层析和制备液相进行分离,利用NMR波谱法鉴定化合物的结构。结果分离得到一个皂苷单体,经鉴定为刺龙芽皂苷C。     

黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化及安全性研究

目的 建立并验证黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷(malvidin 3-O-glucoside, Ma-3G)的分离纯化方法,并评估其安全性。方法 利用超声辅助浸提法提取黑果小檗果实中的花色苷(Berberis atrocarpa Schneid anthocyanin,BHSA)粗提物,将BHSA粗提物用乙酸乙酯萃取,AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化,采用Sephadex LH-20凝胶柱对纯化后BHSA进行分离,分别考察洗脱液浓度、上样量对花色苷不同组分分离效果的影响,并筛选出最佳分离条件,将最佳条件下分离得到的Ma-3G进行紫外可见光谱扫描及高效液相色谱法检测。采用固定剂量法对小鼠以2000 mg/kg Ma-3G的单次口服剂量进行安全性实验。结果 经乙酸乙酯萃取、AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化后得到BHSA粗品纯度为50.76%, Sephadex LH-20凝胶柱层析的最佳分离条件为上样量20 mg,洗脱液为含有0.5%HCl的20%甲醇溶液,在此条件下成功获得了Ma-3G单体。使用面积归一化法进行纯度测定,结果显示其纯度为99.48%。黑果小檗果实中Ma-3...     

苍山大蒜低聚糖纯化技术及分子质量测定

文中研究了苍山大蒜中低聚糖(GOS,garlic oligosaccharide)的分离纯化技术,并测定其分子质量。分别研究了聚酰胺柱色谱法对蛋白质的脱除效果;离子交换色谱法,有机溶剂沉淀法和葡聚糖凝胶色谱法对GOS的纯化效果。结果表明:聚酰胺色谱柱对大蒜粗糖中蛋白质有良好的脱除效果,糖回收率为98.9%,蛋白质脱除率为66.8%;DEAE-纤维素(OH~-)色谱柱可将大蒜低聚糖分为3个组分;乙醇分级沉淀可将大蒜低聚糖分为8个组分;Sephadex G-25纯化后的GOS的HPLC测定结果表明,其纯度为99.1%,Mw/Mn=1.31,数均分子质量为1770u。     

枇杷多糖的提取纯化及理化性质初步研究

本文建立了枇杷多糖的提取纯化方法,并对提取的枇杷多糖进行了理化性质分析。枇杷多糖经40％乙醇分级得到的组分Lens 5,用Sephadex G-150凝胶柱层析得到单一峰,Lens 5的酸性水解液经纸层析和薄层层析分析,其单糖组成为葡萄糖和木糖,用Sephadex G-150凝胶柱层析法测得其相对分子量为43000道尔顿。     

Sakacin M, a bacteriocin-like substance from Lactobacillus sake 148.

The antagonistic activity of Lactobacillus sake 148 was evaluated during its growth on complex broth media and in a semisynthetic defined medium (SDM) with various supplements. The antagonistic activity was a growth-associated property, being detected and quantified when L. sake 148 was grown at either 4, 8, 16, 25 or 32 degrees C. The concentrated culture supernatant of L. sake 148 was subjected to purification by lyophilization and gel filtration. The purification procedure resulted in a small increase in its specific activity (7-fold) and in a low recovery of the original inhibitory activity (8%). Gel filtration analysis of the partially purified activity on Sephadex G-50 revealed an apparent molecular weight of 4640. The partially purified antagonistic activity of L. sake 148 was destroyed by treatment with proteolytic enzymes. However, the antagonistic activity was resistant to heat, having D-values at 121, 135 and 150 degrees C of 23.8, 17.4 and 15.2 min, respectively.     

桑黄菌丝体多糖的分离纯化及理化性质分析

研究桑黄粗多糖的分离和纯化工艺,并对多糖组分进行理化性质分析。结果表明：经DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到两个组分P-47000和P-8700;经高效液相色谱分析证明,两组分均为纯品,且不含蛋白质、核酸,为非淀粉类多糖,分子质量分别为4.74×104D和8.71×103D,均由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖组成,P-47000中各单糖物质的量比为3.47:1.99:1:63.27:13.44,P-8700中各单糖物质的量比为10.46:1:1.03:182.75:30.94。     

新疆红花黄色素的分离提取与纯化的研究

研究了新疆红花黄色素的分离与提取、纯化与鉴定等工艺条件。以羟基红花黄色素A的提取率为考查指标,采用单因素实验法研究了溶剂的种类、用量、提取温度、提取时间与提取次数等因素对红花黄色素提取率的影响。采用硅胶柱层析法对红花色素进行纯化。HPLC和UV对单因素处理的分析结果表明,处理样品与10%乙醇提取液的料液比为1:50(m/v)、提取温度为60℃、提取次数为2次、提取时间为50min为最优提取工艺条件。获得的红花黄色素提取液经冷冻干燥后,以乙醇:丙酮:水=3:2:1配比进行硅胶柱层析,分离获得了以羟基红花黄色素A为主的两种红花黄色素纯化产物。     

野生粉叶爬山虎种子等部位的原花青素提取纯化工艺及含量测定

通过正交实验研究粉叶爬山虎中原花青素提取条件。结果表明:提取时间100min,乙醇体积分数75%,提取温度65℃,料液比1:10为较佳条件。香草醛-盐酸法测得果梗、果皮、种子中含量分别为2.6317%、3.7967%、4.0934%;大孔吸附树脂分离纯化的结果表明:LSA-21树脂适合分离纯化粉叶爬山虎中原花青素,分离条件:上样液质量浓度为20mg/mL,洗脱流速为2.0BV/h,经HPLC测得纯化后果梗、果皮与种子中原花青素含量为2.39%、2.31%、3.94%;HPLC检测LSA-21树脂分离纯化后的原花青素纯度可达87%以上。     

连翘叶中连翘酯苷A、芦丁和连翘苷提取纯化工艺优化

对连翘叶提取液中同时分离连翘酯苷A、芦丁和连翘苷的提取纯化工艺进行优化。以连翘酯苷A、连翘苷和芦丁的质量浓度为指标,采用高效液相色谱法分析检测,比较不同型号的大孔吸附树脂和不同工艺条件对这3种活性成分的分离纯化能力。最佳工艺条件为:以AB-8大孔吸附树脂为吸附剂,药材-树脂比1.5∶1(g/g),上样流速2 BV/h,先用8 BV的水洗脱,再用6 BV的30%乙醇溶液和6 BV的50%乙醇溶液分别洗脱,洗脱流速3 BV/h;进一步采用C_(18)-硅胶柱反相层析法纯化连翘酯苷A,静置沉淀的方法纯化连翘苷和芦丁,纯化后连翘酯苷A和芦丁的纯度可达到97%以上,连翘苷纯度可达到95%以上。此工艺条件能得到高纯度的3种有效成分,为连翘叶资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。