荔枝果肉苯丙氨酸解氨酶特性的研究

研究了荔枝果肉中苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的酶学特性。荔枝PAL动力学曲线并不遵循米氏方程,其最适底物浓度为2 mmol/L。在硼砂-硼酸缓冲液中,荔枝PAL的最适反应p H为8.7。PAL不耐酸碱,尤其不耐酸。荔枝PAL的最适反应温度为45℃,高于75℃则易于钝化,具有较强的耐热性。L-酪氨酸和L-半胱氨酸对荔枝PAL均有明显的抑制作用;金属离子中,Fe2+和Fe3+对荔枝PAL活性具有明显的促进作用,而Ca2+、Cu2+、Co2+、Ag+离子则对其活性有明显的抑制作用。     

芦笋中多酚氧化酶(PPO)酶学特性研究

文章采用分光光度法,以邻苯二酚为底物,研究了芦笋组织中多酚氧化酶(PPO)的活性,以及最适底物浓度,最适pH值,最适温度,热稳定性和柠檬酸、L-半胱氨酸、抗坏血酸、亚硫酸钠等抑制剂对PPO的抑制效果。结果表明:其最适底物浓度为0.2mol/L;最适pH范围为6.6-7.0,pH在6以下可抑制酶活;最适温度为40℃,80-90℃热处理1-2min可使酶失活;抑制剂抑制效果由强到弱依次为:抗坏血酸>L-半胱氨酸>亚硫酸钠>柠檬酸。     

冬枣果实苯丙氨酸解氨酶酶学特性的研究

研究了冬枣果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶学特性。L-苯丙氨酸为枣果实PAL的反应底物,结果表明,最适底物浓度为1.0 mmol/L。枣果实PAL属于别构酶,具有2个米氏常数,Km分别为0.115×10-4、8.177×10-4 mol/L。枣果实PAL最适温度为50℃,最适p H为8.8。在浓度为0~4.0 mmol/L范围里,L-半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸均对枣果实PAL活性有一定的抑制作用,而抗坏血酸和蔗糖对PAL有激活作用。金属离子对PAL激活作用由强到弱依次为:Cu2+Fe3+Fe2+Na+;金属离子对PAL抑制作用由强到弱依次为:Al3+Mg2+Mn2+Ca2+Zn2+K+。研究结果揭示了冬枣果实PAL酶学特性,为通过调控枣果实PAL酶活性改善果实贮藏特性提供了理论依据。     

山药多酚氧化酶的特性和抑制研究

以邻苯二酚为底物,410nm处测定山药多酚氧化酶(PPO)的活性,研究了pH、温度、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对山药多酚氧化酶活性的影响。结果表明,山药PPO最适反应pH为6.5,最适反应温度为40℃;柠檬酸、草酸、L-抗坏血酸、亚硫酸氢钠及半胱氨酸五种抑制剂对山药PPO均有抑制作用,其强弱依次为:L-半胱氨酸>抗坏血酸>草酸>柠檬酸>亚硫酸氢钠;硫酸铜和三氯化铁均有加速酶促褐变作用,强弱为CuSO_4>FeCl_3。     

双孢菇多酚氧化酶的特性和抑制研究

以邻苯二酚为底物,410nm处测定双孢菇多酚氧化酶(PPO)的活性,研究了pH值、温度、底物浓度、抑制剂和激活剂对PPO活性的影响。结果表明:PPO最适温度35℃,最适pH6.0;柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸氢钠4种抑制剂对PPO均有抑制作用,其抑制作用强弱依次为抗坏血酸L-半胱氨酸NaHSO3柠檬酸。CuSO4和FeCl3对PPO均有激活作用,三氯化铁的激活作用较明显。     

茄子过氧化物酶的特性研究

本研究采用分光光度法,以愈创木酚为底物,对茄子组织中过氧化物酶的活性、最适底物浓度、最适pH、最适温度以及过氧化物酶的热稳定性,Na+、K+、Ca2+等金属离子对过氧化物酶反应的影响作了一定的研究。结果表明:过氧化物酶的最适底物浓度为0.4mol/L,最适pH范围为5~6,最适反应温度为30℃,80℃处理4min以上可使酶基本失活,试验中用到的多种金属离子对过氧化物酶的活性都能起到比较明显的抑制作用。     

底物和产物对鲜切山药苯丙氨酸解氨酶活性的影响

本实验以山药为材料提取苯丙氨酸解氨酶(PAL),研究底物和产物对山药PAL活性的影响。结果表明:苯丙氨酸促进PAL活性,PAL最适底物浓度为200mg/L,底物浓度过高或过低对酶活力都不利;反式肉桂酸抑制PAL活性,最强抑制浓度为120mg/L,高于或低于这个浓度抑制作用减弱;阿魏酸抑制PAL活性,最强抑制浓度为40mg/L,之后随浓度增加抑制作用减弱,浓度增加至100mg/L时抑制作用最弱,以后随浓度增加抑制作用又增强。     

茯苓多酚氧化酶酶学特性及褐变抑制

以茯苓为供试材料,采用分光光度计法测定多酚氧化酶(PPO)活力,研究pH值、温度、底物浓度以及抑制剂等因素对茯苓PPO活性的影响。结果表明,茯苓PPO最适pH值为6.5,最适温度为35℃,最适底物浓度为0.06 mol/L。PPO酶促反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=0.024 4 mol/L,Vmax=121.95 U/min。NaCl、抗坏血酸、L-半胱氨酸和柠檬酸溶液对茯苓PPO均有抑制作用,随着质量浓度的升高,抑制效果越好;相同质量浓度下,L-半胱氨酸抑制作用最强,其次是抗坏血酸和柠檬酸,最后是NaCl。     

火龙果果皮多酚氧化酶特性的研究

本实验对火龙果果皮中多酚氧化酶(PPO)的活性及不同抑制剂的抑制效果进行研究。结果表明：火龙果果皮多酚氧化酶的最适pH为7.0,最适温度为 40℃,底物浓度与酶活性成正相关;亚硫酸氢钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸、柠檬酸等对该酶表现出不同的抑制作用,抑制效果为：亚硫酸氢钠＞抗坏血酸＞L-半胱氨酸＞柠檬酸,抗坏血酸的浓度越高,对酶的抑制效果越明显。     

“黑美人”马铃薯多酚氧化酶的特性研究

以邻苯二酚为底物,在413nm处测定黑美人马铃薯多酚氧化酶(PPO)的活性,研究了温度、pH、底物浓度对其活性的影响,并建立了酶促褐变反应动力学方程,探讨了L-半胱氨酸、抗坏血酸、柠檬酸、EDTA及亚硫酸氢钠五种抑制剂对酶促褐变的抑制效果。结果表明:黑美人马铃薯多酚氧化酶最适反应pH为6.3;最适反应温度为35℃;酶促褐变反应动力学符合米氏方程描述的单底物酶促反应动力学,以邻苯二酚为底物,Km=0.0011mol/L,Vmax=142.23U/min.g;动力学方程为V=142.23[S]/(0.0011+[S]);五种抑制剂均对PPO酶促褐变具有抑制作用,其强弱依次为亚硫酸氢钠>L-半胱氨酸>抗坏血酸>EDTA>柠檬酸。     

山药中多酚氧化酶的活性测定及其护色研究

研究了山药中多酚氧化酶(PPO)的最适pH值、最适温度,设计了不同护色方案,以确立山药的最佳护色条件。采用分光光度法研究pH值、温度对酶活性的影响;比较不同护色液对酶活力的影响;将山药经不同护色条件护色后,低温烘干,粉碎过筛得山药粉,用分光光度法测定其甲醇-水溶液(1∶1)的吸光度。结果表明,以邻苯二酚为底物,山药PPO的最适pH值为5.6,最适温度为35℃,山药的最佳护色条件为:以0.25%的Na2SO3为抗氧化剂,并配以0.25%的柠檬酸和1.5%的NaCl为护色液。     

南瓜谷氨酸脱羧酶酶学特性及γ-氨基丁酸富集条件

对生鲜南瓜(Cucurbita moschata)所含谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)的最适反应温度、最适pH、热稳定性和冷冻稳定性等酶学特性进行研究,并利用其富集γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA),探索了反应时间、南瓜品种、缓冲体系、南瓜及味精添加量、料水比对富集效果的影响。结果表明,南瓜GAD最适反应温度为30~35 ℃,最适pH为5.8。南瓜GAD对热比较敏感,50 ℃保温30 min,酶活力损失20%,70 ℃以上保温30 min可导致酶活力完全丧失。冷冻对GAD影响较小,但长期冷冻仍会导致酶活力损失,冷冻8周酶活力损失36%。GABA最适富集条件为:以pH5.8,0.2 mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液作为反应溶液,南瓜与缓冲液比例为1:3,南瓜添加量25%,味精添加量1.5%,30 ℃反应18 h,反应液中GABA浓度可达7633.2 mg/L,转化率为93.3%,单位质量南瓜GABA富集量为30.5 mg/g,与未富集时相比提高了132倍。     

芦笋过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶特性及抑制条件的研究

采用分光光度法对芦笋组织中与老化相关的过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶学特性进行了研究。结果表明,芦笋POD和PAL的最适pH分别为4.0和8.8,且在pH值6的柠檬酸缓冲液中酶活力均明显下降;最适温度分别为55℃和60℃,且在20℃以下和60℃以上活性显著降低;1mmol/L Ca~(2+)显著(P<0.05)抑制芦笋POD和PAL酶的活力;POD和PAL最适底物浓度分别为70μL/100mL和0.02mol/L,Km分别为2.694×10~(-4)mol/L和0.1381mmol/L。     

大薯膳食纤维的提取及其对自由基的清除作用

以大薯粉为材料,设计四因素三水平正交试验,酶法提取膳食纤维。结果表明：0.6% 混合酶(α - 淀粉酶与糖化酶质量比为6:1)于80℃处理80min,0.6% 蛋白酶在60℃处理60min,对糖类、蛋白质的脱除作用较彻底。以体外实验研究不同质量浓度(5～35mg/mL)的膳食纤维鲜样对自由基的清除效果,设计3 种不同反应体系：1,1- 二苯基-2- 苦味肼基自由基(DPPH 自由基)、超氧阴离子自由基(O2·)、羟自由基(·OH)。结果表明：大薯膳食纤维对3 种自由基都有一定的清除能力,平均清除率分别为24.30%、51.08%、46.07%。即对3 种自由基清除能力大小顺序为：超氧阴离子自由基＞羟自由基＞二苯代苦味酰自由基。其中质量浓度15mg/mL 的膳食纤维对这3 种自由基的清除达到高峰,清除率分别为27.52%、60.0%、48.43%。     

合成嗜热酸性淀粉酶的毕赤酵母表达

把密码子优化后的超耐热酸性α-淀粉酶的基因BD5088,引入载体pPIC9K中,将正确构建的重组质粒pPIC9K-BD5088转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,重组超耐热酸性α-淀粉酶PrBD5088在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外。该酶受甲醇的严格调控和诱导,在诱导培养5 d后酶活力达到最大值,表达量可达到约200 mg/L。与原核表达产物ErBD5088相比,PrBD5088的酶学性质发生了一定的改变。其最适反应温度由80℃增加到90℃。最适反应pH值仍为pH5.6,但范围更宽,在pH值5.0～6.5之间,其相对酶活在90%以上,在pH4.0～8.0范围内酶活性保留50%以上。而ErBD5088则只在pH5.0～7.0范围内能维持活性的50%以上。且PrBD5088的温度稳定性远高于ErBD5088。PrBD5088在100℃条件下热处理1 h仍具有80%以上的酶活力,而ErBD5088相同条件下的半衰期只有20 min。此外,Ca2+和Zn2+对维持rBD5088活性和稳定性会产生轻微促进作用,该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。SDS-PAGE测得该酶的分子量为56 ku,高于原核表达的酶蛋白。重组α-淀粉酶PrBD5088不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象。本实验结果表明O-连接糖基化可适当提高PrBD5088的热稳定性、最适温度和酸性pH条件下酶活性。     

低温纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

从连云港高公岛海域采集海水和海泥样品,通过2216E平板初筛和摇瓶发酵复筛,得到一株产纤维素酶的菌株Z6。对该菌生物学特性进行研究,菌株Z6为革兰氏阴性杆状细菌、有荚膜、无芽孢。菌的生长温度范围为4～35℃,最适生长温度为25℃;最适生长pH为8;最适NaCl浓度为3%。根据其形态特征、生理生化特性和16SrRNA序列分析结果,初步鉴定为交替假单孢菌属(Pseudoalteromonassp.)。根据菌株16SrRNA同源性和系统进化树分析进一步鉴定菌株Z6属于Pseudoalteromonas carrageenovora。目前尚无Pseudoalteromonas carrageenovora产生低温纤维素酶的报道。菌株Z6所产纤维素酶的最适作用温度和pH分别为30℃和pH8,在10℃仍具有较高活性,具有较大的潜在工业应用价值。     

毕赤酵母液态木聚糖酶的酶学特性研究

研究了毕赤酵母液态木聚糖酶的部分酶学特性,包括其最适温度、最适pH、温度稳定性和热失活动力学、pH稳定性和pH失活动力学,以及金属离子、有机溶剂对毕赤酵母液态木聚糖酶酶活特性的影响。结果表明,毕赤酵母液态木聚糖酶的最适温度为55℃、最适pH为pH5.6;温度为25℃时,pH5.6-6.4该液态木聚糖酶失活速率缓慢。毕赤酵母液态木聚糖酶在50℃以下在150 min内比较稳定的,70℃在30 min内几乎全部失活。Cu2+,Zn2+,Fe3+表现为不同程度的抑制作用。Mn2+,Mg2+对木聚糖有激活作用。乙醇和甘油对毕赤酵母液态木聚糖酶有轻微的抑制作用,蔗糖和Vc对毕赤酵母液态木聚糖酶有不同程度的激活作用。     

中温α-淀粉酶酶解怀山药的工艺研究

研究了中温α-淀粉酶酶解怀山药的工艺条件。以可溶性固形物得率为指标,在单因素实验的基础上,通过正交实验确定了中温α-淀粉酶的最佳酶解工艺条件。结果表明,温度对结果的影响最大,其次是pH值和酶加入量,时间的影响最小。中温α-淀粉酶酶解怀山药的最佳工艺条件为:酶加入量为0.060mg/mL,pH值为7,温度为80℃,时间为20min,在此条件下,可溶性固形物得率为24.259%。     

益生菌山药饮料发酵工艺优化及其冷藏稳定性

本研究以山药粉为原料,益生菌Lactobacillus plantarum P-8和Bifidobacterium lactis V9为发酵剂,对发酵工艺进行优化,以得到一种兼具山药营养价值与益生菌益生特性的益生菌山药饮料。通过单因素实验研究发酵时间、接种量、发酵温度对饮料中活菌数、滴定酸度以及pH的影响,在此基础上结合响应面分析获得发酵益生菌山药饮料最优发酵工艺参数,即接种量为 2×106 CFU/mL、发酵时间为19.1 h、发酵温度为37 ℃。在此条件下饮料活菌数为4.3×108 CFU/mL,滴定酸度为105.3 °T。对饮料在4 ℃下贮藏28 d,贮藏期内饮料活菌数稳定维持在108 CFU/mL,饮料组织状态良好、风味及口感稳定。