凝胶色谱测定核桃肽分子量方法比较

本文研究了核桃肽分子量的凝胶色谱色谱检测方法,对比两种测定肽类分子量大小常用的凝胶色谱柱:(1)国家标准GB/T22492-2008《大豆肽粉》以及GB/T 22729-2008《海洋鱼低聚肽粉》中推荐的TSK-GEL G2000 SWXL 7.8 mm×300 mm色谱柱;(2)商务部行业标准SB/T 10634-2011《淡水鱼胶原蛋白肽粉》中推荐的Superdex Peptide HR 10/30色谱柱。本文通过对四种单一标准品以及四种不同分子量大小的核桃肽样品在两种色谱条件中的结果对比分析,得出以下结论:TSK-GEL G2000 SWXL 7.8 mm×300 mm色谱柱推荐条件能在30 min内完成核桃肽的分离,检测线性良好,R2=0.97,色谱图峰形良好清晰,检测结果在10000 u以及1000 u区间上偏大;Superdex Peptide HR 10/30色谱柱推荐条件在80 min内完成核桃分离,检测线性较佳,R2=0.99,色谱图峰形出现裂峰与宽峰,检测结果在10000 u以及1000 u区间上偏小。     

高效凝胶色谱法同时测定普鲁兰多糖生物合成过程中分子量和含量

为了建立出芽短梗霉发酵过程中同时测定普鲁兰多糖分子量和含量的高效分子排阻色谱分析方法。采用保护柱(Ultrahyfrogel~(TM)6×40 mm)和凝胶柱(Ultrahydrogel~(TM) Linear 7.8×300 mm),流动相0.1 mol/L NaNO_3,流速0.5 mL/min,柱温30℃,示差折光检测器(Waters 2424),以普鲁兰多糖分子量标准物进行分子量和含量标准曲线测定,利用建立的方法和标准曲线测定出芽短梗霉CGMCC No.11602发酵过程中普鲁兰多糖的分子量大小和含量。结果表明:普鲁兰多糖重均分子量(Molecular weight,Mw)在9.6 kDa~2 350 kDa范围内,线性关系良好(R~2=0.99),含量范围为0.2 g/L~1.0 g/L时,线性关系良好(R~2=0.99),相比于传统的方法,利用发酵液同时测定普鲁兰多糖含量和分子量与传统测定方法结果无显著性差异(p0.05)。通过新的检测方法,不仅能够实现普鲁兰多糖发酵过程中含量与分子量的实时检测,也为可控性生产不同分子量普鲁兰多糖提供技术手段。     

TSK凝胶色谱系统测定注射用盐酸头孢替安有关物质Ⅱ

目的建立测定注射用盐酸头孢替安中的有关物质Ⅱ的高效液相凝胶色谱法。方法采用TSK GEL2000SWXL色谱柱(TOSOH,7.8 mm×300 mm,5μm),以pH 7.0的0.005 mol/L磷酸盐缓冲液[磷酸氢二钠溶液-磷酸二氢钠溶液(50:50)]-乙腈=90:10为流动相,检测波长为254 nm,流速为0.6 ml/min。结果头孢替安对照品溶液在0.19～19.05μg/ml范围内,溶液浓度和峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)。重复性试验RSD为1.42%(n=6),中间精密度试验RSD为1.60%(n=12)。结论该凝胶色谱方法操作简便,专属性强,灵敏度高,结果可靠,适用于注射用盐酸头孢替安中有关物质Ⅱ的检测。     

灵芝菌丝体多糖的分离纯化及其单糖组成分析与分子量测定

前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP—HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪联用装置(SEC—MALLS)测定其绝对重均分子量(Mw),并且根据分子旋转半径与分子摩尔数的关系曲线斜率初步推断其空间构象。结果显示:分离纯化得到3个多糖级分GLMP1、GLMP2和GLMP3,HPSEC检测其峰面积百分比分别为93.58%,97.64%,99.19%,单糖组成分析结果表明GLMP1、GLMP2和GLMP3均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,但单糖摩尔比各异。SEC—MALLS测试GLMP1、GLMP2和GLMP3的Mw分别为4.526×105,4.603×104,3.760×103 g/mol,3个多糖级分构象可能均为高度紧缩且具有分支结构的聚合物。     

凝胶过滤色谱法测定婴儿配方乳粉中α-乳白蛋白

建立了一种用凝胶过滤色谱测定婴儿配方乳粉中α-乳白蛋白的方法。色谱条件:色谱柱为TSK-2000SWXL(7.8 mm×300 mm),流动相为6 mol/L盐酸胍溶液,检测波长280 nm。结果表明:α-乳白蛋白的检出限为2.8μg/m L,回收率在93%~106%之间,相对标准偏差RSD为3.2%。用此方法检测婴儿配方乳粉中α-乳白蛋白,操作简单,结果准确可靠,精密度高,重现性好。     

达肝素钠原料药中游离硫酸盐测定方法的研究

目的建立达肝素钠原料中游离硫酸盐测定方法。方法采用离子色谱法,色谱柱为Waters IC-Pak Anion(50mm×4.6 mm,10μm),流动相为7 mmol/L四硼酸钠-0.1 mol/L氢氧化钠,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,进样量25μL,电导检测器,抑制电流50 mA。结果硫酸根离子与其他离子分离度好,在0.4~15μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.999,重复性试验的RSD为1.6%,检出限为0.05μg/mL,定量限为0.4μg/mL,平均回收率为103.0%,RSD为2.3%(n=9)。结论此法可用于达肝素钠中游离硫酸盐测定。     

不同阿胶酶解液相对分子量分布及补血升白作用对比研究

目的:制备阿胶及其酶解液,对比阿胶酶解前后相对分子量分布及补血、升白的作用。方法:采用TSKge L G2000SWXL(7.8 mm×300 mm,平均孔径512?),流动相为0.1 mo L/L Na CL+0.05%Na N3+0.1mo L/L磷酸缓冲液(p H=6.7),流速0.5 mo L/min,检测波长280 nm,对阿胶原液、阿胶猪胰脏粗酶酶解液、阿胶猪胰脏匀浆酶解液,匀浆空白液进行相对分子量分布测定;采用放血法致小鼠血虚模型及药物环磷酰胺所致小鼠白细胞减少模型,考察阿胶及其酶解液补血升白作用。结果:阿胶原液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间为168 Da~1.7×105 Da,阿胶酶解液的相对分子量在3×103 Da~3×104 Da的区间内显著增多;阿胶酶解液可使失血所致血虚小鼠模型Hb、RBC水平显著提高,环磷酰胺所致小鼠白细胞减少模型的WBC、RBC、Hb水平显著提高。结论:阿胶酶解后相对分子质量减小,且酶解后补血升白效果更优;猪胰脏粗酶及匀浆物与胰蛋白酶的酶解效力相当。     

SEC-MALS测定聚丙烯酰胺衍生物分子量

以0.3mol/l NaCl与0.003mol/l NaN3的水溶液为流动相,采用体积排阻色谱结合多角度激光光散射(M A L S)及示差折光联用技术测定了淀粉接枝聚丙烯酰胺衍生物的分子量及其分布。结果表明,此种衍生物在该流动相中的折射率增量为0.149m l/g,重均分子量为1.04×106,均方根半径为46.9n m,其分子在流动相中呈适当松散的球状多支链构型。在上述研究基础上,本文重点介绍了此种分子量测定技术在MALS检测器校准、样品归一化处理、折射率增量测定及进样分析的具体操作步骤和方法。     

高效液相色谱法对青稞酒中有机酸、醇及糖含量的测定

建立同时测定青稞酒中4种有机酸(草酸、柠檬酸、乳酸、乙酸)、3种醇(丙三醇、甲醇、乙醇)及一种糖(葡萄糖)成分含量的高效液相色谱法,并利用该方法测定不同发酵条件青稞酒中的酸、醇、糖含量。其色谱条件为:色谱柱Carbomix H-NP5,8%(7.8 mm×300 mm,5 μm);保护柱Carbomix H-NP5:8%(7.8 mm×50 mm,5 μm),流动相为2.5 mmol/L硫酸溶液;示差检测器,检测温度35 ℃;流速0.5 mL/min;柱温45 ℃;样品进样量5 μL,一个样品测定周期为33 min。结果表明,其重复性RSD在0.15%～1.68%,回收率在97.20%～103.60%。该方法能够检测出青稞酒中酸、醇、糖的含量,但是其糖、醇、酸含量均有差异。该方法处理样品简单、安全、便捷、准确,具有良好的重复性和回收率,可以作为同时测定青稞酒中酸、醇、糖含量,并且测定甲醇含量的一种方法。     

高效液相色谱法测定门冬酰胺酶效价

建立高效液相色谱法测定门冬酰胺酶含量的方法。采用TSKgel G3000SW色谱柱(7.5 mm×300mm,10μm,TOSOH),以0.lmol/L磷酸盐缓冲液(p H 6.7)(取磷酸二氢钠6.0g、磷酸氢二钠20.2g,加水900ml,用磷酸或氢氧化钠溶液调节p H值至6.7,加水至1000ml),检测波长为280 nm,流速0.6 m L/min,柱温为室温,进样量为20μL。结果显示,门冬酰胺酶效价在100~300IU/m L范围内线性关系良好,线性回归方程:Y=1.7834C-1.8667(R2=0.999),平均回收率为102.36%(RSD=0.4045%)。可见,高效液相色谱法简便、灵敏、重复性好,可作为门冬酰胺酶效价测定方法。     

HPLC测定八正片中大黄素及大黄酚含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定八正片中大黄素及大黄酚含量。方法采用菲罗门C18柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液(42:23:35);流速:1.0 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃。结果大黄素、大黄酚的线性范围分别为0.0267~0.4272μg、0.0417~0.6677μg,总大黄素、总大黄酚、游离大黄素、游离大黄酚的平均加样回收率分别为97.88%(RSD=1.2%)、97.22%(RSD=1.1%)、96.09%(RSD=0.7%)、96.70%(RSD=0.9%)。结论本方法准确、可靠,可用于八正片中大黄素、大黄酚的含量测定。     

GPC法测定香菇多糖的含量及相对分子质量

本文建立了用凝胶渗透色谱法(GPC)测定香菇多糖含量和相对分子质量的方法.采用TSK凝胶色谱柱,以KH,PO4缓冲液为流动相,示差折光检测器检测.以葡聚糖标准曲线作参照,测得香菇多糖L1、L2的重均相对分子质量(Mw)分别为34808和34168,测定L1、L2的质量分数分别为99.96%、95.57%.     

HPLC测定米力农注射液中的乳酸含量

目的 建立测定米力农注射液中乳酸含量的HPLC方法.方法 采用Agilent SB-Aq （4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,甲酸-二环己铵-水（0.1：0.1：100）为流动相,流速：1mL/min,检测波长210nm,柱温：25℃,进样量：20μL.结果 乳酸在0.5～5.0mg/mL的浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为99.7％（RSD=0.37％,n=6）.结论 此法准确、简便、快速,适用于米力农注射液中乳酸的含量测定.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中黄曲霉毒素B1和M1的方法研究

应用超高效液相色谱-串联质谱联用技术（UPLC-MS/MS）,在多反应离子检测（MRM）方式下对食品中的黄曲霉毒素B1（AFB1）和M1（AFM1）污染量进行检测.样品经乙腈-水混合试剂提取,中性氧化铝柱净化,经Agilem ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱（100 mm×4.6 mm,1.8 μm）,以甲醇和10 mmol/L NH4Ac溶液（含0.1％的甲酸）为流动相洗脱分离,以MRM方式进行定量分析.AFB1和AFM1分别在0.12～6.12 μg/L和0.11～2.28 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,相对标准偏差（RSD）＜5％,加标回收率为81.3％～97.2％.该方法具有低成本、准确、快速、简便、灵敏度高等优点,可满足我国对AFB1和AFM1检测限要求.     

HPLC测定中草药育发类化妆品中非法添加的米诺地尔

目的建立检测中草药育发类化妆品中非法添加米诺地尔的方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法。色谱柱:Shimadzu Shim-pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,4.6μm),柱温35℃。流动相A:甲醇,B:水,流速1.0mL/min,检测波长231 nm。结果 0.201~50.360μg/mL范围内,米诺地尔浓度与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999;高、中、低3个水平平均回收率分别为101.7%(RSD=2.5%),96.9%(RSD=1.3%)和96.6%(RSD=1.3%)。结论该方法准确可靠,专属性强。     

离子色谱法测定那屈肝素钙中亚硝酸盐含量

目的建立那屈肝素钙原料中亚硝酸盐测定方法。方法采用离子色谱法,电化学检测器,工作电极为玻碳电极,参比电极为Ag/AgCl,流速1.0 mL/min,进样体积100μL,色谱柱为Waters Anion HC(150 mm×4.6 mm,10μm)。结果亚硝酸根离子与其他离子分离度良好,在0.004~0.056μg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好,r=0.999,重复性试验的RSD为2.1%,检出限为0.002μg/mL,定量限为0.0032μg/mL。平均回收率为101.2%,RSD为2.6%(n=9)。结论该方法可用于那屈肝素钙中亚硝酸盐测定。     

高效液相色谱法测定缓解视疲劳片中原花青素的含量

目的建立缓解视疲劳片中原花青素的含量测定方法。方法原花青素经铁盐催化降解为花青素离子后进行HPLC分析。通过正交试验优化降解条件为:1.0 mL供试品溶液加10 mg/mL硫酸高铁铵溶液0.2 mL和正丁醇-盐酸混合液(97:3,v/v)8.8 mL,100℃水浴加热1 h。色谱条件:Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(45:55),流速0.5 mL/min,柱温30℃,检测波长530 nm。结果原花青素在考察的浓度范围内线性良好(r=0.9994),检出限9.33μg/mL,定量限31.12μg/mL,平均回收率95.56%。结论此方法操作简单,重现性好,可为该产品的质量控制提供参考。     

应用高效液相色谱法测定茶叶多糖

使用SephadexG-100凝胶柱纯化制备得到茶叶多糖,用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定了茶叶多糖的纯度并测定其分子量;同时,使用不同浓度的NaCl溶液作为流动相并用已知分子量的右旋葡聚糖作为标准曲线研究了茶叶多糖在凝胶色谱柱(UltrahydrogelTM500)上的色谱行为,研究发现,由于茶叶多糖的分子量随着流动相的离子浓度的改变而改变,高效凝胶渗透色谱法是不适合用作测定茶叶多糖的分子量的方法的。然后,本研究以自制茶叶多糖纯品作为标准品,以UltrahydrogelTM500(7.8×300mm)为固定相,0.6ml/min蒸馏水为流动相,折光示差检测,对多种茶叶中茶叶多糖含量进行了测定,回收率在80.4%～93.2%(RSD=5.42%)之间,回归方程为:C=0.2503×10-6A-0.0087,r=0.9997,其浓度在0.604～6.04mg/ml范围内呈良好的线性关系。结果显示,该方法是简单、准确、可靠的,适合于作为茶叶多糖原材料和产品质量控制的方法。     

HPLC法测定蓝莓中绿原酸的含量

建立了高效液相色谱法对蓝莓中绿原酸含量的测定方法,采用Aglient C18(250mm×4.6mm,5um)色谱柱;流动相为乙腈:0.4%磷酸溶液为13:87;流速为1.0mL/min;检测波长:327nm。结果显示,绿原酸在浓度为3.3×10-3—40×10-3mg/mL范围内,线性关系良好(Y=61.07x+8.896,R2=0.99996),精密度RSD为3.33%,平均回收率为106.01%,RSD为1.22%。本方法简便,结果准确,重现性好,可以作为蓝莓中绿原酸含量检测的良好方法。