复合酶解可溶性蛋膜蛋白制备多肽的工艺优化

为研究蛋膜蛋白的利用,采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶及胃蛋白酶进行单一酶解筛选实验,然后进行复合酶解实验。采用二次正交旋转组合设计,以水解度、氮收率为指标,研究酶制剂种类、加酶方式、复合酶比例、总加酶量、酶解时间、pH 值及温度对制备多肽工艺的影响。综合考虑水解度和氮收率因素,最终确定复合酶解可溶性蛋膜蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：总加酶量16000U/g,并以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活力配比为8:2 先后加入;酶解时间为碱性蛋白酶2h、木瓜蛋白酶1h;pH 值为碱性蛋白酶9.0、木瓜蛋白酶5.5;酶解温度为50℃。该条件下制备的蛋膜蛋白酶解产物水解度和氮收率分别为46.12%、85.56%。     

双酶法制备红豆多肽的工艺优化及其抗氧化活性

为更好利用红豆蛋白资源,研究酶解制备红豆多肽的工艺方法,该试验以红豆蛋白为原料,选取碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶共5种蛋白酶进行水解,以蛋白水解度为指标筛选出作用较佳的复合酶。在单因素试验的基础上,利用正交试验优化红豆蛋白多肽的制备工艺,以DPPH自由基、·OH、O2-·、ABTS+自由基清除率为测定指标,评价红豆蛋白的抗氧化活性。结果表明：5种蛋白酶中,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合水解制备红豆多肽效果较佳,经过工艺优化后最佳水解工艺为酶活比6∶4,反应pH值7.5,反应温度52℃,底物浓度5%,加酶量800 U/g,反应时间5 h,且抗氧化活性测定结果表明红豆多肽具有一定的抗氧化活性。     

酶法水解玉米蛋白工艺条件的优化

通过对中性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶来水解玉米蛋白粉制备多肽的工艺进行了研究，试验以水解度（DH%）为指标，确定了复合酶解的最佳工艺条件。结果表明：复合酶（中性蛋白酶和木瓜蛋白酶）比例为2：1，底物浓度为10％，pH为7.5，温度为45℃，在此条件下酶解2h，玉米蛋白的水解度达到15.36％。     

酶法水解卵黄蛋白制备多肽的工艺优化

利用酶法制备卵黄蛋白多肽。比较复合风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解卵黄蛋白的效果,确定碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶为复合酶解的工艺用酶。采用响应面分析法,以水解度、多肽含量为响应值,研究加酶量、酶用量比、复合酶解时间比、pH值对制备多肽工艺的影响。结果表明：酶法水解卵黄蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：卵黄蛋白质量浓度10g/100mL、温度55℃、pH7.2,按0.8g/100mL添加碱性蛋白酶水解2h后,再按0.4g/100mL添加复合风味蛋白酶水解2h,在该条件下水解度和多肽含量分别为(13.31±0.5)%和(1.85±0.5)mg/mL。     

响应面法优化双酶水解黄鳍金枪鱼胰脏的工艺研究

本试验以水解度为指标,研究了酶解时间、酶活比、料液比、加酶量、pH和酶解温度6种因素对酶解反应的影响。在此基础上设计了3因素(酶解时间、pH和酶解温度)3水平的响应面试验,对木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶双酶组合水解黄鳍金枪鱼胰脏制备生物活性肽的工艺进行优化,为获得高活性蛋白多肽及有效利用金枪鱼胰脏提供科学依据。结果表明,木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶双酶水解黄鳍金枪鱼胰脏的最佳酶解条件为:酶活比1:1、料液比为1:10、加酶量30mg/g、pH7.55、酶解时间3.39h、酶解温度55.73℃。利用优化双酶水解条件制得的低分子多肽的水解度高达60.22%。     

双酶复合水解蜂蛹蛋白工艺研究

研究了脱脂蜂蛹蛋白的酶法水解工艺。以水解度和多肽得率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味酶中选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶进行双酶复合水解。采用单因素与响应面优化设计,得出最佳酶解工艺条件为:复合酶比例1︰1(g/g)、加酶量4.67%、p H 8.27、料液比1︰12(g/m L)、酶解温度48.44℃、酶解时间4 h。此优化试验条件下,蜂蛹蛋白理论水解度46.05%,实际水解度为45.89%。此工艺可推广应用于蜂蛹蛋白多肽产业化生产的备选工艺。     

猴头菌丝多肽的制备及抗氧化活性研究

以还原能力、清除自由基能力以及多肽的含量为评价指标,采用木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶分别水解猴头菌液体发酵菌丝蛋白。结果表明效果最佳的是木瓜蛋白酶。通过控制木瓜蛋白酶加入量、酶解时间、酶解温度以及pH值4个因素的变化,进行4因素3水平的正交试验优化猴头菌丝蛋白的酶解工艺参数。结果表明,影响猴头菌丝抗氧化肽制备的因素为加酶量〉pH〉酶解时间〉温度。确定猴头菌丝抗氧化肽制备的最佳酶解工艺条件：加酶量80 U/mL,酶解时间1 h,酶解温度50℃,酶解pH 6.0,在此条件下猴头菌丝多肽的还原力最强,多肽含量最高。     

液压压榨澳洲坚果粕酶解制备多肽工艺优化

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,分析了其常规营养成分含量与氨基酸组成。采用碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化酶解澳洲坚果粕蛋白制备多肽。以水解度为指标,利用单因素试验与正交试验考察了各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度的影响。结果表明：液压压榨澳洲坚果粕中含有32.25%的蛋白质,17 种氨基酸,含量为25.05%。碱性蛋白酶各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度影响的主次顺序为：酶解时间＞酶解温度＞加酶量＞酶解pH值＞底物质量浓度,最佳工艺条件为：酶解温度60 ℃、酶解时间3.5 h、底物质量浓度110 g/L、酶解pH 8.0、加酶量2 400 U/g,在此条件下水解度达到了22.83%。中性蛋白酶各因素影响水解度的主次顺序为：加酶量＞酶解时间＞底物质量浓度＞酶解温度＞酶解pH值,最佳工艺条件为酶解温度55 ℃、酶解时间3.5 h、底物质量浓度100 g/L、酶解pH 7.0、加酶量3 200 U/g,水解度达到了22.78%。碱性蛋白酶与中性蛋白酶各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度的影响均达到了极显著水平（P＜0.01）。在最佳工艺条件下,碱性蛋白酶酶解液压压榨澳洲坚果粕制备多肽的效果优于中性蛋白酶。     

复合酶分步水解法制备汉麻多肽及其抗氧化特性研究

汉麻籽由于其营养丰富,且不含有胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子,近年来成为食品、医药等领域的研究热点。本研究以汉麻分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶分步酶解的方式对其进行酶解,通过响应面优化酶解参数,制取汉麻多肽。并采用分光光度计测定其DPPH自由基清除率与铁还原能力,对汉麻多肽抗氧化能力进行评价。结果表明,采用先碱性蛋白酶后木瓜蛋白酶的酶解方式,制得的汉麻多肽含量最高。酶解最优条件为:第一步碱性蛋白酶水解:底物浓度为5%,酶解时间2 h,pH为8.5,酶解温度为54℃,加酶量为10100 U/g;第二步木瓜蛋白酶水解:pH为6.5,温度为50℃,加酶量为5000 U/g,酶解时间1.5 h,最终获得汉麻多肽混合物的水解度为24.48%,肽含量为8.48 mg/mL;汉麻多肽的DPPH自由基清除率为82.32%,与汉麻分离蛋白相比具有较强的铁还原能力,表明汉麻多肽具备较强的抗氧化能力。本研究为汉麻多肽的开发利用提供理论基础。     

复合蛋白酶水解螺旋藻制备多肽的工艺优化

螺旋藻富含优质蛋白质,为有效利用这一蛋白质资源,试验探究了复合蛋白酶水解螺旋藻制备多肽的工艺路线。通过单一酶解及复合酶解试验考察了不同蛋白酶对螺旋藻水解效果的差异,以及不同蛋白酶对螺旋藻水解作用的协同效果,由此筛选出适合螺旋藻水解的最佳蛋白酶为:由碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶按酶活比2∶1∶1的比例构成的复合蛋白酶。采用单因素及响应面试验对复合蛋白酶水解螺旋藻的工艺条件进行了优化,得到螺旋藻酶解的最适工艺条件为:螺旋藻浓度50 g/L,pH 9.0,加酶量6 000 U/g蛋白,温度52℃,酶解时间6.2 h。在优化的工艺条件下,水解螺旋藻的多肽得率可以达到(77.82±1.21)%。多肽的氨基酸组成分析结果显示,酶解制备得到的多肽基本上保持了原螺旋藻蛋白的氨基酸组成,氨基酸组成齐全,必需氨基酸占到氨基酸总量的43%以上,具有很高的营养价值。研究结果表明,复合蛋白酶水解螺旋藻制备多肽的工艺路线具有可行性。     

沙蚕多肽提取及功能研究

目的通过研究沙蚕酶解及其多肽产物的功能,提高沙蚕的利用率。方法采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶对沙蚕进行酶解,以水解度为评价指标,比较3种酶解产物的抗氧化活性、总还原力能力和降血糖功能。结果 3种酶中中性蛋白酶在6 h达到最高水解度37.8%。碱性蛋白酶酶解7 h的产物其亚铁离子螯合力最高,可达32.7%;DPPH自由基清除能力最高可达85.8%,为中性蛋白酶酶解6 h的产物;胃蛋白酶酶解6 h产物的总还原力最高;胃蛋白酶酶解3 h的酶解产物其DPP-4抑制率最高,可达52.9%。结论胃蛋白酶更适于沙蚕的酶解。酶解产物具有较理想的抗氧化及降血糖功能,为沙蚕多肽产品的开发奠定基础。     

太平洋鳕鱼排酶解产物的制备及其钙螯合活性研究

目的以太平洋鳕鱼排为原料,制备具有良好钙螯合活性的酶解产物,并对其促钙吸收转运功效进行评价。方法采用动物蛋白水解酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶分别进行水解,比较3种酶解产物的水解度与蛋白回收率,确定最佳水解酶,并研究酶解产物的钙螯合活性与促钙吸收转运活性。结果经动物蛋白水解酶制备的酶解产物水解度与蛋白回收率最高。当酶解时间为320 min时,该酶解产物的钙螯合活性最高。氨基酸分析表明谷氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和苏氨酸等特定氨基酸所占比例较高。该酶解产物对Caco-2细胞无毒性作用,能够明显促进钙转运率。结论太平洋鳕鱼排酶解产物具有较好的钙螯合活性与促钙转运活性。     

米糠肽-铁锌螯合物制备工艺研究

目的 研究米糠蛋白制备米糠肽-铁锌螯合物的工艺。方法 以米糠蛋白为原料,优化米糠肽-铁锌螯合物制备工艺。以亚铁离子与锌离子的螯合率和水解度为评价指标,考察蛋白酶种类、反应物质量比、温度、时间及pH值对米糠酶解产物铁锌螯合率的影响。在单因素试验的基础上,结合JMP软件进行定制试验设计,确定米糠肽-铁锌螯合物的制备工艺。结果 碱性蛋白酶较适宜制备米糠肽-铁锌螯合物,其最佳螯合工艺条件为时间70 min、温度70 oC、反应物质量比3:1、pH 5.0;在此条件下,其产物亚铁离子螯合率达到38.29%、锌离子螯合率达到57.2%,与预测值接近。结论 本研究采用米糠肽同时螯合铁锌2种金属离子,不仅可以充分吸收米糠肽的营养成分,提高消化率,发挥其降血压、降血脂、抗氧化等功能特性,还可以同时补铁、补锌,对人体具有积极作用。     

2种蛋白酶酶解曲拉干酪素条件优化及抗氧化性比较

以曲拉干酪素为原料、水解度为指标,在酶解时间、酶解温度、pH值、曲拉干酪素质量浓度、酶添加量单因素试验基础上,采用响应面试验对碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化,并对2 种酶解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率,Fe2＋、Cu2＋螯合能力和还原力等抗氧化性指标进行比较。结果表明,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分别在酶解时间3.8、2.5 h,酶解温度49.8、47.8 ℃,曲拉干酪素质量浓度60、35 g/L,pH 8.5、7.5,酶添加量140、2 900 U/g时水解度最大,为24.25%和13.57%。碱性蛋白酶解液超氧阴离子自由基清除率、Fe2＋螯合能力显著低于胰蛋白酶解液（P＜0.01）;羟自由基清除能力高于胰蛋白酶解液（P＞0.05）;2 种蛋白酶酶解液在酶解液质量浓度1～5 mg/mL时,Cu2＋螯合能力、DPPH自由基清除率和还原力随质量浓度均呈上升趋势,Cu2＋螯合能力低于Fe2＋螯合能力（P＞0.05）,DPPH自由基清除率和还原力二者差异显著（P＜0.01）。2 种蛋白酶对酶解物抗氧化性指标影响不同,碱性蛋白酶酶解物抗氧化性相对较优。     

莜麦谷蛋白-1酶解物螯合亚铁离子影响因素的研究

采用连续提取法提取莜麦球蛋白、谷蛋白-1、水溶性清蛋白和谷蛋白-2,分析4种蛋白质对亚铁离子的螯合能力,最终筛选出莜麦谷蛋白-1的螯合能力最高(螯合率为29.55%)。以莜麦谷蛋白-1酶解物(naked oat glutelin-1 hydrolysates,NOG-1H)为原料制备肽-亚铁螯合物,并探讨酶的种类、亚铁离子用量、螯合时间等因素对NOG-1H亚铁离子螯合能力的影响。结果表明,莜麦谷蛋白-1经碱性蛋白酶结合风味蛋白酶水解后,水解产物的水解度(15.32%)和亚铁离子螯合能力(45.26%)均最高;当螯合时间为90 min,pH值为2.0、温度为30℃、亚铁离子浓度为1.25 mg/mL时,NOG-1H均表现出较高的亚铁离子螯合率。     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

复合酶法水解豆粕制备ACE 抑制肽

碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶组合,采用分步法进行水解豆粕实验,以提高豆粕水解液的ACE抑制率。结果表明：当碱性蛋白酶和胰蛋白酶两种酶分步加入进行水解时,水解度最高,达到46.83%。进一步通过响应面分析法,优化碱性蛋白酶和胰蛋白酶组合分步水解条件,发现先加入5100U/g碱性蛋白酶,在pH9的条件下水解2h,之后再加入950U/g胰蛋白酶,在pH8的条件下继续水解2h,最终水解产物的ACE抑制率可达到72.21%。     

响应面法优化软枣猕猴桃蛋白水解及多肽的抗氧化研究

以酶解产物清除羟基自由基能力为指标,选用碱性蛋白酶为水解酶,利用响应曲面法优化软枣猕猴桃蛋白最佳酶解工艺条件并制取抗氧化肽。考察其水解度和清除率的相关性。结果表明：碱性蛋白酶最佳酶解工艺为温度50℃、pH9、加酶量4000U/g、酶解时间3h,此时水解度达到最大值为25.08%。在此条件下将软枣猕猴桃蛋白分别水解1、2、3、4、5h得到肽混合物进行抗氧化活性分析,得到其对羟自由基清除率分别为18.69%、24.67%、28.04%、25.82%、26.65%。当酶解时间为3h时,此时抗氧化肽的羟自由基清除率最高。