依赖解旋酶等温核酸扩增方法检测副溶血性弧菌

针对副溶血性弧菌的tlh基因的保守序列设计一对特异性扩增引物,在解旋酶和DNA聚合酶的存在下进行HDA等温扩增(65℃)。结果表明:HDA方法成功检测了副溶血性弧菌,检测限可达到1×10~(~(-1)1)mol·L~(-1)。该方法在没有靶标的情况下,可以实现零背景信号扩增,在加入其它菌的情况下,该方法具有较强的特异性和抗干扰能力。HDA方法无需大型精密仪器,仅用普通水浴锅即可完成检测,适合基层实验室推广使用,具有广阔的应用前景。     

溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法的建立

采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)检测体系,对溶藻弧菌进行检测。采用溶藻弧菌的hsp60基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测溶藻弧菌的NASBA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检测方法,灵敏度为6.9×102 cfu.mL-1,高于普通PCR方法。溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法具有较高灵敏度和和良好特异性,并且对仪器要求更低,用普通恒温设备即可进行反应,具有广阔的推广前景。     

变性泡介导的链交换扩增反应对副溶血性弧菌检测的研究

以副溶血性弧菌为研究对象,根据其特异性基因GyrB的保守序列,设计了一对扩增引物,利用SEA反应对该基因进行了特异性扩增。研究结果表明:SEA反应对副溶血性弧菌的检测,检测限可达到0.1fmol、特异性高、抗干扰能力强。     

PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌

以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)toxR基因内366~571 bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针,探针长度为206 bp。选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌,通过斑点杂交法对制备的探针进行特异性检测,结果显示该探针对鳗弧菌杂交阳性,而与弧菌属的其它8株细菌均无交叉反应。这表明该地高辛标记探针具有很强的特异性,它能够很好地对鳗弧菌感染进行检测。     

水产品中致病性弧菌的分离与鉴定

采用传统分析法和仪器法对438份水产品进行了分离与鉴定。结果检出7种致病性弧菌186株,检出率依次为副溶血性弧菌46.2%,溶藻弧菌28.5%,创伤弧菌11.3%,拟态弧菌5.9%,河弧菌4.8%,费尼斯弧菌2.2%和海鱼弧菌1.1%,未检出霍乱弧菌。不同水产品及其不同部位致病性弧菌的污染情况不同,而且传统分析法与仪器法(AMS)具有不同的检出率。     

水产品中致病性弧菌的分离与鉴定

采用传统分析法和仪器法对438份水产品进行了分离与鉴定。结果检出7种致病性弧菌186株，检出率依次为副溶血性弧菌46．2％，溶藻弧菌28．5％，创伤弧菌11．3％，拟态弧菌5．9％，河弧菌4．8％，费尼斯弧菌2．2％和海鱼弧菌1．1％，未检出霍乱弧菌。不同水产品及其不同部位致病性弧菌的污染情况不同，而且传统分析法与仪器法(AMS)具有不同的检出率。     

PCR-核酸薄膜层析法检测创伤弧菌

采用自行建立和优化的PCR-核酸薄膜层析检测体系,对创伤弧菌(Vibriovulnificus)进行检测。采用创伤弧菌的vvhA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明,所建立起的检测法灵敏度为3.6×102 cfu·mL-1,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测方法高一个数量级。创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测方法具有较高灵敏度和良好特异性,操作简单,检测速度快,同时又保护了操作人员的身体健康,具有广阔的推广前景。     

迟缓爱德华氏菌等温扩增快速检测方法的建立

迟缓爱德华氏菌是一种危害淡水及海水水产动物的致病菌,可感染包括鳗鲡、牙鲆、罗非鱼、鲤鱼等在内的多种水产鱼类,极易给水产养殖业造成严重的经济损失.现有的迟缓爱德华氏菌检测方法须借助实验室条件才能完成,检测过程较为复杂.建立一种简便的、无需依赖实验室条件即可快速检测迟缓爱德华氏菌的方法,对水产养殖业预警和该病菌引发病害的防治具有重要指导意义和实用价值.针对迟缓爱德华氏菌的基因组设计了特异性引物和探针,建立了重组酶聚合酶扩增与侧向流试纸条(RPA-LFS)相结合的检测方法,评价了该方法的特异性和灵敏度,并使用人工模拟样本进行了方法验证.结果显示,RPA-LFS法在37℃孵育20 min即可完成核酸扩增步骤,整体检测时间不超过40 min,与参试的嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、灿烂弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌这8种水产和食品中常见的致病菌不发生交叉反应,对迟缓爱德华氏菌培养物的检测限为单次反应1个菌落形成单位(CFU),在富集培养后,可检出1×101 CFU/g人工污染样本中的迟缓爱德华氏菌.该方法具有良好的特异性和灵敏度,不依赖精密仪器,是一种快速、便捷的迟缓爱德华氏菌检测方法,具有良好的应用前景.     

转基因食物中常见外源基因PCR检测方法的建立

通过对CTAB法、胍-氯仿法和试剂盒法三种植物基因组提取方法进行比较,筛选出回收率最大的CTAB法用于本实验样品基因组的提取。其次,以转基因作物中9种常见的外源基因序列为模板,设计出9对引物,拟扩增片段皆小于200bp以适用于深加工食品的检测,并进行了引物的特异性、灵敏度、适用性验证试验。最后,将所建立的普通PCR检测方法应用到了转基因样品的实际检测中。结果表明,所建立的针对转基因作物中9种常见外源基因的PCR检测方法特异性强、灵敏度高,相对检测限可达0.1%～0.5%,约18～90拷贝的基因组。因此,该方法可用于转基因食品及加工品中常见基因的筛选检测。     

中华绒螯蟹苗种生产中副溶血性弧菌病的诊断与防治

为了研究中华绒鳌蟹副溶血性弧菌病的症状、诊断及防治方法，从发病蟹苗体上分离出病原体，提纯培养后经全自动微生物分析仪分析鉴定，再用三糖铁培养基培养确定为副溶血性孤菌，然后进行药酶试验。试验表明，其对氧哌嗪青霉素和呋喃西林高度敏感，对庆大霉素、新霉素等中度敏感，对复方新诺明、青霉素G等轻度敏感，而对链霉素、土霉素等则不敏感。在此基础上提出采用生态学方法进行预防，并采用中草药及抗生素进行治疗的防治措施。     

土壤类芽孢杆菌POR鉴定方法的建立

以gyrB基因为靶标，设计土壤类芽孢杆菌的特异性引物，建立了土壤类芽孢杆菌的特异性PCR鉴定方法。该方法具有较高的特异性，可有效区分胶质类芽孢杆菌及其它各种细菌茵种。该PCR方法也具有较好的灵敏度，可检测只含1到10细胞之间的检测样品。     

基于相对影响潜值最小的过程优化

以相对影响潜值作为基于生态毒理学模型的性能评估指标 ,并估算相对影响潜值 ;将相对影响潜值最小引入到过程优化中 ,提出了基于相对影响潜值最小化的过程优化框架。通过对HDA过程的优化 ,详细阐明了基于相对影响潜值 (RIP)最小的过程优化的实现过程。     

MoP/TiO_2-SiO_2-Al_2O_3的制备及加氢脱芳性能研究

采用溶胶—凝胶法及共浸渍法制备了TiO2-SiO2-Al2O3复合载体,并用共浸渍法制备负载型MoP/TiO2-SiO2-Al2O3催化剂。XRD结果表明,TiO2的晶相衍射峰呈锐钛矿,SiO2则大多以无定型态分散于γ-Al2O3晶体表面。通过原位还原技术对催化剂进行还原处理,在连续固定床反应器上进行活性评价,结果表明,钛硅铝物质的量比对催化剂的活性有很大的影响,在温度为360℃,压力为3MPa,液时空速为1h-1,氢油体积比为500∶1的反应条件下,n（Ti）∶n（Si）∶n（Al）为1∶1∶4,Mo负载量为20%时,MoP/TiO2-SiO2-Al2O3催化剂的加氢脱芳活性最高,达到65.6%。并且TiO2-SiO2-Al2O3三元复合载体比传统的γ-Al2O3和SiO2-Al2O3二元复合载体的活性分别提高了19.6%和13.6%。     

IMS-PCR快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

采用免疫磁分离技术(Immuno-magnetic Separation,IMS)和Polymerase Chain Reaction(PCR)结合的方法来检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)。依据单核细胞增生李斯特氏菌的iap基因序列设计特异性引物,作为PCR扩增的靶基因,经PCR反应得到片段长度为230 bp。结果表明,所建立的IMS与PCR结合方法较常规方法简便、快速、灵敏度高,有很好的应用前景。     

IMS-PCR快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

采用免疫磁分离技术（Immuno-magnetic Separation,IMS）和Polymerase Chain Reaction（PCR）结合的方法来检测单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）。依据单核细胞增生李斯特氏菌的iap基因序列设计特异性引物,作为PCR扩增的靶基因,经PCR反应得到片段长度为230 bp。结果表明,所建立的IMS与PCR结合方法较常规方法简便、快速、灵敏度高,有很好的应用前景。     

多重PCR法检测食品中大肠杆菌O157

以大肠杆菌O157的stx1、stx2、wzy基因为靶基因,建立了一种新的多重PCR检测方法。PCR扩增结果与各参考菌株基因型一致。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因,且为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。     

杂色蛤中副溶血弧菌的定量风险评估

基于国际食品法典委员会关于微生物定量风险评估的理论框架,研究了从水产品批发市场到各零售点（主要为超市）杂色蛤中副溶血弧菌的动态变化情况,对因食用杂色蛤感染副溶血弧菌而引发疾病的风险进行预测,预测出每年、每人因消费生杂色蛤而导致由副溶血弧菌引发的食源性疾病的可能平均值被估计为1.65×10-8.同时对杂色蛤的另一种食用模式——烧烤,也进行了分析研究,确定因其所导致的风险十分小,可以不作为评估的对象.最后根据研究的结果提出针对政府监管部门的管理以及商业运营者和消费者的建议,这些风险管理措施、控制程序和安全食用规范的实施,均可大大降低因食用杂色蛤而感染副溶血弧菌并引发疾病的风险.