豇豆泡菜中产生物胺菌株的筛选鉴定及其产胺特性研究

传统四川泡菜在发酵过程中由于部分微生物代谢作用而产生的生物胺对人体有毒害作用，为探究泡菜中主要产胺微生物种类及其产胺特性，以自然发酵和卤水发酵豇豆泡菜为原料，在不同发酵时期进行取样，以氨基酸肉汤培养基作为选择培养基对产胺菌株进行筛选，利用高效液相色谱对其产胺能力进行定量分析，挑选出高产胺菌株，探究其在不同环境(pH、盐度、温度)下的产胺能力。共筛得26株产胺菌株，经16S rRNA基因测序技术鉴定为8个属，包括肠杆菌属、克雷伯氏菌属、勒克氏菌属、假柠檬酸盐杆菌属、莱略特菌属、泛菌属、魏斯氏菌属和乳杆菌属，其中肠杆菌科菌株具有很强的产胺能力，总产胺量最高为7 400.13 mg/L,主要产胺种类为腐胺和尸胺。温度对于菌株产胺能力的影响相对较小，而pH和盐度对菌株产胺能力有明显的影响，当pH值低至3.5、盐度高达80 g/L时，菌株的产胺能力受到强烈抑制。研究结果可为控制泡菜中产胺微生物生长，降低生物胺积累提供理论参考。     

熏马肠成熟过程中产生物胺氧化酶菌对生物胺作用的研究

该研究以从新疆熏马肠中筛选出来的6株产生物胺氧化酶菌株(鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、戊糖片球菌、植物乳杆菌)作为发酵剂加入熏马肠中,采用PCR-DGGE技术监测菌落动态变化,高效液相色谱法检测熏马肠中生物胺(色胺、腐胺、苯乙胺、组胺、酪胺、尸胺、精胺、亚精胺)含量变化。结果表明,在熏马肠成熟过程中发酵剂对生物胺有一定的抑制作用。其中以腐生葡萄球菌对色胺、腐生葡萄球菌对苯乙胺、木糖葡萄球菌对尸胺、鼠李糖乳杆菌对腐胺、腐生葡萄球菌对组胺和枯草芽孢杆菌对酪胺的抑制作用最为显著,减少程度分别为45.49%、57.54%、40.75%、51.03%、49.28%、64.33%。本研究为熏马肠以及其他发酵肉制品的提高安全性奠定了基础。     

传统发酵肉制品中降解生物胺菌株的筛选鉴定与应用研究

该研究利用高效液相色谱（HPLC）法对65株来源于传统发酵肉制品的耐盐、耐亚硝酸盐乳酸菌所产生物胺进行定性定量检测,筛选出降解率最高的不产生物胺菌株PL-ZL001。经形态观察、生理生化试验研究,并结合16S rDNA序列分析对其进行鉴定,同时探索其作为发酵剂对发酵香肠中生物胺含量的影响。结果表明,菌株PL-ZL001被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,添加菌株PL-ZL001可抑制发酵香肠中6种生物胺的积累,尤其是对毒性最大的组胺含量的控制,效果显著优于商业用木糖葡糖球菌（Staphyloccus xylose）（P＜0.05）。     

贵州镇远道菜中产生物胺细菌的初步筛选及鉴定

该研究选用自然发酵期的镇远道菜为试验对象,分别以不同生物胺前体氨基酸为底物,采用生物胺检测双层培养基筛选出具有产生物胺能力的细菌,通过菌株形态特征、生理生化特征和16S rDNA分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明,从镇远道菜中筛选出7株具有产生物胺性能的细菌,主要有芽孢杆菌（Bacillus sp.）、变形杆菌（Proteus sp.）。其中,菌株YJ0103产苯乙胺和组胺含量最高可达11.43 mg/L、0.43 mg/L,菌株FJ1303产色胺和尸胺含量最高可达4.94 mg/L、1.42 mg/L,菌株FJ1307产酪胺含量最高为2.28 mg/L。研究结果为发酵蔬菜中生物胺含量的调控提供重要支撑。     

生物胺降解菌株的筛选与鉴定

从实验室保藏的不同来源乳酸菌菌株中筛选出具有生物胺降解能力的菌株,测定其在不同盐浓度、pH下的生长能力。结果表明,筛选出3株具有生物胺降解能力的菌株,经16SrDNA序列分析,菌株HM22鉴定为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),菌株HM24为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),菌株YF10042为粪肠球菌(Enterococcus faecalis);其中植物乳杆菌HM24的降解能力最优,对色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺的降解率分别为(25.90±2.30)%,(35.75±2.71)%,(27.61±3.94)%,(25.91±3.76)%,(22.54±2.64)%,(34.55±1.90)%,(39.25±1.86)%,(55.66±7.08)%;当盐浓度为4%～10%时,3株菌株耐受力随盐浓度的增加而降低,;当pH为3.5～9.5时,3株菌株均可生长。     

细菌型豆豉发酵菌株的鉴定

为了明确细菌型豆豉发酵菌株的身份,首先采用形态及生理生化方法进行鉴定,接着提取该菌株的基因组DNA,并根据芽孢杆菌属16S rDNA序列两端的保守性片段设计引物,然后用PCR方法扩增出16S rDNA部分序列,纯化、测序,最后经BLAST搜索进行序列比对和构建系统进化树.结果表明,菌株BBDC3为革兰氏阳性芽孢杆菌,生理生化特征与枯草芽孢杆菌相符;扩增出的16S rDNA部分序列长为1344bp,与序列号为EF488171的枯草芽孢杆菌16SrDNA序列的相似度最高,为99%;系统进化树中,菌株BBDC3与枯草芽孢杆菌AB018487在同一分支.因此,菌株BBI)C3属于枯草芽孢杆菌.     

高产纳豆激酶菌株的分离与发酵纳豆过程中生物胺的变化

采用纤溶活性筛选法从贵州织金农家土制烟熏腊肉中分离到一株高产纳豆激酶菌株GULR06,对菌株的菌株形态、生理生化特征、16S rDNA序列分析以及系统发育分析,鉴定该菌株GULR06为枯草芽孢杆菌。以黄豆为主要原料进行固态发酵制备纳豆,通过高效液相色谱法对发酵过程中的生物胺进行检测,同时考察了发酵过程中纳豆激酶活力和生物量的变化。实验表明：尸胺、腐胺、2-苯乙胺、色胺、精胺、酪胺、亚精胺、组胺都能得到很好的分离,且线性关系良好,R2均大于0.994?0,相对标准偏差均小于4%。在纳豆发酵过程中生物胺总量范围在26.47～72.97?mg/kg之间,对人体不构成任何威胁。54?h时,纳豆激酶的酶活力达到最高,为（5?439.5±149）IU/g、活菌数为13（lg（CFU/g））,此时生物胺总量为（56.18±4.94）mg/kg。     

一株具有降生物胺能力葡萄球菌的筛选及其降解特性

近年来，发酵肉制品因其营养丰富、风味独特等优势而在市场中具备一定优势，但发酵肉中常存在生物胺含量超标等卫生问题，易引发了人们对其安全性的恐慌。该研究通过双层显色培养基初筛、高效液相色谱复筛的方法，再结合菌株的生物胺氧化酶活力大小与生长特性，从传统发酵肉中筛选出一株针对8种常见的生物胺均有一定降解作用的菌株aM，经16S rDNA与糖酵解试验鉴定为沃氏葡萄球菌（Staphylococcus warneri）。该菌株在Luria-Bertani（LB）液体培养基中37 ℃培养24 h后，对生物胺总降解率为18.78%，对苯乙胺、色胺及酪胺的降解率分别为28.56%、23.16%和22.45%。此外，还探究了aM不同环境条件下生物胺降解率的影响，发现其在温度30~40 ℃，pH值7及盐质量浓度为0%~6%时降解率最高，这为之后菌株的实际生产应用中优化发酵条件提供了思路。     

发酵香肠中生物胺生成量的菌株效应分析

本实验对乳杆菌(米酒乳杆菌和戊糖乳杆菌)和片球菌(戊糖片球菌和小片球菌)在发酵香肠中生物胺的生成量进行了分析。结果表明,供试乳杆菌和片球菌均能产生不等量的组胺、尸胺、腐胺、酪胺、亚精胺和精胺,但都不产生色胺,产品中的生物胺生成量表现出明显的菌株效应。采用复配菌种(片球菌+葡萄球菌)发酵可以明显降低香肠中组胺、尸胺、腐胺和酪胺以及总生物胺的含量。     

熏马肠中生物胺氧化酶菌株的筛选与鉴定

为获得良好的产生物胺氧化酶的肉品发酵剂,本试验以新疆不同地区的44种熏马肠样品为研究对象,对产生物胺氧化酶菌进行筛选和鉴定,利用单层培养、双层显色的方法剔除产生物胺菌株,对分离后得到的菌株进行氧化酶试验、抑菌试验、耐盐和耐亚硝酸盐试验。采用DGGE剔除重复菌株,通过HPLC对所筛选菌株氧化生物胺能力进行验证,最后对筛选出的菌株提取DNA,并对其16S rDNA的V6-V8区段进行PCR扩增后测序。结果表明:本次试验共筛选出6株菌有氧化酶特性,耐盐能力在6%以上,耐亚硝酸盐能力在0.15 g/kg以上,对致病性大肠杆菌,单增李斯特菌,金黄色葡萄球菌三种致病菌有良好的抑制效果,经HPLC验证后氧化生物胺能力较强,分别为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus),枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus),木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus),戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。为发酵肉制品的工业化生产和安全性提供了良好的理论依据。