超滤技术分离双低油菜ACE抑制肽及其性能研究

采用超滤技术对双低油菜酶解物中的ACE抑制肽进行了分离提纯研究,考核了分离参数对分离效果的影响,分析了不同分子质量段多肽HPLC肽谱的变化,研究了双低油菜高ACE抑制活性多肽的耐消化性、酸碱稳定性和耐热性。结果表明,超滤分离能明显提高双低油菜ACE抑制肽的活性,截留分子质量为3 ku的超滤膜透过液IC50值下降了15%,活性多肽回收率超过58%,酶解物中有4个高活性的组分峰,小于3 ku分子质量段的ACE抑制肽有良好的耐热性、酸碱稳定性和耐消化性。     

超滤法制备高ACE抑制活性玉米肽

为了获得高降血压活性的玉米肽,采用截留分子质量为5、3、1 ku超滤膜对玉米蛋白酶解液进行分级分离,比较了各级份及未分级玉米肽的肽含量及血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性;并采用正交试验对最佳膜分离条件进行了优化。结果显示:经截留分子质量3 ku的膜滤过肽液的ACE抑制活性最高,其最佳膜分离条件为:原液浓缩比3∶1,pH值为5.5,温度为35℃时,此玉米肽滤过液的ACE抑制率大于82.27%。截留分子质量为3 ku的超滤膜为分离玉米ACE抑制肽的最佳超滤膜。     

蓝蛤蛋白酶解液超滤分离特性的研究

研究了蓝蛤蛋白酶解液在各级超滤过程中膜通量的变化及超滤前后感官、肽分子质量分布的变化,对超滤膜的选择性及分离效果进行了评价和分析。实验结果表明,各级超滤膜处理蓝蛤蛋白酶解液初始膜通量大小排序为3 ku5 ku10 ku,各级超滤过程中膜通量均随着操作时间的延长而呈下降趋势;用10 ku超滤膜处理后,酶解液浑浊和腥味消失,通过各级超滤,酶解液的鲜甜味得到明显提高;原酶解液中各分子质量肽段均有较广泛的分布,仅采用控制酶解工艺仍难以实现呈味肽的有效富集,通过各级超滤处理,小于3 ku肽段得到有效富集,其含量由47.26%提高到76.66%。各级超滤膜的实际截留分子质量均大于理论截留分子质量,且两者的差异随着理论截留分子质量的降低而增加。     

米糠蛋白ACEI活性肽的超滤分离及其稳定性研究

米糠蛋白酶解液分别用截留分子量为10 ku和3 ku 的超滤膜进行超滤,得到分子量10 ku以上、3 ku～10 ku和3 ku以下3个级分的ACEI活性肤,经测定其IC50分别为2.95、1.73和0.83 g/L,即分子量小于3 ku的ACEI活性肽具有最好的ACE抑制效果.研究了分子量小于3 ku 的ACEI活性肽的稳定性,发现该分子量段的ACEI活性肽有良好的耐热和耐酸碱性,对胃蛋白酶没有耐受性,对胰蛋白酶有良好的耐受性.     

超滤法制备高抗菌抗氧化活性带鱼蛋白亚铁螯合肽(Fe-HPH)的工艺研究

为了获得高抗菌、抗氧化活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽(Fe-HPH),采用透过分子质量分别为10,5,3,1ku的超滤膜对带鱼蛋白酶解液亚铁螯合物进行分级分离,比较各级分及未分级带鱼蛋白亚铁螯合肽的肽含量及抗菌抗氧化活性;采用正交试验对最佳膜分离条件进行优化。试验结果显示:经透过分子质量3ku的膜超滤的肽液的抗菌、抗氧化活性最高,其最佳膜分离条件是:螯合肽质量分数30%,pH6.5,温度35℃,此时带鱼蛋白酶解液亚铁螯合物超滤液的DPPH自由基清除活性为81.2%(2mg/mL),对金黄色葡萄球菌的抑制率为91.3%。透过分子质量为3ku的超滤膜为分离高抗菌、抗氧化活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽的最佳超滤膜。     

脱盐、超滤处理卵白蛋白源ACE抑制肽及其理化性质的研究

卵白蛋白是蛋清中的主要蛋白质,利用卵白蛋白制备ACE抑制肽可为其高值利用提供参考。本文采用离子交换色谱对卵白蛋白的粗酶解物进行脱盐处理,确定了室温25℃、20 m L进样量、8 BV/h的脱盐工艺条件。在上述条件下,酶解物脱盐率达到83.6%,氮回收率和ACE(血管紧张素转换酶)抑制率分别为87.71%和80.31%。再采用截留分子量为10 ku和3 ku的两种超滤膜将脱盐酶解物分离成10 ku、3~10 ku和3 ku三个组分,最佳操作条件:超滤时间40 min、操作压力1.5 bar、温度35℃(10 ku)和30℃(3 ku)。超滤所得三个组分均具有ACE抑制活性,其中分子量3 ku的超滤物活性最高,该组分与粗酶解物相比较,总巯基和表面巯基含量显著降低(p0.05),同时表面疏水性显著提高(p0.05),热稳定性增加。因此,卵白蛋白的粗酶解物经脱盐、超滤处理,可以明显去除其中的盐分,并得到ACE抑制活性较高的分离组分。     

超滤精制对芝麻蛋白水解液ACE抑制活性和抗氧化活性的影响

以芝麻饼粕为原料,采用超滤技术制备功能多肽,研究超滤对蛋白酶水解肽的氨基酸组成、肽谱、降血压和抗氧化功能特性等影响。结果表明:经截留分子质量为10 ku和3 ku的超滤膜过滤,所得到的3个组分(相对分子质量分布10 ku、3~10 ku和3 ku)的必需氨基酸质量分数分别为15.6%、14.9%、15.0%,显著高于未经超滤(12.9%),分子质量分布在3~10 ku组分的总氨基酸质量分数达53.1%,比未经超时提高了7.6%;其中分子质量分布为3~10 ku和3 ku酶解液的IC50值分别降低了6.6%和7.9%,血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性显著提高;分子质量分布为3~10 ku和3 ku酶解液的DPPH·自由基清除率IC50值与未经超滤时均降低了8.6%,羟自由基清除率分别降低4.20%和26.57%,抗氧化活性显著提高。     

传统发酵酸马奶中ACE抑制成分的分离

研究了从传统发酵酸马奶中分离ACE抑制成分,即酸马奶经热处理、分离乳清、截留膜超滤和凝胶柱层析分离后得到ACE抑制成分,并逐步测定ACE抑制活性和肽质量浓度.酸马奶乳清经超滤膜截留分离得到3个组分(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ),其中分子量小于3 ku组分(Ⅲ)的ACE抑制效率最高((2.257±0.028)L/g),再经凝胶柱层析分离得到6个组分(A-F),其中组分C的ACE抑制效率最高((6.3852±0.0728)L/g).结果表明,传统发酵酸马奶中富舍ACE抑制成分,为酸马奶的降血压功能及其进一步研发提供科学依据和实验基础.     

发酵乳中ACE抑制肽的超滤工艺研究

本实验采用超滤法分离发酵乳中的ACE抑制肽,研究了超滤工艺的主要技术参数。结果表明:截留分子量为6000Da的超滤膜,在压力0.10MPa,温度25℃条件下,能得到具有较高ACE抑制活性的超滤液。     

酪朊酸钠制备ACE抑制肽的研究

采用商业化的胰蛋白酶对底物浓度为10％的酪朊酸钠进行可控酶解，将酶解液的上清液经截留分子量为10ku的超滤膜分离后利川紫外分光光度法测定各组分ACE体外抑制活性，结果表明酪朊酸钠的胰蛋白酶酶解液具有较强的ACE抑制活性，超滤分离可提高产品的ACE体外抑制活性，为开发新一代降血压保健食品提供广阔的前景。     

SOYBEAN PROTEIN-DERIVED HYDROLYSATE AFFECTS BLOOD PRESSURE IN SPONTANEOUSLY HYPERTENSIVE RATS

The aim of this study was to investigate the inhibitory activity of angiotensin-converting enzyme (ACE) and antihypertensive effects of soybean protein hydrolysate in spontaneously hypertensive rats (SHRs). The inhibitory activities against ACE with an IC₅₀ of the peptidic fraction were 0.82 (casein), 0.73 (soybean protein isolate), and 0.48 mg/mL (soybean acid-precipitated protein), respectively. Peptic hydrolysate containing 1% NaCl was added to the SHRs'feed (5% of each protein hydrolysate). Systolic blood pressure of the soybean protein hydrolysate-supplemented groups were significantly lower than that of the casein hydrolysate-supplemented group in the study period. These data suggested that soybean protein hydrolysate may retard the development of hypertension in SHRs by its ACE inhibitory effect in vivo.     

Effects of temperature and pH on angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity and physicochemical properties of bovine casein peptide in aqueous Maillard reaction system

The purpose of this study was to evaluate the impact of temperature and pH on aginotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity, free amino group, browning intensity, fluorescence intensity and molecular weight distribution of galactose-bovine casein peptide (BCP) Maillard reaction products (MRPs). With increased heating temperature and pH, browning intensity of Galactose-BCP MRPs increased, while free amino groups of Galactose-BCP MRPs decreased. The fluorescence intensity of Galactose-BCP MRPs reached its maximum value at 100 °C and thereafter gradually decreased, while fluorescence intensity of Galactose-BCP MRPs showed the maximum value at pH 10.0 and thereafter gradually decreased. Size exclusion chromatography of Galactose-BCP MRPs indicated molecular rearrangements and production of new smaller molecules as a function of the heating temperature and pH. Galactose-BCP MRPs had the lowest angiotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity at 120 °C. BCP lost 29.13% ACE inhibitory activity at pH 12.0 by Maillard reaction with galactose. High temperature and alkaline condition of Maillard reaction lead to the loss of ACE inhibitory activities and changes of characteristics of bovine casein peptides.     

酪蛋白水解物的酶法修饰与ACE抑制活性变化

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白水解物,其水解度为11.2%,IC50为47.1μg/mL。再应用相同的酶对酪蛋白水解物进行类蛋白反应修饰,考察底物浓度、温度和酶添加量对类蛋白反应的影响,并制备5个不同的修饰产物测定其ACE抑制活性和IC50值。结果表明,修饰产物的ACE抑制活性随修饰程度(游离氨基减少量)的增加而提高,并且都高于未经修饰的酪蛋白水解物。当游离氨基减少量为154.65μmol/g(蛋白)时,修饰产物的IC50值可降至0.6μg/mL。毛细管电泳分析结果显示类蛋白修饰后水解物的多肽组成情况发生明显变化。研究结果证明酪蛋白水解物的ACE抑制活性可以通过类蛋白反应的修饰作用而提高。     

Systemic screening of milk protein-derived ACE inhibitors through a chemically synthesised tripeptide library

A tripeptide library consisting of 373 tripeptides (nine repeats) based on bovine α-S1 casein and β-lactoglobulin was synthesised chemically, purified by HPLC and the angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory activities were assayed. Of the 364 tripeptides assayed, 144 showed a relative ACE inhibitory activity higher than 50% and 43 higher than 60%, at a set concentration of 2.5 mM. More potent tripeptides were found from α-S1 casein than from β-lactoglobulin. The high percentage of Pro/Tyr in caseins could be the reason for this. Fifteen tripeptides with relative activities higher than 50% were selected and assayed for their IC₅₀, using hippuryl-l-histidyl-l-leucine as the substrate. The most potent peptide showed an IC₅₀ of 0.85 μM.     

酶法制备牦牛乳酪蛋白源血管紧张素转换酶抑制肽

应用6种商业蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白,研究其水解产物的血管紧张素转换酶抑制活性,结合蛋白水解度及蛋白回收率的结果,蛋白酶C适用于制备牦牛乳酪蛋白源血管紧张素转换酶抑制肽。     

脯氨酸存在下酪蛋白ACE抑制肽的Plastein反应修饰

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备ACE 抑制肽,其IC50 为47.1μg/mL;采用相同酶催化ACE 抑制肽和脯氨酸进行Plastein 反应,对ACE 抑制肽进一步修饰,并用响应面分析法优化反应条件。在ACE 抑制肽质量分数为35%,反应时间为6h,以反应体系游离氨基减少量为指标,得到适宜的反应条件为：温度为47.8℃、脯氨酸比例为0.54、酶添加量为9.5kU/g pro,此条件下体系游离氨基减少量约195.7μmol/g pro。在适宜条件下改变反应时间对酪蛋白ACE 抑制肽进行同程度的Plastein 反应修饰,制备出6 个修饰程度不同的多肽混合物并测定它们的ACE 抑制活性、计算其IC50 值。结果表明：修饰产物的ACE 抑制活性随修饰程度的增加不规则变化,当反应体系的游离氨基减少量为195.7μmol/g pro 时,修饰产物的IC50 降低至0.2μg/mL。     

一种新型绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽结构鉴定及分子结合机制分析

本研究旨在利用蛋白酶水解绵羊乳酪蛋白,制备新型血管紧张素转化酶（Angiotensin-I-Converting Enzyme,ACE）抑制肽并对其分子抑制机制进行分析,为功能性绵羊乳多肽乳制品开发提供技术支持。试验以绵羊乳酪蛋白为原料,以水解度、ACE抑制率和分子量分布为评价指标,从四种蛋白酶中筛选最适蛋白酶,选择<3 kDa的组分通过LTQ Orbitrap Velos质谱仪进行肽鉴定,筛选潜在的ACE抑制肽进行人工合成并测定其半抑制浓度（IC₅₀）,采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接进一步解释肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶为最佳水解蛋白酶;从κ-酪蛋白中筛选出一种新的ACE抑制肽KYIPIQY,半抑制浓度（IC₅₀）为5.73 μmol/L;Linewaver-Burk图表明该肽对ACE为混合型抑制模式;分子对接显示,KYIPIQY通过与ACE的S1和S2活性口袋形成氢键和疏水作用力发生紧密结合并且可以扭曲ACE的Zn2+四面体,抑制ACE催化活性的失活而发挥高效的ACE抑制活性。     

分步酶解酪蛋白制备小分子ACE抑制肽

通过模拟胃肠道消化,采用单酶和复合酶分步水解酪蛋白获得小分子的血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽。首先通过胃蛋白酶水解条件的优化获得具有高ACE抑制活性肽。然后以此为底物通过胰蛋白酶和胰凝乳蛋白复合酶水解条件优化获得具有高ACE抑制活性的小分子肽。结果表明：第一步的胃蛋白酶水解最优条件为：[E]/[S]=6%、[S]=0.015g/mL、pH=1.8、t=37℃、t=2h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为84.5%,分子质量集中在2000D以下;第二步的复合酶水解最优条件为：m胰蛋白酶(6%):m胰凝乳蛋白酶(3%)=2:1、pH=7.8、t=48℃、t=5h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为85.9%,分子质量集中在500D以下。研究表明,通过分步酶解选择合适的酶解条件可以获具有较高ACE抑制活性的小分子肽。     

胞壁蛋白酶（CEP）酶解对酪蛋白结构及功能特性的影响

通过纳米粒度分析、傅立叶红外光谱（FTIR）、乳化性、乳化稳定性、蛋白溶解性、抗氧化性及ACE抑制率的测定,分析探讨酪蛋白及其不同水解度（DH 2.4%、4.5%、7.1%、8.3%）的嗜酸乳杆菌胞壁蛋白酶（CEP）酶解产物的结构及功能特性。FTIR分析表明CEP酶解改变了酪蛋白各种构象所占的比例,酪蛋白二级结构发生了不同程度的变化;纳米粒度分析表明酪蛋白颗粒大小随水解的加深先减小后增大,其水解物颗粒在DH 4.5%时最小,乳化稳定性最大;酪蛋白的乳化性随水解的加深先增大后减小,DH 7.1%时增至最大,与其溶解性的变化趋势一致;此外酪蛋白的酶解物具有一定的ACE抑制活性及抗氧化性,且DPPH清除能力在一定范围内随水解度及浓度的增大而增大,当DH为8.3%,浓度为5mg/mL时,DPPH清除能力增大至35.00%。因此CEP酶解可有效改善酪蛋白的结构及功能特性,为乳源性功能多肽的开发提供理论依据。     

Biological activities and physicochemical properties of Maillard reaction products in sugar–bovine casein peptide model systems

The purpose of this study was to evaluate the biological activities and physicochemical properties of Maillard reaction products (MRPs), derived from aqueous reducing sugar (ribose, galactose and lactose) and bovine casein peptide (BCP) model systems. The fluorescence intensity of ribose-BCP MRPs reached the maximum value within 1 h, while it took 3 h for galactose-BCP MRPs. Size exclusion chromatography of all the MRPs indicated molecular rearrangements and production of new smaller molecules, as a function of the heating time. The consumption of ribose and amino groups was the highest in the ribose-BCP MRPs. BCP lost its known angiotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity by the Maillard reaction with reducing sugars. Ribose–BCP MRPs had the lowest ACE inhibitory activity, but they showed the highest 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH) radical scavenging activity and ferrous reducing power among all the MRPs. Galactose-BCP MRPs inhibited, slightly the growth of Caco-2 cells, while ribose-BCPand lactose-BCP MRPs had no cytotoxicity.