壳聚糖小球共价固定化α-淀粉酶的研究

以壳聚糖小球为载体,采用戊二醛交联共价固定α-淀粉酶。试验结果表明,以1 g壳聚糖小球为载体,经5m L 2%戊二醛处理后,加入24 mgα-淀粉酶,30℃,在p H 6的磷酸缓冲液中固定化2 h,制备的固定化α-淀粉酶活力达1 407.6 U/g。固定化酶最适p H向酸性方向偏移,最适反应温度不变,固定化α-淀粉酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶。     

表面复合修饰纳米超顺磁性材料固定化α-淀粉酶性能研究

以复合修饰的纳米超顺磁性Fe3O4颗粒聚集体为载体固定化α-淀粉酶,比较分析固定化α-淀粉酶及游离α-淀粉酶的酶学性能。研究固定化及游离α-淀粉酶的最适温度、最适p H、操作稳定性及基本动力学等。结果表明,固定化α-淀粉酶最适p H为7,最适温度为60℃。固定化α-淀粉酶与游离α-淀粉酶相比,具有更好的温度和酸碱的耐受性。固定化α-淀粉酶重复催化反应10次,相对酶活力仍剩余72.09%,重复操作的半衰期为18.97次,具有良好的操作稳定性。固定化α-淀粉酶的米氏常数Km值为45.31 mg/m L,亲和性弱于游离α-淀粉酶。     

海藻酸钠-聚乙烯醇-活性炭共固定化重组大肠杆菌细胞

目的:研究产酸性磷酸酶的重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET28b-AP/PT固定化制备条件以及固定化细胞的酶学特性。方法:比较9种细胞固定化方法,海藻酸钠-聚乙烯醇-活性炭共固定化为最佳方法;优化凝胶组成、菌体包埋量和固定化时间等条件,比较固定化细胞和游离细胞的酶学性质。结果:最适共固定化条件是:活性炭质量分数1.0%,海藻酸钠质量分数2.0%,聚乙烯醇质量分数6.0%,Ca Cl2质量分数2.0%,菌体包埋量6 g/100 m L凝胶溶液,固定化时间6 h。固定化细胞的酸性磷酸酶最适作用温度为35℃,比游离细胞提高5℃;固定化细胞与游离细胞的酸性磷酸酶最适作用p H均为5.0,固定化细胞显示出比游离细胞更宽泛的p H适应性。固定化细胞在重复使用12批后相对酶活力为54.5%,具有良好的操作稳定性。结论:海藻酸钠-聚乙烯醇-活性炭共固定化是非常适合固定化重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET28b-AP/PT的方法。     

固定化酶法高效制备低聚异麦芽糖

低聚异麦芽糖是一种重要的功能性低聚糖,主要通过酶法转化麦芽糖或麦芽三糖制得。本研究采用环氧基树脂对黑曲霉α-葡萄糖苷酶进行固定化,制得固定化α-葡萄糖苷酶制剂,就其酶学性质,催化效率及其低聚异麦芽糖的转化进行研究。选取4种类型的环氧基树脂进行投酶量,离子强度,p H值等酶固定化条件的优化研究,得到最佳树脂GT-3的最优酶固定化条件:离子强度2 mol/L,p H 6.0,投酶量30 mg/g,在25℃下固定48h,固定化α-葡萄糖苷酶酶活达到1.34×104 U/g,酶活力回收率达78.58%。固定化酶的酶学性质与游离酶有差异,最适p H略偏酸,热稳定性有所下降,而酸碱稳定性提高,操作稳定性较好。在45℃,重复50次后,固定化酶活力仍保留86.67%,制得的低聚异麦芽糖占总糖比例达49.28%。     

氨基化硅胶载体固定化α-淀粉酶的研究

采用5种硅胶作为载体,戊二醛作偶联剂,制备了固定化α-淀粉酶.对制备固定化α-淀粉酶的硅胶目数、偶联剂浓度、温度、pH值的影响因素进行了研究和优化.并对固定化酶和游离酶的酶学性质进行了比较.结果表明:固定化酶的最适温度为75℃,比游离酶提高了10℃,固定化酶的热稳定性优于游离酶.与游离酶相比,其对酸碱的适应性、贮存稳定性、操作稳定性也都有较明显改善.固定化酶的Km值略低于游离酶,前者为2.13mg/ml,后者为1.02mg/ml.     

蒙脱石固定化α-淀粉酶和糖化酶的研究

以蒙脱石为载体,利用吸附法分别固定α-淀粉酶、糖化酶以及共固定化α-淀粉酶和糖化酶。α-淀粉酶和糖化酶最佳固定化温度分别是20℃和30℃,最佳固定化pH是6.5和4.5。共固定化最佳条件为淀粉酶(U):糖化酶(U):蒙脱石(g)为15:7.5:0.2,pH为5.5;温度为20℃。固定化α-淀粉酶、固定化糖化酶和共固定化酶的最适pH分别为6.0、4.5和5.5,最适反应温度分别是60、60℃和55℃。蒙脱石固定化α-淀粉酶、固定化糖化酶和共固定化酶的稳定性均较好,尤其是共固定化酶表现突出。     

脂肪酶固定化及其催化生物柴油研究

得到脂肪酶固定化的最佳条件及固定脂肪酶对生物柴油的转化率。利用单因素试验和正交试验确定脂肪酶固定化的最佳条件,通过气相色谱-质谱联用仪分析合成生物柴油的主要成分。结果:脂肪酶固定化的最佳条件:缓冲液p H 7.5、载体/酶液比为25 mg/m L、固定化温度应为40℃,其固定化酶活力为68.25 U/g,利用固定脂肪酶催化合成生物柴油的转化率高达75%。结果表明:固定化酶比游离酶具有更高的催化效率,对高温和p H具有更高的耐受性。固定化脂肪酶催化效率高、操作稳定性较强,具有较好的工业化生产潜力。     

纳米磁性微粒固定化脂肪氧合酶的制备及其酶活研究

采用纳米磁性四氧化三铁固定脂肪氧合酶,考察不同因素对游离酶和固定化脂肪氧合酶酶活的影响。结果表明:电镜观察微粒呈黑色短棒状粒子,固定在载体上酶的含量约为6.0%;游离酶与固定化脂肪氧合酶的最适温度均为30℃,游离酶最适p H为8.0,而固定化酶的最适p H为9.0,当双氧水的浓度分别达到14 g/L和8 g/L时,游离酶和固定化酶的活性分别达到最强;最适条件下,游离酶的酶活为3.95×105U/m L,固定化酶的酶活为9.40×105U/g。     

壳聚糖纳米胶囊固定化α-淀粉酶及其特性的研究

采用离子凝胶法制备了壳聚糖纳米微胶囊,以此为载体通过吸附法固定了α-淀粉酶.分析了固定化后α-淀粉酶特性的变化,并考察了固定化酶的热稳定性、储藏稳定性与重复利用性.结果表明:固定化酶的最适温度与游离酶相比,提高了20℃;最适温度下的活性比游离酶的大,酶的最适作用DH值不受纳米载体的影响.纳米壳聚糖固定酶能较大提高其热稳定性、储藏稳定性和重复利用性.     

氨基化硅胶作载体固定化α-淀粉酶的研究

采用5 种硅胶作为载体,戊二醛作偶联剂,制备了固定化α- 淀粉酶。对制备固定化α- 淀粉酶的硅胶目数、偶联剂浓度、温度、pH 值的影响因素进行了研究和优化。并对固定化酶和游离酶的酶学性质进行了比较。结果表明：固定化酶的最适温度为75℃,比游离酶提高了10℃,固定化酶的热稳定性优于游离酶。与游离酶相比,其对酸碱的适应性、贮存稳定性、操作稳定性也都有较明显改善。固定化酶的Km 值略低于游离酶,前者为2.13mg/ml,后者为1.02mg/ml。     

壳聚糖固定化α-葡萄糖苷酶的研究

以粉末状壳聚糖为载体 ,采用吸附 -交联的方法将 α-葡萄糖苷酶固定化。最适固定化条件研究表明 ,0 .1 g壳聚糖与 2 4 ,0 0 0 U(0 .0 8ml) α-葡萄糖苷酶进行固定化 ,在p H6.0条件下 ,室温吸附 6h,然后与 3.5%的戊二醛在 45℃交联 6h,可得到固定化酶的活力为 1 4,30 0 U,酶活力回收率为59.6%。通过实验发现 ,与游离酶相比 ,固定化酶的最适 p H向酸性方向移动 0 .5p H单位 ,为 p H4.5;最适作用温度达到70℃ ,比游离 α-葡萄糖苷酶提高 5℃ ;酸碱稳定性、热稳定性及贮存稳定性均有较大提高 ;在 60℃操作半衰期为 1 68h     

海藻酸钙明胶联合固定化α-淀粉酶

以海藻酸钙、明胶凝胶珠包埋、戊二醛交联制备固定化α-淀粉酶,探讨了酶的固定化条件和固定化酶的部分性能。在戊二醛浓度0.3%、加酶量酶16.0g/L条件下可以获得最佳的固定化效果;与游离酶相比,制备的固定化酶最适反应pH由6.0降低到5.6,最适反应温度由65℃升高到70℃,其适宜作用温度范围、pH值范围均比自由酶范围宽;固定化酶的热稳定性优于游离酶,且连续7批次操作仍保持80%酶活力,显示出良好的稳定性。     

橡胶籽β-葡萄糖苷酶固定化酶学性质的研究

采用戊二醛交联的方法将来源于橡胶籽的β-葡萄糖苷酶固定到壳聚糖球上,对比研究了固定化酶和游离酶的酶学性质。固定化后的β-葡萄糖苷酶最适温度为65℃,比游离酶提高了10℃;固定化酶热稳定性相比于游离酶,在55～70℃范围内有所提高;固定化酶的最适pH为6.0,游离酶的pH为5.5;固定化酶与游离酶相比,其耐酸耐碱性有所提高;金属离子对固定化酶的抑制作用与游离酶相比有所改变;葡萄糖对固定化酶的影响相对于游离酶更为明显;以p-NPG为底物,固定化酶的Km为3.5 mmol/L,游离酶的Km为1.75 mmol/L;固定化酶在操作和贮藏方面的性质都有明显提高。固定化酶相对游离酶部分酶学性质得到显著提高和改善,有效拓宽了其使用范围,提高了其应用价值。     

应用氧化棉织物固定过氧化氢酶的研究

以高碘酸钠氧化棉织物为载体固定过氧化氢酶，研究其固定化的主要条件，考察了固定化酶的性质。试验结果表明，过氧化氢酶固定在氧化棉织物上时，棉织物的最佳氧化条件为：NalO4浓度0．20mol／L，氧化时间8h，氧化浴pH值6．0，氧化温度40℃；过氧化氢酶固定化的条件为：过氧化氢酶用量0．20mL／（g棉织物），固定化时间24h。固定化酶的最适温度比游离酶提高了约10℃，使用温度范围变宽；固定化酶的最适pH值为7．0与游离酶相同，在酸性范围内稳定性较游离酶差，但在弱碱性范围内稳定性比游离酶好。     

谷氨酸棒杆菌中谷氨酰胺合成酶的克隆表达及固定化

对谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)来源的谷氨酰胺合成酶进行腺苷酰化位点定点突变,并在大肠杆菌中进行异源表达,得到的重组酶活为6.215 U/mg。分离纯化重组突变酶后,对其固定化条件及固定化酶的性质进行研究。结果得到固定化条件为:以LX-1000EP树脂作为固定载体,载体量0.176 g/U、p H值8.0、温度30℃、吸附时间16 h。固定化酶活力达到3.658 U/g,酶活回收率达到67.17%。重组酶固定化后,反应最适温度没有变化,最适p H略向碱性偏移,储藏稳定性提高,转化谷氨酸生产谷氨酰胺的水平与游离酶相当,对50 mmol/L谷氨酸的转化率为92.83%,为酶法生产谷氨酰胺后续研究提供了参考。     

磁性聚乙烯醇微球固定化α-淀粉酶的研究

磁性聚乙烯醇微球为载体,采用戊二醛交联法固定化α-淀粉酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究。结果表明,磁性固定化α-淀粉酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率分别为1107.89U/g微球、125.36mg/g微球、8.84U/mg蛋白质和37.96%;固定化α-淀粉酶的反应最适温度和最适pH分别为110℃和7.0;固定化α-淀粉酶对金属离子Mg2+、Fe2+、Zn2+和Cu2+的抑制作用的忍耐性比自由酶的明显提高;α-淀粉酶被固定化后其热稳定性、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶的明显提高。固定化α-淀粉酶在4℃,pH7.0的缓冲液中保存30d,其活力仍保持最初活力的91.6%,这比其自由酶的高12.3%。     

介孔分子筛SBA-15固定糖化酶的研究

以介孔分子筛SBA-15为载体,戊二醛为交联剂,对糖化酶进行了固定化.考察固定化温度、时间、给酶量、pH值以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究.结果表明,糖化酶最佳固定化条件是:酶与载体比例50mg/g、固定化温度25℃、固定化时间4h、pH 5.1、戊二醛体积分数7.5%,此条件下固定化酶活力回收率为56%.固定化酶的最适作用温度为70℃,比游离酶高10℃.最适作用pH 4.1,比游离酶降低0.5个单位.米氏常数Km由原来的0.032mol/L降为0.022mol/L.用超声波对固定化酶进行处理,其酶活力提高了18%.所得最佳超声参数是:超声功率100W,温度70℃,时间5min.     

有机改性凹凸棒土交联吸附法固定化磷脂酶A_1研究

以有机硅烷偶联剂KH550改性凹凸棒土作为载体,在单因素试验基础上,研究固定磷脂酶A1最佳工艺条件。优化反应条件为:固定化反应时间5.5 h,固定化反应温度50℃,戊二醛浓度0.4%,体系pH 4.7,最终固定化酶酶活5,100~5,330 U/g。固定磷脂酶A1具有比游离磷脂酶更广温度范围和更宽pH应用范围,固定磷脂酶A1最适pH为5.3,而游离磷脂酶A1为4.8;固定磷脂酶A1在较低和较高pH酶活力均高于游离酶;在58℃处理0.5 h,固定化酶仍能保持高于85%酶活,而游离酶酶活则低于70%。     

酶法改性芋艿淀粉工艺研究及其性质分析

通过α-淀粉酶对芋艿淀粉进行改性,以改善芋艿淀粉的理化性质。通过研究α-淀粉酶用量、反应时间、反应温度、反应时溶液的p H对直链淀粉含量的影响,确定正交试验的因素水平,经优化最终获得酶法改性芋艿淀粉的生产工艺条件,并对改性前后芋艿淀粉理化性质进行比较分析。结果显示:酶法改性芋艿淀粉的最优工艺条件为:酶用量2.0 g、反应时间为2.5 h、温度为70℃、反应时溶液的p H为6.0,在此条件下还原糖质量分数为32.72%;与原淀粉进行比较,改性淀粉比原淀粉在透光率显著增加,溶解度上显著增加,膨胀率显著减少;改性淀粉的X-射线衍射图和芋艿淀粉的特征谱线晶型略有改变;芋艿淀粉较完整,没有裂缝,表面光滑,形貌呈多面体,大颗粒淀粉周围附着许多小颗粒,芋艿改性淀粉颗粒变得更小,形状呈多面体,表面出现孔洞。     

海藻酸钠微球固定洋葱蒜氨酸酶的研究

以海藻酸钠微球为载体,使用包埋方法制备固定化蒜氨酸酶。优化了制备固定化酶的条件,并与游离酶对比研究了固定化酶的酶学性质。研究结果如下:(1)最优固定化条件为海藻酸钠质量浓度为25 g/L,CaCl2浓度为40 g/L,每克载体给酶量为573 U,固化2 h。(2)最佳反应时间为15 min,最适反应温度为45℃;固定化酶热稳定性明显高于游离酶。