海参酶解液的体外抗氧化活性研究

分别选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶水解海参体壁,以DPPH·清除能力、O2-·清除能力、Fe2+螯合力和还原力为抗氧化指标,研究不同海参酶解液体外抗氧化活性的差异。结果表明,随着水解时间的增加,5种酶解液基本上均表现出酶解液的抗氧化能力先增加后下降的趋势。菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶酶解液的DPPH·清除能力和O2-·清除能力较强;胰蛋白酶酶解液的Fe2+螯合能力最强;而木瓜蛋白酶酶解液的还原力最大。从清除自由基角度上,菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶可作为开发海参抗氧化肽的优选工具酶。     

内外源酶制备海参肽的组成及抗氧化性质研究

为了对比不同方法制备海参肽的组成和抗氧化性质差异,采用内源酶（海参自溶）方法制备海参肽,并与外源酶（中性蛋白酶,碱性蛋白酶和胰蛋白酶）酶解制备的海参肽相比较。结果表明,自溶方法制备的海参粗肽水解度从高到低依次为自溶8 h>自溶4 h>自溶2 h,外源酶制备的海参粗肽水解度从高到低依次为胰蛋白酶酶解>碱性蛋白酶酶解>中性蛋白酶酶解;自溶2、4和8 h 产生的海参肽94%以上分子量小于314 Da,酶解制备的海参肽分子量主要分布在1~8.5 kDa;随着自溶时间的增加,自溶制备海参肽的氨基酸种类逐渐增多,且自溶8 h时呈味氨基酸含量较高;自溶2、4和8 h制备的海参肽比酶解法制备的海参肽具有更好的羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力以及Fe3+还原能力,在浓度10 mg/mL时,自溶8 h羟基自由基清除率为93.4%,DPPH自由基清除率为85.8%,Fe3+还原力为0.740。综上,自溶方法制备的海参肽具有自身独特的优势,本研究可为海参肽的制备提供理论支撑。     

裙带菜多肽的制备及其抗氧化活性的研究

实验以裙带菜为原料制备裙带菜蛋白,通过单因素和正交试验确定了碱性蛋白酶为裙带菜抗氧化肽制备的最佳酶,最优酶解条件为:料液比4%、酶解温度55℃、酶解时间3.5h、加酶量7500U/g、pH 10.0,该条件下制备的裙带菜多肽的还原能力最强,700nm处的吸光值为0.411。对制备的裙带菜多肽进行超滤分级,从O_2~-·清除率、·OH清除率、DPPH自由基清除率、Fe~(2+)螯合率4个方面,探究了不同分子量裙带菜多肽的抗氧化能力。结果表明:裙带菜多肽对Fe~(2+)的螯合能力和DPPH自由基的清除能力较强,对O_2~-·和·OH的清除能力相对较弱,且总体呈现低分子量肽段的抗氧化活性较强,高分子量肽段的抗氧化活性较弱的趋势。     

刺参低聚肽的质量评价和抗疲劳作用研究

研究p H渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解猪皮得到的不同分子量胶原蛋白肽的体内外抗氧化活性。猪皮预处理后,采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步进行酶解,酶解液经超滤得到M1 k Da、1 kDaM3 kDa、M3 kDa 3个不同分子量肽段,以福林酚比色法测定各组分肽含量,通过测定各组分肽段对DPPH自由基、ABTS+自由基、O2-自由基及OH自由基的清除实验评价各组分肽的体外抗氧化活性,再以不同分子量肽段酶解液对小鼠进行灌胃,以试剂盒测定小鼠灌胃后血清的总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性、总抗氧化能力和微量丙二醛含量评价各组分肽的体内抗氧化活性。综合体内外抗氧化实验数据,各组分肽的抗氧化能力强弱顺序为:小于1 kDa组分1 k Da～3 kDa组分大于3 kDa组分。pH渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解的各组分猪皮胶原蛋白肽在体内外均有不同程度的抗氧化能力,且分子量越小,抗氧化活性越强,可对机体起到保护作用。     

羊肺蛋白酶解工艺优化及体外抗氧化活性研究

为优化羊肺酶解工艺及探讨酶解物体外抗氧化活性,采用中性蛋白酶酶解羊肺,以水解度为评价指标,在单因素试验的基础上,运用响应面法优化酶解工艺。结果表明:羊肺的最佳酶解条件为酶解温度50℃,加酶量1 700U/g,水料比2∶1(mL/g),酶解时间4h。在最优条件下,进行3次验证性实验,测得实际水解度为18.89%,与理论水解度(18.19%)相比误差较小。体外抗氧化结果表明:羊肺酶解产物具有一定的抗氧化活性,其还原力的吸光值为0.472,清除DPPH·、·O_2~-和·OH的IC_(50)值分别为67.00,40.07,31.88mg/mL。     

长蛇鲻鱼蛋白水解制备抗氧化肽工艺研究

抗氧化肽(具有抗氧化能力的肽)具有抑制自由基生成的作用,可通过酶水解蛋白质获得。以长蛇鲻鱼肉蛋白为原料,利用6种不同的商业化蛋白酶,水解长蛇鲻鱼肉蛋白,以1,2-二苦基-2-三硝基苯亚肼基(DPPH·)、没食子酚超氧自由基(O_2~—·)的清除和Fe~(3+)还原能力活性为指标,探讨不同酶水解时间下,不同蛋白酶的水解产物的抗氧化性能。结果表明,胰蛋白酶酶解产物水解度(DH)为13%时,对1,2-二苦基-2-三硝基苯亚肼基(DPPH·)、没食子酚超氧自由基(O_2~—·)清除和Fe~(3+)还原能力的活性最强,优化得到胰蛋白酶酶解长蛇鲻鱼肉蛋白的最佳酶解条件为:酶用量为8000 U/g、p H为7.0、温度为40℃、底物浓度为25 g/L,达到目标水解度(DH)=13%的水解时间为2 h,对1,2-二苦基-2-三硝基苯亚肼基(DPPH·)、没食子酚超氧自由基(O_2~—·)清除率,分别为91.61%、33.78%,且Fe~(3+)还原能力的活性很强。     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

热变性对海参肠酶解物活性的影响

为充分利用海参蛋白质资源,以海参肠为原料,结合热变性预处理来制备海参肠活性多肽,利用中性蛋白酶酶解两组海参肠匀浆液(100℃预处理10 min的变性组和未变性组),并比较分析两组蛋白的水解度、可溶性蛋白、三氯乙酸(TCA)可溶性寡肽的含量、肽得率、分子量分布以及抗氧化能力,检测层析分离后样品的蛋白含量及还原能力,探究热变性预处理对多肽性质的影响。结果表明,经过变性处理后,海参肠酶解液水解度由23.76%提高到37.28%,肽得率由13.97%±1.25%提高到25.13%±1.59%。Superdex Peptide 10/300GL凝胶过滤色谱分析表明,变性组海参肠多肽组分的分子量主要分布范围为0.5~3 kDa,占水解液的57.29%,且变性处理组的ABTS+与DPPH自由基清除率最高可达0.51 Trolox equi/μL Sample与90.95%。以上结果说明,结合变性预处理工序,利用中性蛋白酶可获得较低分子量范围的海参肠多肽,具有潜在的开发价值。     

模拟酶解大豆7S、11S蛋白及其抗氧化活性的研究

以"活性肽搜寻与蛋白模拟水解系统"为工具,选择碱性蛋白酶和中性蛋白酶对大豆7S、11S蛋白进行模拟水解,得到不同水平的抗氧化肽肽段,以重均分子量为手段,评价理论模拟与实验水解的相关性;以还原力、清除二苯代苦味酰基苯肼(DPPH·)自由基能力比较以上蛋白酶水解物的抗氧化活性.结果表明:模拟与实验水解得到的分子量分布在比例以及重均分子量方面有显著相关性(P<0.01);四种酶解产物均具有一定的抗氧化活性,其中,以7S蛋白的碱性蛋白酶产物表现出最高的还原力和DPPH·清除能力(P<0.05).     

酶法制备云芝菌丝体肽的研究

通过分析三种蛋白酶对云芝菌丝体的酶解情况,确定以中性蛋白酶作为水解酶用酶,用单因素实验考察了其相应的酶解条件,正交实验得出最佳水解条件为:pH8.0,温度50℃,底物浓度10%,酶浓度0.6mg/g,水解时间2h,在此条件下的水解度为33.28%.将酶解液通过10、5、3kDa截流分子量的超滤膜,测定不同分子量段肽溶液的肽得率和清除羟基自由基的IC50值,结果表明:分子量在3kDa以下的肽得率最高,清除羟基自由基的能力最强.     

海参内脏酶解工艺条件的优化

建立海参内脏酶解工艺条件,为海参内脏活性物质工业化生产提供参考。以蛋白水解度和清除DPPH自由基为指标,分析比较了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶对海参内脏的酶解效果及产物的抗氧化活性,筛选出中性蛋白酶为最佳水解酶,以水解度为指标,通过响应面分析法优化海参内脏酶解工艺。结果表明:最优酶解条件为:酶添加量2000 U/g,料液比1∶12 g/m L,酶解温度50℃,酶解液p H7.0。在最优条件下,比较不同酶解时间酶解产物的抗氧化活性,发现第10 h时酶解产物具有较好的抗氧化活性,清除DPPH自由基和羟自由基的IC50值分别为1.26、5.33 mg/m L。中性酶对海参内脏酶解工艺优化合理、可行,酶解产物具有较好的抗氧化活性。     

海参肠胶原蛋白酶解工艺及抗氧化性研究

目的 研究木瓜蛋白酶加酶量、pH值、酶解时间、温度对海参肠胶原蛋白水解度的影响。 方法 分别探讨4种蛋白酶对海参肠胶原蛋白水解能力, 确定以木瓜蛋白酶为最佳用酶。采用木瓜蛋白酶对海参肠进行酶解, 通过分析酶解液对Fe3 还原力、清除羟自由基及DPPH能力来研究其抗氧化活性。结果 酶解的最佳条件: 木瓜蛋白酶添加量1.0%、pH 7.0、时间4.0 h、温度65 ℃, 水解度达42.20%。结论 酶解液对Fe3 有较好的还原作用, 对羟自由基和DPPH都有很好的清除作用。     

菌酶联合制备猪血抗氧化低聚肽

以猪血为原料,依次采用枯草芽孢杆菌发酵和碱性蛋白酶水解制备猪血抗氧化低聚肽,通过响应面试验优化发酵工艺和酶解工艺,最佳发酵参数为:底物浓度59.0 g/L、发酵时间56.5 h、接种量3.22∶100(体积比),此时多肽含量为2.31 mg/mL,·OH清除率为78.94%;最佳酶解参数为:酶解时间3.0 h、pH 9.5、酶解温度60℃、酶底比390 U/g,此条件下制备得到酶解液的多肽含量5.48 mg/mL,多肽含量较单一发酵提高2.39倍,·OH清除率为93.62%。采用超滤分离法,获得分子量分别为0~1 kDa、1 k Da~5 kDa和0~5 kDa的猪血抗氧化低聚肽,采用7种体外抗氧化指标(·OH清除率、·O~(2-)清除率,抑制脂质过氧化能力、还原力、ABTS~+·清除率、DPPH·清除率、总抗氧化力)评价3种不同分子量段的猪血低聚肽的抗氧化活性,结果表明:3种不同分子量段抗氧化肽活性大小为0~1 kDa0~5 kDa1 kDa~5 kDa,提示高抗氧化活性的猪血低聚肽的分子量集中在1 kDa以下。     

海蜇生殖腺酶解肽的抗氧化活性和ACE抑制活性研究

为实现海蜇加工副产物生殖腺的高值化利用,以海蜇性腺脱脂粉为原料,选用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶分别对海蜇生殖腺进行水解,以酶解产物(JGHP)的水解度、DPPH清除活性和ACE抑制活性为指标,选择制备海蜇生殖腺活性肽的工具酶。经超滤膜将酶解产物分成JGPH-P1(大于3000 u)、P2(1000~3000 u)、P3(小于1000 u)三个部分,分别测定三部分的DPPH清除活性和ACE抑制活性。结果表明,中性蛋白酶水解所得产物的水解度、DPPH清除率和ACE抑制活性均优于其他三种蛋白酶;JGHP超滤后,其中组分JGHP-P3的活性较高。利用电子自旋共振(ESR)技术检测JGHP-P3对DPPH·、·OH、O-2·的清除活性。其ACE抑制活性IC50为1.06 mg/m L,DPPH·、·OH、O-2·的清除活性IC50分别为0.38、0.63、0.59 mg/m L。由此可见,经中性蛋白酶水解得到的JGPH中小于1000 u的组分具有较高的抗氧化和ACE抑制活性。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

海蜇胶原蛋白肽的生物活性研究

以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,酶解制备胶原蛋白肽并对酶解液进行抽滤分离,并对所得不同分子量的胶原蛋白肽进行生物活性研究。结果表明:抽滤分离到四种不同分子量的胶原蛋白肽:分子量>10 kDa(JCP1)、分子量3~10 kDa(JCP2)、分子量1~3 kDa(JCP3)和<1 kDa(JCP4)。生物活性研究表明,JCP1具有最强的超氧阴离子自由基清除能力和酪氨酸酶双酚酶抑制效果,其IC₅₀值分别为22.6和11.96 mg/mL,JCP1对酪氨酸酶的抑制类型为可逆混合竞争型抑制;JCP3具有最强的还原力、羟自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力和血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性,其IC₅₀值分别为14.9、2.21、0.61和15.8 mg/mL;JCP4具有最强的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力,其IC₅₀值为28.3 mg/mL。     

二步酶解法制备鱼鳞明胶抗氧化肽及其抗氧化活性研究

通过碱性蛋白酶进行第一步酶解,胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别进行第二步酶解制备鱼鳞明胶抗氧化肽。结果表明,二步酶解法能有效提高酶解物的水解度,降低水解物的分子量,碱性蛋白酶—胰蛋白酶水解物具有显著的自由基清除能力和Fe~(2+)螯合能力。通过响应面优化的胰蛋白酶最佳二步酶解工艺为:底物浓度100 mg/mL、pH 7.8、温度53℃、时间50min,该条件下制备的水解物的Fe~(2+)螯合率为65.72%,清除DPPH·、·OH和O_2~-·的IC_(50)值分别是7.39,0.68,1.84mg/mL。     

响应面法优化珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及酶解产物的抗氧化活性

以珍珠龙胆石斑鱼肉为原料,利用蛋白酶酶解制备生物活性肽。以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验的基础上采用响应面分析法优化制备工艺。并采用超滤法对酶解产物进行分离纯化,同时进行抗氧化活性探究。结果表明:珍珠龙胆石斑鱼肉酶解工艺条件为:采用风味蛋白酶,酶添加量1050 U/g,在pH7.0、53℃、料水比1:3.5条件下酶解5.5 h,水解度为9.99%±0.39%。酶解产物与超滤组分均具有较强DPPH自由基清除能力,其IC₅₀值在0.63~0.88 mg/mL之间;EH-2(5~8 kDa)和EH-3(3~5 kDa)有较强的羟基自由基清除能力,其IC₅₀值分别为16.94和16.38 mg/mL;酶解产物与超滤组分均具有还原能力,且酶解产物还原能力最佳。优化的珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺合理且可行,其酶解产物与超滤组分具有较强的抗氧化性,可作为功能食品的基料应用。     

黑蚂蚁蛋白的酶解优化及抗氧化肽的超滤膜分离

本文研究了酶量、温度、pH和时间四个因素对黑蚂蚁蛋白的碱性酶法水解的影响。通过响应面设计,以各个抗氧化活性为指标,优化了超氧自由基清除率,DPPH自由基清除率,羟基自由基清除率,还原力和亚油酸自氧化抑制作用最强的酶解工艺条件。验证实验证实方程的准确率达95%以上。采用超滤膜及离子交换色谱对酶解产物进行了分离,发现5-10 kDa和1-3 kDa组分的抗氧化能力最强,碱性肽对超氧自由基清除能力、羟基自由基清除能力、亚油酸自氧化抑制作用贡献较大,酸性肽对DPPH自由基清除能力及还原力的贡献较大。     

大米蛋白酶解产物抗氧化活性及功能性质研究

采用不同的蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、精制中性蛋白酶和碱性蛋白酶)水解大米蛋白,以制备抗氧化活性肽.结果发现,精制中性蛋白酶水解大米蛋白得到的产物对DPPH自由基的清除能力最强,而且水解度其清除能力影响显著.同时测定了酶解产物的还原能力、金属离子螯合能力以及在Fe2引发的亚油酸过氧化物体系中的抗氧化活性,结果表明,此酶解产物表现出一定的还原能力,能够抑制由Fe2 引发的亚油酸过氧化物体系中的抗氧化活性,具有一定的金属离子螯合能力.结果表明,这种肽具有一定的抗氧化活性,具有良好的功能特性.