扁杏仁抗氧化肽的制取工艺研究

研究了扁杏仁抗氧化肽的酶解制备工艺及其体外抗氧化活性。以羟基自由基的清除率和水解度为考察指标,用响应面分析法研究酶用量、底物浓度、温度和p H对扁杏仁抗氧化活性肽酶解工艺的影响。得出优化后的酶解条件为:碱性蛋白酶-风味蛋白酶的复合酶用量6725 U/g(碱性蛋白酶为3645 U/g,风味蛋白酶为2690 U/g)、底物质量分数为3%、温度60℃、p H8.28,在该条件下制备的扁杏仁抗氧化活性肽对羟基自由基的清除率和水解度分别为84.18%和20.87%。     

不同胃肠消化阶段紫花芸豆蛋白的抗氧化活性和结构特征

以紫花芸豆蛋白为原料,通过胃肠模拟消化模型解析胃肠不同消化阶段芸豆蛋白水解物的抗氧化活性及结构变化。结果表明:经胃肠蛋白酶消化,芸豆蛋白的溶解度、水解度显著提高,与胃部消化相比,胃肠消化芸豆蛋白水解度增加120.27%,溶解度下降3.46%。电泳图谱及抗氧化活性分析表明,肠道消化期间,因胰蛋白酶作用,蛋白亚基水解作用增强,导致低分子质量肽段增加,分子质量<14.4 ku的亚基条带加深,与胃部模拟消化相比,水解产物抗氧化能力显著增强,总抗氧化能力、Fe还原能力、ABTS清除率分别提高25.31%,85.76%,53.80%。对胃肠连续消化0.5,2,3 h水解产物超滤分级,随着消化时间的延长,分子质量<10 ku的消化产物增加,使水解产物表现出较强的抗氧化能力。傅里叶变换红外光谱分析表明,胃蛋白酶水解使蛋白质结构展开,空间结构较为紧凑的β-折叠被破坏,变为较松散的β-转角,继续肠道消化后芸豆蛋白稳定结构恢复,β-折叠由34.63%增至41.29%。胃肠消化产物中暴露巯基、总巯基含量、含硫氨基酸总量随水解程度的加深持续下降,肠道消化后,消化产物的暴露巯基、总巯基含量、含硫氨基酸总量分别降低为(4.94±0.23)μmol/g、(6.14±0.20)μmol/g、2.08 μg/g。SEM扫描分析结果表明,水解使芸豆蛋白呈絮状聚集,与胃部消化相比,肠道模拟消化后蛋白微观结构有序性增加,消化产物表面呈细密颗粒状。     

微波辅助菜籽蛋白水解产物的高效制备及其部分功能特性研究

利用微波辅助技术,建立了高效制备菜籽多肽的工艺,并对其功能特性和抗氧化活性进行研究。结果表明微波设定温度为50℃,功率为500 W时的水解进程曲线显示,酶解13 min时水解度即可达25.64%。且与菜籽蛋白比较,酶解产物的溶解性及起泡性随着水解度的增大不断升高;持水性/持油性优于菜籽蛋白;乳化能力指数和乳化稳定性指数在水解度为10%时均达到最大。抗氧化活性体系研究表明,不同水解度的酶解产物均具有一定程度的抗氧化活性,且抗氧化活力取决于组成酶解产物的多肽的分子质量大小及多肽种类。     

桃仁多肽的酶法制备及其抗氧化活性分析

以桃仁蛋白为原料,对响应面法优化多肽制备条件和酶解多肽各组分的抗氧化活性进行了研究。结果表明:以底物浓度3.5%、pH 10.4、加酶量4 200 U/g、酶解时间4.9 h条件下进行碱性蛋白酶酶解,可获得桃仁蛋白的最高水解度(61.12±0.7)%和多肽得率(67.91±0.5)%。桃仁蛋白及其酶解物的SDS-PAGE凝胶电泳图表明,酶解后的多肽分子质量大部分小于12 000 u。酶解液(PPH)及其超滤分离所得4组分分别采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、亚硝酸根离子清除能力和总抗氧化能力4个体外抗氧化活性测试,结果显示不同分子质量组分间的抗氧化活性存在显著性差异(P0.05),分子质量越小,其抗氧活性越强。RP-HPLC分析表明,抗氧化活性最强的P-IV组主要由9种具有一定疏水性的多肽组成。     

发酵法制备沙光鱼多肽及其抗氧化活性

将米曲霉接种到pH5.0 的沙光鱼匀浆液中进行发酵培养,利用米曲霉产生的蛋白酶水解沙光鱼蛋白。研究发酵过程中蛋白酶的产生及沙光鱼蛋白的水解动态;对发酵液进行超滤,测定不同截留分子质量的发酵液清除自由基的活性及抗氧化活性。结果表明：随着发酵时间的延长,沙光鱼蛋白的水解度和多肽得率不断增加,多肽的平均链长度降低。发酵48h 后,多肽链平均长度为14,水解度为26.6%,多肽得率最高达到8.98%,抗氧化能力较强。不同截留分子质量的多肽液中,平均肽链长度为14 个氨基酸残基的多肽超滤液体外抗氧化能力较强。     

酶法制备大豆蛋白活性肽的工艺优化、分离纯化及抗氧化活性研究

以大豆蛋白粉为原料,水解度为考核指标,在单因素试验的基础上,利用正交试验对碱性蛋白酶制备大豆蛋白活性肽工艺进行优化。结果表明:最佳水解工艺为水解pH 11、水解温度55℃、加酶量0.6 g,在此条件下水解度为24.8%。利用Sephadex G-25凝胶柱对产物进行分离纯化,产物和对比标准物的洗脱图谱分析表明,绝大部分产物是小相对分子质量的蛋白活性肽,相对分子质量大都在1 400以下。产物的抗氧化活性随着水解度的增加而逐渐增强,当水解度为25.5%时,其抗脂质体氧化活性为68.6%、对超氧阴离子自由基清除能力为41.2%;当水解度为29.2%时,对Fe~(3+)的还原能力为0.137。     

大豆蛋白酶解产物抗氧化活性与水解度相关性研究

利用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解大豆分离蛋白,研究了底物浓度、加酶量、p H、温度因素对酶解液水解度和还原力的影响,并在此基础上用响应面分析法优化酶水解条件。以还原力为主要指标考察酶解产物的抗氧化活性,通过水解度与还原力的比较,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物的抗氧化活性与水解度之间没有直接线性关系。在实验得到的最佳条件下制备的大豆肽抗氧化活性良好,具有良好的应用前景。     

酶因子对水飞蓟蛋白酶解液抗氧化活性、理化指标和感官品质的影响

为促进水飞蓟蛋白的高效利用,研究不同蛋白酶对酶解液抗氧化活性、水解度、氮回收率、苦味值等指标的影响。结果表明,与糜胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶相比,木瓜蛋白酶为水飞蓟蛋白的最佳酶解用酶,可获得较高的抗氧化活性、适宜的水解度和氮回收率,以及较低的苦味值;当酶解温度为45～50℃、时间240～270 min和pH 6～7时,酶解液抗氧化活性可达到14U/mg蛋白,水解度和氮回收率分别在20%和60%以上,而苦味值低于2,酶解液总体质量较优,可作为功能性食品的配料。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

扁杏仁肽对血管紧张素转化酶的抑制作用研究

采用碱溶酸沉法从陕北扁杏仁制得杏仁总蛋白,并采用Osborne法分级制备清蛋白、醇溶蛋白、球蛋白和谷蛋白;用碱性蛋白酶Alcalase水解,超滤分离,制备不同分子量总蛋白杏仁肽和分级蛋白杏仁肽;利用高效液相色谱法测定水解物,系统研究杏仁肽对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。结果表明,不同分子量的总蛋白杏仁肽均具有ACE抑制活性,且肽段分子量越小,抑制活性越强;分级蛋白杏仁肽中,谷蛋白肽的抑制活性最强,分子量低于1 ku的谷蛋白肽的IC50值为(96.21±0.06)μg/m L。     

伊吾县野山杏仁多肽的提取及其抗氧化活性的研究

本文以新疆伊吾县野山杏仁为原料,采用酶解法,以多肽水解度为考察指标,分析木瓜蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶以水浴酶解和磁力搅拌酶解方式,对野山杏仁多肽水解度的影响。采用全自动氨基酸分析仪测定杏仁多肽样本中水解氨基酸的种类和含量。选择1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH?)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O~(2-)?),以VC为对照,测定不同浓度多肽液对这三种自由基的清除率,分析比较不同浓度野山杏仁多肽对三种自由基的清除能力,探讨野山杏仁多肽的体外抗氧化活性能力。实验结果表明:磁力搅拌酶解方式下利用木瓜蛋白酶多肽水解度为35.02%,为野山杏仁多肽水解最优方法;野山杏仁蛋白中富含丰富的氨基酸,是一类较为优质的植物蛋白资源;野山杏仁多肽具有清除自由基能力,其中对DPPH?自由基清除率最强为75.48%,有较强的抗氧化能力。     

杏仁蛋白Alcalase水解工艺及其体外抗氧化活性的研究

为深入开发利用杏仁蛋白资源,采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度为指标对酶解过程进行研究,在单因素试验基础上以水解度和DPPH自由基清除率为指标进行酶解正交试验.结果表明制备抗氧化能力较强的杏仁蛋白水解物的最佳条件为:pH 8.0,温度55 ℃,酶底比4%,底物浓度5%.在此条件下进行水解试验,水解度为21.02%,水解物对DPPH自由基的清除率为66.13%.     

豌豆蛋白水解物的分离及其抗氧化活性的研究

将豌豆蛋白用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶水解0.5～6 h,用pH-Stat法测定其水解度;测定水解物的还原能力、清除自由基能力来分析豌豆蛋白水解物的抗氧化作用模式。将4 h的豌豆蛋白碱性蛋白酶水解产物采用葡聚糖凝胶G-25分离豌豆肽,测定各片段的抗氧化活性,以确定豌豆抗氧化肽的分子量。结果得出豌豆蛋白水解产物的自由基清除能力、还原能力都是随着水解时间的延长而增大。底物浓度为7%、水解4 h的豌豆蛋白水解产物与其它水解条件下的水解产物相比,具有较高的抗氧化活性。采用G-25分离豌豆肽的结果表明,抗氧化活性较高的豌豆肽的平均分子量约640Da左右,其抗氧化能力是豌豆肽原液的2倍。     

黑豆蛋白质酶水解物体外抗氧化活性的研究

采用Alcalase、Neutrase和Flavourzyme蛋白酶水解2种不同类型的黑豆蛋白,在其最适水解条件下,通过单酶水解和分阶段多酶复合水解方式制备黑豆蛋白水解物,利用邻苯三酚自氧化法测定比较其体外抗氧化活性.结果表明:在水解度相近的情况下,早熟大粒黑豆蛋白的Alcalase单酶水解物的抗氧化活性高于晚熟小粒黑豆蛋白;在水解时间相同的情况下,黑豆蛋白的Alcalase单酶水解物的抗氧化活性高于Neutrase和Flavourzyme蛋白酶;Alcalase和Neutrase分阶段水解90 min高于Alcalase单酶水解4 h的黑豆蛋白水解物的抗氧化活性;试验获得的具有较高抗氧化性的质量分数为2%的黑豆蛋白酶水解物,对邻苯三酚自氧化的抑制率与0.01%的维生素C水溶液相近.     

末水坛紫菜蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化与体外抗氧化活性

通过单因素试验、Box-Behnken设计响应面分析法优化酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白工艺,并测定不同水解时间的酶解产物体外抗氧化活性与分子质量分布。结果表明:当水解时间4 h、底物质量浓度2 g/100 mL、加酶量4 240 U/g、pH 3.7、温度54℃的条件下,水解度可高达11.40%。此外,通过调节水解时间以控制水解度,探讨了水解度与酶解产物抗氧化活性的关系,发现当水解时间为4 h、水解度为11.40%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性最强,其清除DPPH自由基的半抑制率质量浓度为0.68 mg/m L,分子质量小于1 kDa的小分子肽占总量的73.46%。同时,采用凝胶色谱层析对末水坛紫菜酶解产物进行了分离纯化,得到末水坛紫菜抗氧化肽(Porphyra haitanensis antioxidant peptide,PHAP),其质量浓度为1 mg/m L时对DPPH自由基的清除率为73.32%,对羟自由基的清除率为30.15%。最后通过建立H2O2诱导人肝癌HepG2细胞的氧化应激模型,证实了PHAP对HepG2细胞的氧化损伤具有修复作用,可增强超氧化物歧化酶的活性,降低脂肪氧化产物丙二醛的含量。     

水解度对玉米蛋白水解物抗氧化性和乳化性影响的研究

试验主要探讨了水解度影响玉米蛋白抗氧化肽乳化能力的机制。试验采用碱性蛋白酶对玉米蛋白分别水解0,0.5,1,2和5 h。测定玉米蛋白抗氧化肽的抗氧化活性、分子排阻色谱、乳化活力、乳化稳定性、ζ-电势以及乳化液微观结构的变化趋势。研究结果表明,随着水解度的增加,玉米蛋白抗氧化肽的金属离子(Cu2+和Fe2+)螯合能力、还原能力以及抑制脂质氧化能力显著增加(p0.05);同时,乳化活力和乳化稳定性均呈现先上升后下降的趋势。通过分子排阻色谱分析可进一步解释乳化性和抗氧化性趋势变化的原因。当水解度为8.7%时,玉米蛋白水解物乳状液的乳化活性,乳化稳定性和ζ-电势达到最大值,此时乳状液的稳定性最好。因此,适度水解可以获得具有较高物理稳定性同时具有一定抗氧化能力的玉米蛋白水解物。     

双酶法制得米糠蛋白肽抗氧化组分的分离纯化

利用双酶法水解制得了米糠蛋白。以制得的具有生物活性的米糠蛋白多肽混合液为原料,分离纯化得到了米糠蛋白抗氧化肽,为米糠及其蛋白的深加工奠定理论基础。利用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶双酶水解制备米糠蛋白肽。以DPPH·,·OH清除率为主要指标,采用不同截留分子量(1.0×10~4和3×10~3 Da)的超滤膜对米糠蛋白肽进行初步分离,获得3种不同分子质量组分,再利用SP-Sephadex C-25离子交换色谱和Sephadex G-25凝胶色谱,逐步分离纯化出单一的抗氧化肽段。采用RP-HPLC证明了分离肽段的均一性,同时分析检测出该肽段的氨基酸组成,明确肽段抗氧化活性与其氨基酸组成的关系:它是由13种氨基酸组成,其中Glu和Asp摩尔分数分别为21.46%和15.57%,还有7种人体必需氨基酸,占米糠蛋白抗氧化肽氨基酸总含量的39.2%。     

扁杏仁油微胶囊的制备及质量评价

以魔芋胶(KGM)和大豆分离蛋白(SPI)为壁材,分子蒸馏单甘酯(GMS)为乳化剂,应用响应面分析法进行配方优化,以喷雾干燥法制备了扁杏仁油微胶囊,并对扁杏仁油微胶囊的包埋率、抗氧化性、微观结构进行测试。结果表明:扁杏仁油微胶囊最佳配方是扁杏仁油质量分数27%,魔芋胶质量分数2.8%,分子蒸馏单甘酯质量分数1.8%,大豆分离蛋白质量分数68.4%,制得的扁杏仁油微胶囊包埋率达到93.9%。产品表面光滑,粒径均匀,具有抗氧化稳定性。     

限制性酶解对大米蛋白结构、功能特性及体外抗氧化活性的影响

利用胰蛋白酶对大米蛋白进行限制性酶解,得到2%,4%和8%水解度的大米蛋白水解产物,探究不同水解程度对大米蛋白的结构、理化性质及体外活性的影响。结果表明,限制性酶解对大米蛋白的溶解性及乳化性有很大提升,当水解度低于4%时,酶解产物具有良好的热稳定性,然而,随着水解度的增大,其热稳定性呈下降趋势。因酶解作用,大米蛋白中β-转角含量升高,故具有更加舒展的二级结构。其表面呈疏松多孔的微观结构。相比于天然大米蛋白,酶解产物体外抗氧化活性显著提高,而且在高浓度时DPPH和ABTS自由基清除率与同浓度的BHT相当。限制性酶解作为一种温和、安全且高效的改性方法,可有效改善大米蛋白的功能特性,提高其体外抗氧化活性,以丰富大米蛋白资源的应用。     

两步水解法制备玉米-大豆复合抗氧化肽及其稳定性研究

采用麦芽粉和碱性蛋白酶Alcalase两步水解玉米醇溶蛋白和大豆分离蛋白的混合物(质量比1∶1)制备复合抗氧化肽,以水解度、可溶性蛋白含量和抗氧化活性为指标,对第二步Alcalase的水解条件进行优化,确定两步水解法制备复合抗氧化肽的最适条件。另外,对复合抗氧化肽相对分子质量分布、稳定性和氨基酸组成进行了研究。结果表明,制备复合抗氧化肽的最适条件为在底物质量分数10%、pH 5.5、50℃、酶(麦芽粉)底质量比30%条件下水解3 h后,再在底物质量分数10%、pH 8.5、60℃、酶(Alcalase)底质量比0.75%条件下继续水解3 h。在最适条件下,水解度、可溶性蛋白含量、羟自由基清除率和亚铁离子螯合率分别为36.32%、36.83 mg/mL、40.01%和86.83%,相对分子质量主要分布在300~6 500 Da (含量92.44%)范围内,必需氨基酸指数(EAAI)值为8.02(n=9),属于优质蛋白源。复合抗氧化肽具有热稳定性,在中性及碱性条件下稳定,但不耐受酸性(pH 3~5)、4℃贮存和反复冻融的加工条件。