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从木瓜中分离出能溶解纤维蛋白的活性蛋白。木瓜新鲜乳汁经浸提、盐析、透析得蛋白粗提物;SephadexG-75凝胶层析分离蛋白粗提物,收集蛋白质的洗脱液,依序集合为共1~10个样品,纤维蛋白平板法筛选纤溶活性蛋白;SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度及分子量;体外观察该蛋白对血凝块的溶解效果。木瓜蛋白粗提物有纤溶作用,经层析后得到的4、5、6号样品均有纤溶活性,5号样品SDS-PAGE电泳为单一蛋白条带,分子量为26ku,以尿激酶为标准标定该蛋白纤溶活性为17.85IU/mL。该蛋白在体外可通过激活纤溶酶原或直接降解纤维蛋白溶解血栓。木瓜中含有一种分子量为26ku的纤溶活性蛋白。 相似文献
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通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定收集到的豆豉中纤溶酶的活性,实验结果显示,采集于贵州南明蔡家关的豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,达到了285.759IU/mL.以该豆豉样品为研究对象,对其中的纤溶酶进行了纯化研究,实验确定的最佳纯化方案为:取一定体积的豆豉纤溶酶粗酶液,在低温(4℃)下,加入4%的活性炭粉末脱色35min;在分段盐析中,首先选择15%饱和度的硫酸铵除去杂蛋白,再用75%饱和度的硫酸铵使纤溶酶充分沉淀分离;最后用葡聚糖凝胶G-50层析分离纯化纤溶酶,收集具有较高纤溶活性的组分,得到了纯化的酶液.最终得到的豆豉纤溶酶酶液纯化倍数达到了27.74倍,活性回收率69.7%,比活力达到了13946.1IU/mg. 相似文献
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纤维蛋白是血栓的主要组成部分,溶栓药物能溶解血栓主要是溶解血栓中的纤维蛋白。现在广泛研究的纳豆芽孢杆菌之所以具有较强溶血栓的功能主要是它能溶解血栓中的纤维蛋白的原因。比较了两种测定具有溶解纤维蛋白活性(以下简称“溶纤)”菌株活性的方法,从而为筛选具有高溶纤活性菌株提供简易的方法。 相似文献
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豆豉纤溶酶源于中国传统发酵食品豆豉,具有溶解血栓等功能,是一种可以作为潜在溶栓药物的纤维蛋白酶。对豆豉纤溶酶的研究现状和应用前景进行综述,为开发新型溶栓药物指明了方向。 相似文献
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本实验室从亚洲传统发酵食品--虾酱中筛选到一株产纤溶酶能力较强的芽孢杆菌(Bacillus sp.nov.SK006),发酵液经乙醇沉淀、离子交换色谱(DEAE-Sepharose CL 6B)、凝胶过滤色谱(Superdex75)后分离纯化出一种电泳纯的纤溶酶SPFE-Ⅲ,分子量约为42.6 kDa,酶活为7.1 U/mg(以plasmin为标准).SPFE-Ⅲ对纤维蛋白原的降解过程为最先降解α链,其次是γ链,而对β链的降解最缓慢;利用加热纤维蛋白平板法研究纤溶酶SPFB-Ⅲ,结果发现该酶对纤维蛋白有直接降解作用,而对纤维蛋白溶解酶原的敏感性较低. 相似文献
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纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究 总被引:10,自引:0,他引:10
经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。 相似文献
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运用脱脂乳固体培养基及纤维蛋白固体培养基的两步分离筛选法,从云南红河传统发酵豆豉中分离筛选具有高产豆豉纤溶酶活性的菌株,同时对它们的豆豉纤溶酶基因进行克隆分析,以期为新型功能性豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。研究结果表明,两步分离筛选法能有效地从云南红河传统发酵豆豉中筛选到高产豆豉纤溶酶的菌株Bacillus subtilis LC-2-1,对该高产菌株的豆豉纤溶酶成熟肽基因分析及预测结果表明,菌株B subtilis LC-2-1确实能分泌一种由825个碱基编码275个氨基酸残基且分子量约为27.4kDa的豆豉纤溶酶,与纳豆激酶及其他豆豉纤溶酶相比差异显著,同源性仅为85.1%。同时其豆豉纤溶酶活性分析结果则表明,菌株B subtilis LC-2-1所产纤溶酶活性较高,可达79.84 U/mL。因此,本研究结果将为新型且具有溶血栓功能发酵豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。 相似文献
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利用平板透明圈法作为初筛方法,从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6,其产纤溶酶酶活为25U/mL。通过比较发现,可以用自制纤维蛋白代替纤维蛋白原和尿激酶测定发酵液的纤溶酶酶活,在大通量的菌株筛选过程中可以节省大量费用。 相似文献
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利用纤维蛋白平板筛选和纤溶活性测定相结合的方法,从全国10种豆豉样品中筛选到1株纤溶活性较高的细菌菌株SY-3。通过形态观察和生理生化特征分析,SY-3被初步鉴定为枯草芽孢杆菌。 相似文献
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榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究 总被引:1,自引:1,他引:1
采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn~(2+)和Mg~(2+)激活酶活性,而Cu~(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。 相似文献