血球计数板法测定酵母数及出芽率时应注意的问题

本文提出并分析了大生产中利用血球计数板测定发酵液酵母数及出芽率时应注意的问题和建议，以便使计数结果更准确。     

活性干酵母质量分析

为了解目前市场上活性干酵母的基本质量情况,我们做了活细胞率、每克活性干酵母细胞数、水分等项检测,目的是提高对活性干酵母使用的科学性。三酵母活细胞车检查吸取刚好活化1h的酵母活化液0．1ml,加入染色液0．9ml,摇匀,20℃染色10min后,立刻在显微境下用血球计数板计数。计数方法调整显微镜（15×40）视野,检查计数室内酵母细胞分散是否均匀,如分散很均匀,说明步骤正确,计数结果可靠。随机计数10个中方格（160个小方格）内的酵母细胞数,取平行试验的平均值为结果,进行计算。在计数中无色透明者为酵母活细胞,被染上蓝色者为死…     

果酒酵母生长曲线两种测定方法的对比研究

通过分光光度法和血球计数板直接计数法对果酒酵母生长曲线的测定,找出果酒酵母的生长规律,并对两种方法进行对比研究。结果表明:0-8h为果酒酵母的延滞期,8-24h为对数生长期,24-32h为稳定期,32h进入衰亡期。对数生长和稳定期,分光光度计测出的OD值和直接记数法测得的酵母细胞数存在一定的线性关系,两种方法的测定结果都可以作为判定果酒酵母是否进入对数生长期,为果酒生产有效利用酵母菌的依据。     

提高酵母数测定方法准确性的探讨

1 酵母数测定在啤酒工厂中的重要性。发酵过程中，满罐酵母数、回收酵母泥的酵母密度和死亡率、贮酒过程酵母数等都是需要控制的主要参数之一，其数值直接影响发酵过程的稳定以及啤酒风味。目前对于酵母数的测定基本上还是采用人工使用血球计数板和显微镜测定的方法，但在测定过程中，由于稀释倍数，取样方法，人员等因素，容易造成测定误差。因此有必要对提高酵母数测定方法的准确性进行探讨。     

胶质芽孢杆菌液体发酵产孢条件的优化

以提高胶质芽孢杆菌液体发酵产孢量为目的,以血球计数板计数芽孢数量,以产孢量为衡量指标,设计单因素实验和正交实验,对胶质芽孢杆菌液体发酵培养条件进行优化研究.优化后的发酵工艺参数为:接种量5％,起始pH7.5,碳酸钙用量6g/1000mL,装液量70mL/250mL三角瓶,转速250r/min,发酵前24h温度为32℃,然后升高温度到37℃,继续发酵12h.按优化条件培养做生长曲线进行验证,培养36h血球计数板计数芽孢数量为9.3×109cfu/mL.     

光斑定位法在显微镜操作中的应用

在显微镜操作中,如何快速找到目标是操作者大伤脑筋的问题,本文从显微镜操作的最基本点出发,将显微镜上的小部件加以巧妙地利用,使光线在载玻片上形成光斑,然后在光斑的定位下,顺利而快捷的发现切片（血球计数板）上的微小目标,使大海捞针般的操作得以轻松实现。笔者经过多年的教学实践证明,该定位法广泛适用于酿酒、生物、医院等单位,尤其对：血球计数板、细胞测微尺、特殊微小切片的观察和使用更为方便。     

浓香型白酒窖泥中酵母种类的研究

对从我国东北地区某著名酒厂窖泥中分离出的98株酵母菌株进行耐高温、TTC染色和10%耐酒精的三级筛选,最终选出5株耐高温、耐酒精和呼吸强度较高的菌株,进而通过光学显微镜观察其细胞形态、子囊孢子形态、菌丝等特征,并进行麦氏血球板计数、掷孢子的形成实验及一系列生理生化实验,表明上述5株菌分别属于粟酒裂殖酵母,耐热克鲁维酵母、多形汉逊酵母、酿酒酵母、鲁氏接合酵母。     

啤酒工厂碳足迹探讨

在本企业实验室现有条件基础上分别对次甲基蓝染色法、血球计数板培养法,酸化力测定法（AP值）和活力滴定法（VT值）等四种酵母活力测定方法的准确性,难易程度,消耗时间,以及重现性进行了比较。发现活力滴定法具有重现性好,适用范围广等特点．为了在大生产中方便使用,优化了活力滴定法的检测条件,并与发酵指标之间的相关性进行了研究。表明活力滴定法是生产上比较可行的检测酵母活力的方法。     

酵母活力测定方法的评价与应用

在本企业实验室现有条件基础上分别对次甲基蓝染色法、血球计数板培养法,酸化力测定法(AP值)和活力滴定法(VT值)等四种酵母活力测定方法的准确性,难易程度,消耗时间,以及重现性进行了比较.发现活力滴定法具有重现性好,适用范围广等特点.为了在大生产中方便使用,优化了活力滴定法的检测条件,并与发酵指标之间的相关性进行了研究.表明活力滴定法是生产上比较可行的检测酵母活力的方法.     

胶质芽孢杆菌液体发酵产孢培养基的优化

以提高胶质芽孢杆菌液体发酵芽孢产量为目的,以血球计数板观察计数芽孢量,对胶质芽孢杆菌液体发酵培养基组成进行优化研究。首先进行单因素试验,筛选最优的碳源、氮源、碳源浓度、氮源浓度、无机盐及其浓度,得到单因素最佳值;然后以二次回归正交旋转组合设计对得到的单因素最佳值进行优化,并进行验证试验。结果表明:最优产孢发酵培养基配方为每1000 mL培养基:乳糖21.57 g;复合氮源2.6 g,其中含蛋白胨与硫酸铵,二者质量比例为1∶3;硫酸锰0.21 g;磷酸氢二钾1.5 g;七水硫酸镁1.2 g;经二次回归正交旋转组合设计优化建立了回归模型,通过验证试验,血球计数板计数结果显示胶质芽孢杆菌芽孢产量可达3.44×109cfu/mL,实际芽孢量与回归模型预测值比为0.977,说明所得模型可靠。此优化培养基可以为工业生产胶质芽孢杆菌提供数据参考。     

饮料中霉菌和酵母计数检验结果不确定度的评定

为了真实反应饮料中霉菌和酵母计数检验结果的精确度,评定霉菌和酵母计数的不确定度,探讨并建立了简单易行的饮料中霉菌和酵母计数检验的不确定度评定方法,确定了样品中霉菌和酵母计数检测的置信区间。     

酵母活力测定方法的应用评价

从啤酒企业的生产实用角度对几种酵母活力评价方法进行了对比，分别对血球计数板培养法，活力滴定法（VT值），酸化力测定法（AP法）等三种方法操作的难易程度，消耗的时间，以及方法的重复性进行了比较．发现酸化力测定方法重复性较好，花费时间相应较短，因此将酸化力测定法（AP法）与发酵指标之间的相关性进行了研究，结果表明酸化力测定法（AP法）与发酵指标有一定的相关性。在后来的大生产中进行了数据的测定，对其生产应用进行了评价。表明在实际生产中酸化力测定法（AP法）是一种比较可行的检测酵母活力的方法。     

提高霉菌和酵母计数结果准确性的方法探讨

目的 提高霉菌和酵母计数结果的准确性,减小出现能力验证不满意结果的可能性。方法 基于国标方法,采用增加各梯度平行样本数、不同培养基和不同人员比对等方法,对能力验证样品进行检测,并辅以形态学观察辨识。结果 两种比对方法的霉菌、酵母及二者合计计数结果有差异,但均无统计学意义;形态学观察辨识有助于提高计数的准确性;能力验证结果均为满意。结论 通过采取以上方法,提高了能力验证样品霉菌和酵母计数结果的可靠性,增强了实验室霉菌和酵母菌检测自评能力。     

一种观察酿酒酵母原生质体的简易方法

酿酒酵母(Scerevisiae)原生质体不需任何染色剂染色，只需使用血球计数板，在光学显微镜下能清晰地观察原生质体形态，而且显微照相效果良好。该方法程序简单、操作方便、效果良好。     

饮料中霉菌和酵母计数检验结果的不确定度评估

目的评估饮料中霉菌和酵母计数检验结果的不确定度。方法依据GB4789.15-2010《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》测定饮料中霉菌和酵母菌总数,并对霉菌和酵母计数过程中的样液制备、递增稀释、加样体积和重复测量等不确定度来源进行分析与量化。结果饮料中霉菌和酵母计数的检验结果以对数值的平均数表示时,其取值区间lgX=3.115±0.0409;以2次测量平均值表示时,其取值区间为1186~1432 CFU/m L(k=2.08)。结论利用日常检验数据评定饮料中霉菌和酵母计数检验结果的不确定度是可行的。     

酵母源金属硫蛋白对慢性汞中毒小鼠排汞及肝脏损伤修复作用

目的:探讨两种具自主知识产权酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)(MT-1、MT-2)对慢性汞中毒小鼠排汞及汞致肝脏损伤的修复作用。方法:慢性汞中毒模型通过实验小鼠自由饮用氯化汞去离子水溶液构建,经连续灌胃给予二巯基丙磺酸钠及不同剂量酵母源MT(0.16、0.40、0.80 mg/(kg·d))28 d后,测定实验小鼠体质量、肝脏脏器系数、血液及肝脏汞含量、4项血常规(白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量)、肝功能指示指标并观察慢性汞中毒小鼠肝脏组织病变程度。结果:与模型对照组比较,各灌胃给药组小鼠体质量均不同程度提高,肝脏脏器系数显著下降(P0.05),血液及肝脏汞含量显著下降(P0.05),白细胞、红细胞、血红蛋白含量及血小板计数均有不同程度恢复,其恢复效果与剂量呈正相关。与模型对照组比较,各酵母源MT灌胃给药组小鼠血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶含量均有所下降,且综合肝脏组织病理学染色切片结果,酵母源MT可修复汞中毒小鼠肝脏组织,使水肿肝脏细胞恢复其正常形态,减少细胞间炎性浸润现象,且两种酵母源MT修复受损肝脏的能力与剂量呈正相关,高剂量酵母源MT对受损肝脏的修复效果更佳。结论:综合各项检测结果,两种酵母源MT对慢性汞中毒小鼠具有良好的排汞及修复汞致肝脏损伤效果,且酵母源MT-1对慢性汞中毒小鼠排汞及修复受损肝脏组织的效果好于酵母源MT-2及二巯基丙磺酸钠。     

动物饲用高产蛋白酵母菌株培养条件的优化

采用正交试验法,对动物饲用高产蛋白酵母菌的生长条件进行了研究,探讨了温度、pH值、蔗糖质量浓度、装液量对酵母菌生长的影响。并测定酵母在自然pH值条件下、蔗糖质量浓度20 g/L,装液量2/5,培养条件30℃,摇床转速180 r/min的生长曲线。结果表明,对筛选酵母在30℃,pH值为6.5,蔗糖质量浓度20 g/L,装液量在100 mL/250 mL的条件下生长较优。其中温度为影响生物量的主要因素。通过对酵母生长曲线的测定得出筛选酵母的对数生长期在6～16h,之后逐渐达到稳定期。利用血细胞计数板方法对在优化条件下培养48 h的酵母菌进行计数,含酵母1.09×1010个。与市售酵母菌数相比基本一致。     

食品中霉菌和酵母计数的不确定度评定

按照《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》(GB 4789.15—2016)第一法测定霉菌和酵母总数,对测量不确定度进行分析与评定。实验得到扩展不确定度为0.033 9(k=2.09),霉菌和酵母计数检测结果的取值为4 300～5 000 CFU·g^-1。结果表明,霉菌和酵母计数测量不确定度最主要的来源是重复性测量。     

新疆家蚕抗菌肽在酿酒酵母中表达的实时监测及活性分析

本研究对新疆家蚕抗菌肽在酿酒酵母INVSc1菌株中分泌表达过程进行了实时监测及活性测定。结果表明,选择培养基中酵母表现为典型的S型生长曲线;诱导培养基中酵母表现为波浪式缓慢上升的曲线,上升的时间和速度与酵母的初始接菌密度有关。诱导过程补加少量20%半乳糖诱导剂可以明显抑制酵母的生长,同时,酵母细胞平板计数结果也表明补加半乳糖使酿酒酵母出芽增殖减缓,菌落计数减少。研究发现诱导过程补加半乳糖不仅可以使发酵液中总蛋白的含量提高约50%,还可以使酵母分泌蛋白的时间提前。抗菌实验表明,抗菌肽对大肠杆菌抑菌效果较好,发酵液上清对大肠杆菌的最大抑菌圈直径为52 mm;对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较弱,最大抑菌圈直径为20 mm。     

PetrifilmTM快速霉菌酵母测试片法与GB 4789.15—2016在酸奶检测中的比较

目的比较Petrifilm~(TM)快速霉菌酵母测试片(RYM)法和GB 4789.15—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》测定质控样品、标准菌株及野生菌株、酸奶样品和人工污染酸奶样品中霉菌和酵母计数的一致性,研究Petrifilm~(TM)RYM法的特异性。方法选取2份霉菌和酵母计数质控样品、78株霉菌和酵母标准菌株及野生菌株、50份酸奶样品和50份人工污染酸奶样品,利用两种方法进行霉菌和酵母计数的测定,检测结果通过配对资料t检验以及对数值差值绝对值(|dlog|)汇总分析进行统计;同时利用Petrifilm~(TM)RYM法检测15株非霉菌和酵母菌株,考察Petrifilm~(TM)RYM的特异性。结果两种方法对质控样品、标准菌株及野生菌株、酸奶样品和人工污染酸奶样品检测结果的配对t检验均P0.05,差异无统计学意义;|dlog|≤0.50占比均为100.0%,表明两种方法的检测结果一致性较好。Petrifilm~(TM)RYM法检测非霉菌和酵母菌株,结果显示没有菌落出现,表明Petrifilm~(TM)RYM具有良好的特异性。结论 Petrifilm~(TM)RYM法和GB 4789.15—2016对质控样品、标准菌株及野生菌株、酸奶样品和人工污染酸奶样品中霉菌和酵母计数的检测结果一致性较好,且Petrifilm~(TM)RYM具有良好的特异性。