β-伴大豆球蛋白鼠源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

用抗原免疫动物获取血清是常规的抗体制备方法。β-伴大豆球蛋白作为大豆蛋白中最主要的致敏蛋白之一,制备相关抗体是建立其免疫学快速检测方法的基础。将提取的天然β-伴大豆球蛋白与弗氏佐剂混合,乳化后皮下多点注射Balb/c小鼠,每3周加强免疫1次,免疫后第10天对所制备多抗血清的免疫学特性进行鉴定。结果表明,5次免疫后6只小鼠多抗血清效价均达1∶6 400以上,其中6号小鼠的多抗血清敏感性最强,其半数抑制浓度IC50为718 ng·mL-1。此多抗血清与芝麻蛋白、麦胚球蛋白无交叉反应,与花生蛋白、大豆球蛋白交叉反应率低于10%。本试验成功制得了效价高、敏感性强、特异性好的鼠源多抗血清。     

β-伴大豆球蛋白的分离纯化及免疫活性鉴定

β-伴大豆球蛋白是7S球蛋白的主要成分,是重要的大豆贮藏蛋白。利用等电点沉淀、分级盐析和凝胶过滤分离纯化大豆中的β-伴大豆球蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹的结果表明,所提取的β-伴大豆球蛋白纯度较高,可以与β-伴大豆球蛋白抗血清特异性结合,具有较好的免疫活性。     

自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体的纯化与检测

为了提纯并鉴定自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体,探讨其在部分组织中的免疫定位．首先合成带谷胱甘肽转移酶标签的自噬基因融合蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体浓度,最后用免疫亲和纯化方法提纯抗血清中的多克隆抗体,酶联免疫吸附法检测抗体效价,蛋白印迹检测抗体特异性及在组织中的表达情况．结果表明：制备得到自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其质量浓度为每10μL含5μg,用酶联免疫吸附法显示此抗体效价及特异性较高,蛋白印迹显示蛋白大小为55kD左右．     

二步超离心法分离纯化人血浆ApoB100及兔抗人ApoB100抗血清制备

建立一种从人血浆中分离纯化ApoBl00的方法,并制备兔抗人ApoBl00抗血清。将血浆用溴化钾调成1．019g／mL的密度液进行差分超速离心,将分离产物在溴化钾不连续密度梯度液（1．006-1．210g／mI。）中进行等密度超速离心。用G-100葡聚糖凝胶柱纯化ApoB100,以ELISA双抗体夹心法检测浓度,真空冷冻干燥。取冻干粉与弗氏佐剂混合后免疫新西兰白兔,制备兔抗人ApoB100抗血清,利用双向免疫扩散检测抗原纯度与抗血清效价。结果是一步超离法分离的ApoB100最高浓度为0．91μg／mL;二步超离法分离的ApoB100最高浓度为1．40μg／mL,对应的抗血清效价为1：64。结果表明二步超离心法提高了人血浆ApoB100的分离效果。     

大豆主要过敏原Gly m Bd 28K基因的克隆表达、纯化及多抗血清的制备

RT-PCR克隆大豆主要过敏原Gly m Bd 28K基因,根据序列设计引物,扩增目的基因的开放阅读框,与MBP载体连接,测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并用IPTG诱导表达.亲和层析法纯化重组蛋白,SDS-PAGE验证蛋白的纯度,免疫新西兰大白兔,收集多抗血清,用ELISA法测效价.扩增出含Gly m Bd 28K目的基因片段,诱导并获得高浓度和预期相符的表达产物,经层析纯化出Gly m Bd 28K蛋白,免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶1.6×106多抗血清.     

苏丹红Ⅰ多克隆抗体的制备研究

研究制备抗苏丹红Ⅰ的多克隆抗体.采用混合酸酐法合成免疫抗原苏丹红Ⅰ明胶,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体.采用酶联免疫吸附法鉴定抗血清中抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体效价.结果表明,苏丹红Ⅰ抗体的效价为1:8 000,可用于苏丹红Ⅰ的免疫学检测.     

不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较

采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。     

牛乳酪蛋白双联胶体金免疫层析试纸条的研制

原料羊乳中掺入牛乳会对其制品的食品安全造成损害.本研究的目的是建立一种免疫层析试纸条的检测方法检测羊乳原料乳的掺假.以牛乳αs1-CN及牛乳β-LG为检测对象,制备两者的特异性抗体,建立双联胶体金免疫层析试纸条.该实验制备的多克隆抗体α-CN IgG和β-LG IgG蛋白质浓度分别为4.86和5.99 mg/mL,两种抗体的效价为1∶25 600和1∶204 800,制备的胶体金溶液最适pH值为8.0,最佳蛋白标记量为10μL,且β-LG IgG中α-CN IgG的最适掺入量为20%.试纸条以玻璃纤维素膜VL68作为金标垫、硝酸纤维素膜SarteriesCN 95作为NC膜,分别用6μL,1 mg/mL的α-CN IgG,6μL,1 mg/mL的β-LG IgG包被NC膜T线、用6μL,1mg/mL二抗包被C线.该试纸条可特异性的检测出α-CN和β-LG,无明显的交叉反应,且可检出的牛乳最低掺入量为5%.     

大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

洛美沙星人工抗原的合成和多克隆抗体的制备

采用碳二亚胺法将半抗原洛美沙星与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,采用氯甲酸异丁酯法将洛美沙星与卵清蛋白偶联制备包被原;经紫外光谱分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,并推算出牛血清白蛋白和卵清蛋白与洛美沙星的结合比分别为是1:21和1:5.以洛美沙星-牛血清白蛋白偶联物为免疫原免疫家兔,制备出多克隆抗体,经间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定表明:抗血清效价均超过1:100 000,特异性良好.     

分子力对大豆蛋白透明凝胶作用机理研究

通过对大豆分离蛋白/大豆7S球蛋白凝胶光学和流变学性质与溶剂、牛血清白蛋白、脂肪酸盐浓度关系的深入研究,探讨了分子力对大豆蛋白透明凝胶的作用机理．结果表明氢键、静电力和疏水作用对大豆蛋白透明凝胶的形成具有重要的影响．这为进一步研究大豆蛋白凝胶的光学性质和研制透明的大豆蛋白产品提供理论依据．     

氟苯尼考残留的酶联免疫检测方法的研究

对氟苯尼考进行结构改造制备半抗原及抗原,免疫家兔得到多克隆抗体。经测定,该抗体对氟苯尼考和氟苯尼考胺均有反应,且灵敏度较高,效价达到1∶480 000;在此基础上通过对各实验条件参数的优化建立了间接竞争酶联免疫检测方法,该方法检测限为0.5μg/kg,以20,50μg/kg进行空白样品添加实验,回收率为82.5%～96.0%,批间变异系数在4.1%～15.2%,可初步用于动物组织样本中氟苯尼考残留的检测.     

挤压蒸煮提高豆渣中水溶性膳食纤维含量的研究

以豆渣为原料,采用双螺杆挤压技术来提高豆渣水溶性膳食纤维（SDF）的含量。实验结果表明,在挤压温度为130℃,螺杆转速为500r／min,豆渣水分含量为15％的条件下,豆渣的SDF含量从4.26％提高到18.35％。采用高效凝胶过滤法测定SDF的分子量分布,实验表明,经双螺杆挤压处理后的豆渣的SDF的组分发生了变化。     

大豆蛋白质11S和7S组分及其亚基分析方法的研究述评

对大豆蛋白质组分及其亚基的分析方法进行了评述.主要内容为:利用超速离心技术把大豆蛋白质组分分为4种,以沉降系数分别表示为2S、7S、11S和15S,其中7S和11S是主要组分;利用碱溶、酸沉(冷沉)和缓冲液中沉淀的方法分别分离提取7S和11S,经凝胶过滤或离子交换柱层析提纯;利用碱溶、酸沉和离心分离方法分离提取大豆分离蛋白;利用D isc-PAGE技术初步分析7S和11S组分的个别亚基,利用SDS-PAGE技术测定7S和11S组分及其亚基的相对分子质量和相对含量;以相对分子质量为标准,在SDS-PAGE谱带中划分7S和11S组分的亚基组并测定其相对含量,然后计算7S和11S组分的相对含量和11S/7S比值.上述方法各有其优缺点和适用情况.在讨论的基础上提出食品科学与遗传育种科学要密切结合,培育含有不同蛋白质组分、不同亚基和组分比值的专用大豆品种,既可以深入研究亚基的功能特性,又能开发出新的大豆蛋白制品.     

人APOBEC3G基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备

为了获得人APOBEC3G蛋白及其多克隆抗体,从H9细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得人APOBEC3G基因.将测序鉴定过的APOBEC3G基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在E.coli BL21(DE3)中高效表达,由于APOBEC3G蛋白C端融合了6×His标签,有助于对蛋白的纯化及鉴定.应用酶切技术、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性和蛋白的特异性.纯化后的APOBEC3G蛋白用来免疫日本大耳白兔,用间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度,获得了纯度超过80%的APOBEC3G融合蛋白,抗APOBEC3G多克隆抗体滴度高达1:102 400.     

肝片吸虫18.6kD蛋白抗原双向电泳及免疫印迹分析

从分子水平上研究了肝片吸虫的抗原组分，用制备性SDS－PAGE纯化ES18．6kD蛋白抗原，并用它成功制备了单因子兔抗血清，用这种抗血清来分析肝片吸虫各部分抗原，证实各部分抗原的18．6kD多肽具有相同的抗原决定簇，而且这种抗原决策簇不存在于其它分子量的多肽中，体抗原（BA）和分泌排泄抗原（ES）的双向电泳（Two-dimention Electrophoresis,2-D)分析研究表明，肝片吸虫同一种分子量的蛋白质大多由多种等电点不同的多肽组成，同时也显示了体抗原和分泌一排泄抗原分子量相同的蛋白质所包含的多肽数量和性质是有差异的。     

大豆皂苷Ⅱ的提取及HPLC-MS分析

大豆皂苷是一种生物活性物质,结构不同的大豆皂苷生物活性不同,为了选择性利用B组大豆皂苷,本文考察了B组大豆皂苷的提取、分离方法及B组大豆皂苷Ⅱ的分析方法。采用AB-8大孔吸附树脂柱层析法从脱脂大豆中提取大豆皂苷,并利用硅胶柱层析分离得到B组大豆皂苷,进而通过HPLC-MS法对B组大豆皂苷Ⅱ进行检测。结果表明,本文得出的大豆皂苷提取、分离及检测方法对B组大豆皂苷的选择性应用具有参考价值。