高产EPS乳酸片球菌的航天育种及其EPS性能研究

本文旨在对乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）进行航天诱变，筛选高产胞外多糖（Exopolysaccharide,EPS）的诱变菌株，并探究其产EPS的功能特性。通过测定EPS产量和遗传稳定性，筛选出一株性能稳定并高产EPS的L21-49菌株，比较了原始菌株及突变菌株的自聚性和疏水性，以及对酸、胆盐及人工模拟胃、肠液的耐受性，并分析其产EPS的抗生物被膜、抗氧化活性和对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的抑制效果。结果表明，菌株经航天诱变后，EPS产量为196.23 mg/L，比原始菌株L21产量提高了26.54%；该菌株的自聚性和疏水性良好；体外耐受性较好，在pH为2、3的条件下其活菌数可维持在107 CFU/mL；在胆盐浓度为4.00 g/L时，其活菌数可保持在107 CFU/mL；经过人工模拟胃肠液处理，该菌株活菌数可维持在106 CFU/mL，其所产EPS具有良好的体外抗氧化能力：浓度为8.0 mg/mL时，对DPPH自由基、OH自由基、ABTS+自由基和O 2-自由基的清除率分别为91.75%、38.44%、54.71%、58.84%；对金黄色葡萄球菌（St...     

生物降解呕吐毒素的肠杆菌筛选与鉴定

呕吐毒素,又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）,主要污染小麦和大麦等作物。为了筛选得到具有呕吐毒素降解能力的菌株,实验搜集了50份土壤,通过菌株的富集、筛选和纯化得到一株白色菌株,命名为W-D,该菌株能在无机盐培养基中以DON（20 μg/mL）作为唯一碳源进行生长。对分离得到的菌株进行DON毒素降解能力检测发现,在37 ℃、180 r/min下作用于60 μg/mL的DON,经过7 d反应降解率可达40.40%。对该菌株进行相关鉴定,发现该菌株为革兰氏阴性菌,显微镜下呈短杆状,扫描电镜观察菌株为形状不一的杆状结构,大小约为0.5×(1.0~3.0) μm。生理生化鉴定结果表明W-D基本符合肠杆菌的特征。对W-D的DNA进行PCR扩增16S rDNA得到一段长度约为1500 bp的片段,测序后进行同源性分析表明该菌株属肠杆菌Enterobacter,与阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae的亲缘关系最近。     

耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的大量泥土和水样中，筛选出一株在60℃生长的纤维素酶产生菌SH2。结合菌株的生理生化特性分析与Biolog微生物自动鉴定仪的鉴定结果，命名为热葡糖苷酶地芽孢杆菌（Geobacillus thermoglucosidasius）SH2，该菌株兼性好氧，在45～60℃能较好地生长。对菌体生长与产酶培养条件优化表明：初始pH值为5．5，碳、氮源分别为蔗糖和玉米浆时有利于产酶，经48h发酵后纤维素酶酶活达0．36IU／mL。纤维素酶反应条件研究表明，该纤维素酶的最适pH值为6．0，在pH4．0～10．0范围具有较强的耐受性；在45～65℃间酶活差异仅在5％之内，显示了很好的温度耐受性。     

低温纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

从连云港高公岛海域采集海水和海泥样品,通过2216E平板初筛和摇瓶发酵复筛,得到一株产纤维素酶的菌株Z6。对该菌生物学特性进行研究,菌株Z6为革兰氏阴性杆状细菌、有荚膜、无芽孢。菌的生长温度范围为4～35℃,最适生长温度为25℃;最适生长pH为8;最适NaCl浓度为3%。根据其形态特征、生理生化特性和16SrRNA序列分析结果,初步鉴定为交替假单孢菌属(Pseudoalteromonassp.)。根据菌株16SrRNA同源性和系统进化树分析进一步鉴定菌株Z6属于Pseudoalteromonas carrageenovora。目前尚无Pseudoalteromonas carrageenovora产生低温纤维素酶的报道。菌株Z6所产纤维素酶的最适作用温度和pH分别为30℃和pH8,在10℃仍具有较高活性,具有较大的潜在工业应用价值。     

窖泥中高产丁酸梭菌的筛选、鉴定及其生长耐受性研究

从浓香型白酒窖泥中通过传统微生物分离手段筛选高产丁酸的梭菌,并对分离菌株进行形态学观察、分子生物学鉴定及生长耐受性分析研究。结果表明,通过发酵产物检测获得两株高产丁酸菌株,编号为AB2RH027和AB2RH033,经过菌落观察、革兰氏染色及分子生物学鉴定两株菌均为丁酸梭菌（Clostridium butyricum）。通过耐受性实验,确定菌株AB2RH027最适生长pH值为8,最适生长温度为40 ℃,酒精耐受性为15%vol,发酵24 h丁酸产量为5.29 g/L;菌株AB2RH033最适生长pH值为8,最适生长温度为35 ℃,酒精耐受性为18%vol,发酵24 h丁酸产量为5.23 g/L。该研究筛选得到的两株高产丁酸的菌株在白酒品质提升方面具有一定应用价值。     

1株产类胡萝卜素盐盒菌的分离鉴定及培养条件优化

对分离自运城盐湖黑泥中的一株产类胡萝卜素嗜盐菌G14进行分离鉴定,经菌落形态观察、生理生化特性及16S rRNA基因 序列分析,确定该菌株隶属于盐盒菌属（Haloarcula sp.）。 通过单因素与正交试验对菌株G14的培养条件进行优化。 结果表明,菌株G14 最佳培养条件为NaCl质量浓度0.23 g/mL,初始pH值为7.0,43 ℃光照培养。 在此优化条件下,培养的菌液OD600 nm值达2.24,类胡萝卜素 产量为0.65 mg/L。     

高产胞外多糖乳酸菌菌株的筛选及鉴定

文章旨在筛选分离得到具有高产胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)性能的乳酸菌。以新鲜水果及醪糟为研究对象，通过涂布、三区划线分离筛选，从人参果中得到一株高产EPS的乳酸菌菌株RSG7，其EPS产量为47.384 g/L。对其进行形态学、16S rDNA测序以及同源性分析，结果显示该菌株为Leuconostoc mesenteroides，并命名为Leu. mesenteroides RSG7。生物学特性分析表明，Leu. mesenteroides RSG7菌株能利用蔗糖、乳糖、麦芽糖、赤藓糖醇、山梨醇、D-果糖、D-核糖、D-甘露糖、D-木糖、海藻糖、D-棉子糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖、鼠李糖和水苏糖，生长的最佳时间是13 h，最适pH值为7.0～8.0,NaCl、尿素、胆盐等耐受性分别为0%～4%、0%～2%和0%～0.05%。这些良好的特性可为新型优质益生菌资源的开发及乳酸菌EPS商业化的应用提供理论基础。     

山茱萸中有益菌的分离和鉴定

将药用植物山茱萸作为有益菌的分离源,以获得常见有害菌的抗性菌,提高山茱萸的利用价值。以马铃薯葡萄糖琼脂和营养琼脂平板分离、纯化其体外真菌和细菌,对获得的菌株进行黑曲霉、黄曲霉和大肠杆菌等有害菌的对峙实验,并对抗性菌进行分子生物学和生理生化的种属鉴定。实验结果表明：从山茱萸中分离纯化28株菌（12株细菌、16株真菌）,其中2株菌对黑曲霉、黄曲霉有一定的抑菌效果,经分子生物学和生理生化实验鉴定,菌株S136是肠杆菌属（Enterobacter sp.）、菌株S138是芽孢杆菌属（Bacillus sp.）的细菌。     

不同时期鲳鱼冷藏期间优势腐败菌的多样性变化

目的：比较分析不同时期冷藏鲳鱼（Pampus argenteus）贮藏期间的感官品质、pH值、微生物指标与主要微生物菌群的变化规律。方法：冷藏（4±1） ℃条件下,以感官评定、pH值与菌落总数为品质评价指标,采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增结合生理生化鉴定法分别对冬、春两个时期的鲳鱼进行优势腐败菌的变化规律研究。将经细菌培养与分离纯化得到单菌落按其形态特征进行分类,再通过生理生化鉴定与革兰氏染色,初步得到菌落种类,对单菌落进行DNA提取与PCR扩增并测序。结果：冬季样品获得12 种菌株,春季样品获得9 种菌株。贮藏末期时,冬季样品中优势腐败菌的种类与比例分别为嗜冷杆菌（Psychrobacter spp.）21.51%、草莓假单胞菌（Pseudomonas fragi）16.13%、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）52.68%与热杀索丝菌（Brochothrix thermosphacta）9.68%;春季样品为草莓假单胞菌（Pseudomonas fragi）8.62%、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）64.66%与腐败希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）26.72%。结论：冬、春时期中冷藏鲳鱼贮藏期间优势腐败菌的种类基本一致,以革兰氏阴性菌为主,但在细菌种类与比例上存在差异,冬季样品的微生物种类较春季丰富。贮藏期间,随着荧光假单胞菌所占比例的增加,使腐败希瓦氏菌的生长受到明显抑制。     

酱香型白酒酿造酒醅中产香芽孢杆菌的分离鉴定

为了改善并增强酱香型白酒香气,使其具有独特的风味特征,本研究从七轮次混合酒醅中分离到的7株菌中筛选到一株产香性能较优的菌株DAI bj-1。通过观察该菌株在肉汤琼脂培养基上的菌落形态及细胞形态特征（革兰氏染色为阳性）,初步判断该菌为革兰氏阳性菌。通过革兰氏阳性菌鉴定卡（GP）、芽孢菌鉴定卡（BCL）等生理生化实验结果,PCR扩增、上机测序以及系统发育树的构建分析,该菌株与标准菌株序列的相似性为99.93%,即酒醅中分离筛选到的菌株DAI bj-1为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。     

烧鸡中产芽孢菌的分离鉴定及耐受性比较研究

从烧鸡中筛选出产芽孢菌,探究高温巴氏杀菌后烧鸡腐败的主要原因。利用划线纯化法、革兰氏染色法结合芽孢染色法从烧鸡及其卤汤中筛选出产芽孢菌,然后对菌株进行16S rRNA分析及生理生化鉴定,确定菌株的种属,并对菌株的生长曲线及耐盐、耐酸和耐热性进行研究。结果表明：从烧鸡及其卤汤中共筛选分离出4 株革兰氏阳性芽孢杆菌,分别为海水芽孢杆菌（Bacillus aquimaris）、黄海芽孢杆菌（Bacillus marisflavi）、甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）和地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其中,地衣芽孢杆菌的生长繁殖速度最快,至6 h就基本进入生长稳定期;海水芽孢杆菌和黄海芽孢杆菌的耐盐性最强,在NaCl质量浓度达到12 g/100 mL时仍然有部分存活;甲基营养型芽孢杆菌的耐酸性最强,在pH值4.5条件下培养6 h后菌落数能够达到约8（lg（CFU/mL））;在4 株产芽孢菌中,地衣芽孢杆菌的耐热性最强,且不受处理温度和时间的影响。     

水牛乳中高产胞外多糖乳酸菌的筛选与鉴定

从生水牛乳中筛选出两株高产胞外多糖（EPS）的乳酸菌株LB2、LB7,经MRS肉汤培养基发酵后,菌液中的胞外多糖（EPS）产量分别达135 mg/L、148 mg/L,通过形态学、生理生化特征、API细菌鉴定系统、16S rRNA序列分析,鉴定出菌株LB2为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,LB7为类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）。将其应用到水牛乳酸奶的发酵中,结果表明,植物乳杆菌LB2和类肠膜魏斯氏菌LB7均可用来发酵水牛乳酸奶,且能有效增加酸奶的黏度和胞外多糖产量,其黏度和EPS产量分别为4 050 mPa·s和149 mg/L。     

自然发酵黄豆酱中嗜盐乳酸菌的分离、鉴定与筛选

从黑龙江省8个地区采集到11份自然发酵黄豆酱样品并分离出28株嗜盐细菌，经鉴定全部为四联球菌属乳酸菌。通过测定各菌株在不同培养时间和含高浓度21％NaCl培养液的OD直和pH值，从中筛选出一株耐盐性最好、活力旺盛且产酸能力强的菌株（T5），经生理生化鉴定其为嗜盐四联球菌。     

陕西泡菜中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选及其发酵特性与耐受性研究

为从泡菜中筛选出具有较强亚硝酸盐降解能力且能应用于泡菜发酵的乳酸菌,从陕西家庭自制泡菜中筛选出了1株菌PC5。菌株PC5通过生化鉴定和16S rDNA测序鉴定为植物乳杆菌。对菌株PC5的发酵特性进行研究,结果显示菌株PC5发酵24 h后,发酵液pH值为3.73±0.01,滴定总酸为(1.99±0.01)%。菌株PC5在含有150 mg/L NaNO 2的培养基中培养24 h,亚硝酸盐降解率可达到(99.37±0.56)%。对菌株PC5的耐受性进行研究,结果表明菌株PC5对ρ(NaNO₂)≤200 mg/L和ρ(NaCl)≤60 g/L有较强的耐受性。菌株PC5具有较好的发酵特性和耐受性,可作为泡菜接种发酵菌株。     

海洋红球菌分离鉴定及其产油脂和色素的研究

该研究从海洋环境中分离到一株橙黄色细菌,编号TH-22,经形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析鉴定,该菌归属于赤红球菌（Rhodococcus ruber）。通过单因素实验确定菌株TH-22的培养条件,并初步研究其利用多种糖类物质产油脂和色素的潜力。结果表明,在10 g/L葡萄糖作为碳源、培养温度35 ℃、摇床转速150 r/min、初始pH为7.5和NaCl含量为1%的条件下发酵5 d,油脂和色素的产量最高,分别为（2.87±0.15） g/L和（3.89±0.28） mg/L。菌株TH-22能够利用多种糖类物质产油脂和色素,为进一步开发研究红球菌利用木质纤维素等生物质资源提供科学依据。     

产胞外多糖罗汉果内生菌的筛选及其发酵条件优化

该研究利用α-萘酚-硫酸法和苯酚-硫酸法从罗汉果中筛选产胞外多糖的内生菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并采用单因素和正交试验对其产胞外多糖的发酵条件进行优化。结果表明,筛选到一株产胞外多糖的罗汉果内生菌株,编号为LHG-3,并被鉴定为韦德曼尼芽孢杆菌（Bacillus wiedmannii）。菌株LHG-3产胞外多糖的最佳培养基为超级肉汤（TB）培养基,在此基础上,经优化得出最优发酵条件为蔗糖2.5%、尿素1.2%、氯化钙0.4%、pH值7.0、接种量8%,在30 ℃条件下培养42 h后,胞外多糖产量达到（1.59±0.03）mg/mL,是优化前的1.9倍。     

一株产低温碱性蛋白酶海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407的筛选与生长特性

对从连云港海域筛选的一株产低温碱性蛋白酶的海洋适冷菌HH407进行鉴定和生长特性研究结果表明,该菌为革兰氏阴性杆菌,好氧,端生鞭毛,无芽孢及荚膜,大小为0.4～0.7μm×1.0-1.8μm,在酪蛋白培养基的菌落特征为椭圆金黄色、光滑、半透明、四周隆起.根据其生理生化性质、16S rDNA 同源性和系统进化树分析初步鉴定该菌属于 Pseudoalteromonas flavipulchra.该菌的生长温度范围为0～40℃,最适生长温度为20℃;pH范围为5.5～11.0,最适生长pH值为8.5;NaCl质量浓度范围为0.5～13 g/dL,最适生长NaCl质量浓度为4 g/dL,无NaCl时不能生长.该菌能较好利用胰蛋白胨、酵母膏和蛋白胨等蛋白质物质,对糖的利用较差.该菌株所产蛋白酶在pH 10.0和35℃时表现最高酶活.     

嗜盐性乳酸菌的生理与分子生物学鉴定

对从酱醅中分离筛选出的耐高渗嗜盐性乳酸细菌, 进行了生理生化鉴定, 结果如下：该菌革兰氏染色呈阳性,过氧化氢酶反应呈阴性,可以在pH 5.0下生长, 在18%或更高的NaCl浓度中能够正常生长代谢, 从葡萄糖主要产L（＋）乳酸,属于四联球菌属的嗜盐性乳酸球菌. 进一步对该菌进行分子生物学鉴定,测得菌株的16S rRNA序列与GenBank登记号为FSB201的嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophilus）具有99%的同源性.再将该16S rRNA序列与乳酸菌分类中17个模式菌株的16S rRNA序列共同创建进化树,发现筛选菌与GenBank登记号为AB106344、AB106343的嗜盐四联球菌亲缘关系最近,证明筛选菌应属四联球菌属中嗜盐四联球菌中的一种。     

蔗糖酶产生菌的分离鉴定及酶学性质的研究

以蔗糖为唯一碳源筛选培养基,从高糖土壤筛选出1株分离出一株产蔗糖酶活力较高的细菌菌株,编号为L23。根据生理生化特性和16S rDNA序列,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。对该菌所产蔗糖酶的性质研究结果表明:酶的最适pH为3.6,最适反应温度为40℃,在30~40℃范围内稳定。     

生物合成天然2-苯乙醇细菌的筛选及合成途径分析

从上海国家森林公园土壤样本中筛选到1?株菌株,经过生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,该菌属肠杆菌属并命名为Enterobacter sp. MF024。Enterobacter sp. MF024全基因组测序结果表明该菌株包含从头合成途径和艾氏途径合成2-苯乙醇所有关键酶的编码基因。分别以葡萄糖、L-苯丙氨酸为底物进行生物转化实验,并以苯乙醛、苯丙酮酸等合成途径中间产物为底物进行验证,气相色谱-质谱法、红外光谱分析结果进一步说明Enterobacter sp. MF024具备两种2-苯乙醇合成途径,且该菌利用从头合成途径和艾氏途径产2-苯乙醇产量分别达到0.56、1.15 g/L。该菌株以葡萄糖为碳源生物合成2-苯乙醇极具应用前景。