红毛藻多糖的化学组成及其体外免疫诱导活性研究

目的:对红毛藻中多糖组分进行提取、分离纯化,分析其化学组成和体外免疫诱导活性,阐明红毛藻具有提高免疫力食药用功效机制,为红毛藻的高值化利用提供科学依据。方法:通过水提醇沉法从红毛藻中提取红毛藻粗多糖,经阳离子交换柱层析和Sephadex G75柱层析纯化得到红毛藻多糖(BFP),再用DEAE-cellulose52柱层析对BFP进行分级纯化得到3个多糖组分F1、F2和F3;采用PMP柱前衍生、HPLC及化学方法分析其单糖组成和化学成分;通过RAW264.7细胞模型分析BFP、F1、F2和F3的体外免疫诱导活性和其相关细胞信号传导通路。结果:组成分析结果表明BFP、F1、F2和F3均为杂多糖且单糖组成存在较大差异。细胞模型结果表明,BFP、F1、F2和F3在所测定质量浓度范围(0～100μg/mL)均显著诱导RAW264.7细胞活化,释放NO和分泌TNF-α,而不诱导ROS的产生。细胞信号传导通路抑制试验结果表明BFP具有体外免疫诱导活性与细胞的NF-κB、JNK MAPK、ERK MAPK和p38 MAPK信号通路的激活相关;F1与细胞的NF-κB、JNK MAPK、ERK MAPK和p38 MAPK信号通路的激活有关;而F2和F3作用机制相似,分别与细胞的NF-κB、JNK MAPK和ERK MAPK信号通路的激活相关。结论:红毛藻多糖具有显著的体外免疫诱导活性,其中分级纯化多糖组分F1和F2是BFP中主要的免疫诱导活性组分;BFP、F1、F2和F3诱导RAW264.7细胞活化释放NO的共同的信号传导通路主要有两条:即NF-κB和JNK MAPK信号途径;而诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α的共同信号通路主要是JNK MAPK和ERK MAPK信号途径。     

点柄乳牛肝菌多糖的结构表征及其免疫调节活性的研究

为探究点柄乳牛肝菌多糖的结构特性和免疫调节活性,本研究以点柄乳牛肝菌为材料,经水提醇沉、除蛋白、柱层析分离得到SGP3-1和SGP3-2两个多糖纯化组分。利用高效渗透凝胶色谱（HPGPC）、高效液相色谱（HPLC）、傅里叶红外（FT-IR）、核磁共振波谱（NMR）、X-射线衍射（XRD）等方法表征,结果表明:SGP3-1和SGP3-2的重均分子量（Mw）分别为170.48和14.52 kDa,二者均是无定形态,不含三螺旋结构,SGP3-1以α-构型糖基为主,单糖组成以葡萄糖（55.47%）、甘露糖（20.63%）及半乳糖（14.04%）为主;而SGP3-2以β-构型糖基为主,单糖组成以葡萄糖（82.43%）为主。小鼠单核巨噬细胞RAW264.7体外实验结果表明,SGP3-1和SGP3-2在5~40 μg/mL浓度范围内无细胞毒性,能够增加RAW264.7细胞吞噬活性,均可通过激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）及核因子-κB（NF-κB）信号通路,促进一氧化氮（NO）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）产生,从而发挥免疫调节作用,且SGP3-2的免疫调节活性强于SGP3-1,表明SGP3-1和SGP3-2可用于开发功能性食品,作为免疫力低下人群的膳食补充剂,为点柄乳牛肝菌的进一步开发提供理论依据和研究基础。     

大枣多糖抗氧化及抗炎活性的研究

本研究通过建立1,1-二苯基-2-苦基肼基(DPPH)自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基、羟基自由基、还原力等4种体外模型研究大枣多糖的抗氧化活性;建立脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7模型研究大枣多糖的抗炎活性。实验结果表明,大枣多糖具有较强的抗氧化活性,对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的半抑制浓度IC50分别为0.9、2.8、1.1 mg/m L;总还原力为1.0时,对应的Vc和大枣多糖浓度分别为0.08 mg/m L和2.95 mg/m L,大枣多糖的抗氧化活性呈浓度依赖性。高剂量的大枣多糖能够显著降低RAW264.7细胞中炎症因子如环氧合酶-2(COX-2),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,表明大枣多糖具有较强的抗炎活性。大枣多糖可望作为抗氧化剂和抗炎制剂应用于功能性食品和医药工业。     

金针菇多糖-Zn~(2+)螯合物对L929肿瘤细胞的增殖抑制作用及其抗氧化活性

比较研究金针菇多糖-Zn~(2+)螯合前后的抗肿瘤作用与其体外抗氧化活性。通过小鼠成纤维肉瘤细胞L929培养实验,观察不同质量浓度金针菇多糖溶液对体外培养L929细胞形态的影响,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验评价金针菇多糖对L929细胞生长和增殖的影响。结果表明:在质量浓度为5~50μg/mL时,金针菇粗多糖及其纯化组分对L929细胞的抑制作用不强烈,金针菇多糖-Zn~(2+)对L929细胞有较强的抑制作用。相比较金针菇多糖直接作用于L929细胞,金针菇多糖介导的RAW 264.7巨噬细胞上清液对L929细胞的抑制率作用显著增强。同时,以对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧阴离子自由基(O_2~-·)、羟自由基(·OH)、H_2O_2的清除率为评价指标,体外抗氧化实验结果显示金针菇多糖-Zn~(2+)抗氧化活性较螯合Zn~(2+)前有所提高。即金针菇多糖中Zn含量的提高有助于提升其抗氧化活性。     

醋蛋液对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的影响

采用细胞计数试剂盒（CCK）-8法检测不同剂量的醋蛋液对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的影响,倒置显微镜及荧光显微镜下分别观察不同分组条件下对RAW264.7细胞形态的影响及细胞核的损伤程度,探讨醋蛋液对RAW264.7细胞分泌免疫因子的影响及其免疫调节活性的机理。结果表明,当醋蛋液浓度为40 μL/mL时,RAW264.7细胞活性极显著升高为（145.3±23.02）%（P＜0.01）。醋蛋液高剂量组（20 μL/mL）巨噬细胞体积变大并逐渐伸出伪足,与正常细胞有明显差异,但未达到炎症相关形态学特征;醋蛋液高剂量组（20 μL/mL）可以促进巨噬细胞分泌白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和一氧化氮（NO）分泌,可以有效缓解巨噬细胞细胞核损伤、细胞膜电位降低造成的细胞损伤及细胞凋亡;醋蛋液高剂量组（20 μL/mL）可以上调蛋白激酶B（AKT）以及核因子-κB（NF-κB）的表达量,进而激活巨噬细胞,调节机体免疫力。     

蛹虫草多糖调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的分子机制

多种真菌多糖近年来因其免疫调节活性成为保健食品领域研究的热点。本实验以食药用真菌蛹虫草提取物蛹虫草多糖（Cordyceps militaris polysaccharides,CMP）为研究材料,初步探究CMP对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的调节机制。噻唑蓝实验结果显示CMP无细胞毒性,且100、200 μg/mL CMP可以明显增强RAW264.7细胞活性;中性红法、Griess法和酶联免疫吸附检测结果表明25～200 μg/mL的CMP以剂量依赖方式增强RAW264.7细胞吞噬活性并增加一氧化氮（nitric oxide,NO）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）分泌,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌呈先升高后降低的趋势,在100 μg/mL时达到最高值;抑制剂中和实验结果显示当Toll样受体4（Toll-like receptors 4,TLR4）和甘露糖受体（mannose receptor,MR）受到抑制时,CMP诱导的RAW264.7免疫反应显著降低,这表明TLR4和MR均为CMP激活巨噬细胞的受体;此外,Western blot结果显示丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路也参与CMP诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β。表明TLR4和MR/MAPK信号传导途径在CMP诱导巨噬细胞RAW264.7产生免疫应答时发挥了重要作用。     

美藤果粕可溶性膳食纤维的抗氧化及免疫活性评价

本研究对美藤果粕可溶性膳食纤维（sacha inchi soluble dietary fiber，SISDF）进行了抗氧化和免疫活性评价。利用离子色谱、凝胶色谱和傅里叶变换红外光谱等方法对SISDF结构进行表征。结果表明：SISDF的重均分子质量为401 479 Da，是以吡喃糖为主链的大分子多糖。单糖组成中，半乳糖醛酸相对含量最大（46.49%），其次为鼠李糖（18.95%）、木糖（17.60%）和半乳糖（11.25%）等；当SISDF的质量浓度为2 mg/mL时，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除率为68.57%、羟自由基清除率为69.83%、2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）阳离子自由基清除率为70.35%，表现出一定的抗氧化能力；在62.5～1 000 μg/mL质量浓度范围内，SISDF能够极显著增强RAW264.7巨噬细胞的增殖活性和吞噬活性（P＜0.01），提升RAW264.7巨噬细胞的一氧化氮、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）因子分泌水平。SISDF具有良好的抗氧化活性和免疫活性，具备开发为天然食品抗氧化剂和消炎保健品的潜力。     

银杏花粉黄酮苷的恶味乳杆菌B2生物转化产物及其抗氧化活性评价

目的：研究恶味乳杆菌B2（Lacbacillus perolens B2）生物转化对银杏花粉黄酮组分及其抗氧化活性的影响。方法：分析银杏花粉及其生物转化产物的提取物和各自石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物的得率和高效液相色谱图,通过2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力评价其体外抗氧化活性,通过对H2O2损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用评价其细胞抗氧化活性。结果：通过L. perolens B2的生物转化,提取物及各相萃取物得率均有所提高,银杏花粉主要黄酮苷被转化为以山柰酚为代表的黄酮苷元,并富集于乙酸乙酯萃取相。体外抗氧化活性评价显示,通过L. perolens B2的生物转化,提取物和各相萃取物的体外抗氧化能力均得到提高,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物的体外抗氧化活性最高。细胞实验显示,供试的银杏花粉及其生物转化产物的提取物和各自的乙酸乙酯相萃取物均可减缓由H2O2损伤导致的RAW264.7细胞凋亡,并且存在剂量依赖关系。生物转化产物的提取物及乙酸乙酯相萃取物对H2O2损伤RAW264.7细胞的保护能力均高于对应的银杏花粉样品,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物保护能力最强,当其质量浓度为15 μg/mL时,几乎可以完全保护RAW264.7细胞不受H2O2损伤。结论：通过L. perolens B2的生物转化,银杏花粉主要黄酮苷被转化为以山柰酚为代表的黄酮苷元,提取物及各相萃取物的得率、体外抗氧化活性及对H2O2诱导损伤的RAW264.7细胞的保护作用均显著提高（P＜0.05）,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物抗氧化活性最高。     

滁菊多糖结构特性及其免疫活性研究

目的 分离纯化滁菊多糖(Chuzhou chrysanthemum polysaccharides, CCPS),对其进行结构解析,并研究其免疫活性。方法 以滁菊为原料,热水浸提,乙醇沉淀得到CCPS;通过快流速二乙氨基乙基-琼脂糖凝胶(diethylaminoethyl-sepharose fast flow, DEAE-FF)和葡聚糖凝胶G-100 (Sephadex G-100)层析柱分离纯化CCPS,得到中性多糖CCPS-1-1。用高效液相色谱法、紫外和红外光谱法、刚果红实验等进行CCPS-1-1结构解析,建立小鼠单核巨噬细胞(mousemononuclearmacrophagescells,RAW264.7)的免疫模型探究其免疫刺激活性。结果 CCPS-1-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,具有三股螺旋结构。体外免疫活性实验表明,CCPS-1-1可以促进RAW264.7细胞的增殖和吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮(nitricoxide,NO)的分泌及细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞...     

水溶性豆渣酸性多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用及其机制

研究水溶性豆渣多糖(water-soluble soybean polysaccharides,SSPS)对RAW264.7细胞的免疫调节作用.首先,以NO浓度为指标,明确SSPS、水溶性豆渣酸性多糖A1(soluble soybean acidic polysaccharide A1,SSPS-A1)和水溶性豆渣酸性...     

鹿胎肽对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

本实验从鹿胎中提取鹿胎肽（DFP）,通过体外实验研究其对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。采用噻唑蓝（MTT）实验检测超滤组分各肽段的增殖活性,筛选增殖活性高的组分。选用中性红吞噬实验、酶联免疫吸附检测法测定DFP对RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮（NO）浓度及细胞因子如白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌能力,同时还研究了DFP对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于1 kDa的DFP-5对巨噬细胞RAW264.7作用后,可显著（P<0.05）提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且在DFP-5质量浓度为25 μg/mL时效果最好。细胞周期结果表明,DFP-5能够促进RAW264.7细胞的生长,且主要作用在G0/G1期。以上结果表明,鹿胎肽具有增强免疫能力的潜在作用。     

不同食用菌多糖复配物对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖（Tremella fuciformis polysaccharide）、茯苓多糖（Poriacocos polysaccharide）、香菇多糖（Lentinan）、猴头菇多糖（Hericium edodes polysaccharide）和竹荪多糖（Dictyophora indusiata polysaccharide）任意3种多糖复配得到的多糖复配物的免疫调节活性。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的复配物对巨噬细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法测定复配物处理后细胞培养液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）水平,以及流式细胞仪分析复配物处理后细胞吞噬能力。结果:与正常对照组相比,除了浓度为320 μg/mL的茯苓多糖、香菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物,茯苓多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物以及香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物外,在检测浓度范围内10种多糖复配物可明显促进巨噬细胞的增殖,增强吞噬能力,提高细胞因子TNF-α的分泌量。其中,10 μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和竹荪多糖的复配物促进巨噬细胞增殖的效果最佳,160 μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和香菇多糖的复配物能最好的促进TNF-α的分泌和增强RAW264.7的吞噬能力。结论:不同食用菌多糖的复配物均可调节巨噬细胞RAW264.7的免疫活性。本结果可为开发免疫调节功能的食用菌复配多糖产品提供数据参考。     

铁皮石斛多糖化学修饰及其对免疫活性的影响

采用水提醇沉法结合冻融制备高纯度铁皮石斛多糖,并利用硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰方法对铁皮石斛多糖进行化学修饰,探讨不同方法修饰的铁皮石斛多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫活性影响。结果表明,铁皮石斛纯多糖(purified polysaccharides of Dendrobium officinale,DOP)的中性糖含量较高,而糖醛酸及蛋白质含量则较低,分别为87.37%、3.19%和0.51%,羧甲基化及硫酸化显著降低了铁皮石斛多糖的中性糖含量。红外分析结果显示硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰衍生物均已成功制备。高性能凝胶渗透色谱法测定铁皮石斛多糖分子质量为960 k D,硫酸化及羧甲基化修饰显著增加了其分子质量。体外实验研究发现,硫酸化和脱乙酰化修饰的铁皮石斛多糖能够增强RAW264.7巨噬细胞的免疫活性,而羧甲基化修饰则表现为显著的抑制作用,表明不是所有的官能团接枝改性都可以改善铁皮石斛多糖对免疫活性的影响。     

5种食用菌水提物生物活性的比较

目的：探究并对比草菇、灰树花、红菇、鸡腿菇、树舌5种食用菌水提物的抗氧化、免疫及辐射防护作用,为食用菌的开发利用提供理论依据。方法：采用苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法、福林-酚法及氯化铝法分别检测5种食用菌水提物中总糖和粗多糖、总蛋白、总酚、总黄酮的质量分数;以2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二胺盐(2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力、2,2-联苯基-1-苦基肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力、羟自由基清除能力、总还原力4种抗氧化活性指标研究食用菌水提物的体外抗氧化能力;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测食用菌水提物对巨噬细胞RAW264.7的促增殖活性;并以⁶⁰Co γ辐射氧化损伤小鼠肝细胞AML-12为模型,探究5种食用菌水提物的体外辐射防护作用。结果：草菇、灰树花、红菇、鸡腿菇、树舌5种食用菌水提物的主要成分中总糖含量占比最高,相应的总糖质量分数...     

西兰花萝卜硫苷提取物的抑菌及体外免疫活性探究

该研究以西兰花为研究对象,采用水提法对其中的萝卜硫苷(glucoraphanin,GRA)进行提取,通过冷冻干燥法制备萝卜硫苷提取物(glucoraphanin extract,GRAE)。对GRAE中的主要成分进行分析,其中含有GRA(2.04±0.10)%、多糖(27.48±1.84)%、多酚(31.2±1.6)%、糖醛酸(0.78±0.05)%、蛋白质(28.46±0.75)%等成分。然后,对GRAE的抑菌及体外免疫活性进行初步探究。抑菌试验结果表明:在1000μg/mL的作用浓度下,GRAE对3株致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌)的抑菌圈直径分别为(19.21±0.29)、(19.10±0.42)、(16.78±0.86)mm;最小抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值分别为62.5、31.25、250μg/mL。这说明GRAE对3株致病菌均有一定的抑制作用,且对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制效果优于金黄色葡萄球菌。此外,体外免疫调节活性试验表明:在100μg/mL的GRAE作用下,巨噬细胞株(RAW264.7)的细胞活度为(157.6±3.5)%,吞噬能力(A490为0.926±0.035)较空白组(A490为0.543±0.014)提升了1.7倍,说明GRAE对于RAW264.7细胞株的增殖和吞噬活性均有一定的促进作用。     

知母多糖复合酶提取工艺优化及其免疫活性

本文对知母多糖的提取工艺及体外免疫活性进行研究,为知母多糖的开发利用提供理论依据。试验以复合酶提取知母粗多糖,在正交试验确定复合酶比例的基础上,通过单因素实验和响应面优化试验,确定知母多糖的最佳提取工艺;采用DEAE-52纤维素层析柱进行分离得到4种多糖组分APSE-0、APSE-1、APSE-2和APSE-3。以RAW264.7巨噬细胞为研究模型,采用MTT法、Griess法测定知母多糖各组分对细胞增殖能力和一氧化氮（NO）释放量的影响。结果表明,最佳复合酶比例为:木瓜蛋白酶16000 U/g,纤维素酶1200 U/g,果胶酶1600 U/g。最优提取工艺为酶解时间2 h,液料比15:1（mL/g）,酶解温度52 ℃,在此条件下得率为（10.58%±0.03%）。体外免疫活性实验结果证明,四种知母多糖组分均能明显促进RAW246.7巨噬细胞的增殖,APSE-0、APSE-2和APSE-3均可极显著诱导NO的释放,其中,APSE-2的免疫活性最强,可作为潜在的功能性食品或作为免疫力低下人群的膳食补充剂。剂。     

Comparison of Immunomodulatory Effects of Fresh Garlic and Black Garlic Polysaccharides on RAW 264.7 Macrophages

Garlic has a long history to be used for medicine and food purposes. Black garlic, the fermented product of fresh garlic, is considered with better biological activities, such as antioxidant activity, and is developed as an increasingly popular functional food. Polysaccharides are the major components of fresh and black garlic, and immunomodulatory activity is one major pharmacological effect of polysaccharides. Therefore, chemical characteristics and immunomodulatory effects of polysaccharides from fresh and black garlic are investigated and compared in vitro for the 1st time, in order to reveal their molecular and pharmacological differences. It is demonstrated that the molecular weights of polysaccharides from the 2 sources and molar ratios of monosaccharides after acid hydrolysis are greatly variant. The effects of polysaccharides from 2 sources on RAW 264.7 macrophages functions, including promotion of phagocytosis, release of NO, and expressions of several immune‐related cytokines (including interleukin [IL]‐6, IL‐10, tumor necrosis factor alpha, and interferon gamma), were different from each other. The results indicated that fresh garlic polysaccharide exhibited stronger immunomodulatory activities than that of black garlic. Moreover, it is revealed that fructan might be the bioactive component in garlic and it is indicated that during the fermentation treatment, fructan constituents of garlic has degraded, and basically no immunomodulatory effect can be found in black garlic polysaccharides.